应用巢式聚合酶链反应-限制性片段长度多态技术检测乙型肝炎病毒阿德福韦耐药变异-rtN236T变异

目的 建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒（HBV）阿德福韦（ADV）耐药变异-rtN236T变异的快速检测方法。方法 根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物，使野生株（rt236N）PCR产物中含有DraⅠ酶切位点（5’TITAAA3’），而变异株（rt236T）无此限制性酶切位点。选取4份应用ADV治疗1年以上出现HBV DNA反跳的临床耐药慢性乙型肝炎患者血清，经PCR扩增、DraⅠ酶切、3％琼脂糖凝胶电泳，进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析。并选择经该方法鉴定的野生株及变异株各1例进行HBV RT区基因序列分析。结果 自4份血清标本中检测到1例rtN236T变异。所建立的ntPCR-RFLP方法灵敏度高，可以检测到10^3copies／L的HBV DNA；特异性强，其RFLP分析结果与DNA测序结果一致。结论 应用ntPCR-RFLP方法检测rtN236T变异具有灵敏、特异、简便的优点，适用于ADV耐药变异的临床监测工作。     

维甲酸诱导大鼠骨质疏松模型的制作

目的:建立维甲酸诱导雌性大鼠骨质疏松模型。方法:20只4月龄雌性Wistar大鼠随机均分为2组:对照组和实验组,分别给予维甲酸(70mg/kg/次)和生理盐水灌胃4周,末次给药后测量血清Ca、P、雌二醇(E2)、碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)含量,双能X线骨密度仪活体测量腰椎、胫骨以及股骨密度,动物处死后取胫骨行组织学观察。结果:停药后血清学指标测定,实验组血清Ca、P与对照组比较差异无显著性,血清E2明显低于对照组(P<0.01),血清ALP、TRAP明显高于对照组(P<0.01)。腰椎、胫骨及股骨密度检测显示实验组骨密度明显低于对照组(P<0.05),组织学观察亦支持骨密度测量结果。结论:根据血清学指标、骨密度检测及组织学观察结果,表明维甲酸诱导大鼠骨质疏松模型制作成功。     

白细胞介素6基因启动子区-572位点多态性与男性肝细胞癌的发生相关

目的 探讨白细胞介素(IL)6基因启动子区-572位点多态性与男性肝细胞癌(HCC)发生的关系.方法 采用以医院为基础的病例对照研究,以500例经肝组织病理学诊断为HCC,且无其他器官肿瘤史的男性患者作为病例组,以同期来自相同医院创伤骨科和眼科的无肿瘤病史、无长期慢性疾病史的男性患者590例作为对照组.应用ABI 7500fast实时荧光定量PCR仪对IL-6基因启动子区-572位点多态性进行分型.采用x2检验和非条件logistc回归模型比较携带不同基因型人群罹患HCC的风险,logistic回归模型进行交互作用分析.结果 -572位点G/C等位基因、各基因型频率在病例组和对照组中的分布差异均无统计学意义(P＞0.05);多因素logistc回归分析发现,男性携带G等位基因个体(CG+GG)HCC发生风险是CC基因型的1.31倍(95％CI为1.00～1.71).分层分析显示,在HBV感染者中与CC基因型相比,男性携带CG基因型能增加HCC发生的风险(OR=1.60,95％ CI为1.14 ～2.24);趋势x2检验结果显示,个体HCC发生风险随携带等位基因G数量的增加而升高(Ptrend＜0.05).Brelow-Day一致性检验发现HBV感染与IL-6多态性具有交互作用(P＜0.05),HBV感染与携带G等位基因同时存在时的OReg=5.95 (95％ CI为3.99～8.87),且为超相乘交互作用.结论 男性IL-6基因启动子区-572位点多态性可能与HCC发生相关.男性携带G等位基因与HBV感染有超相乘交互作用,两者同时存在可能增加男性HCC发生的风险.     

应用干扰RNA技术抑制乙型肝炎病毒抗原的体外表达

RNA干预（RNAi）是双链RNA（dsRNA）启动的选择性基因沉默作用，是一种基因水平的调控机制。序列特异性小干扰RNA（siRNA）可特异性抑制病毒复制，而HepG2．2．15细胞系包含完整的HBV基因组，能介导HBV的高水平复制与表达，作为siRNA作用的靶向模型，实验结果更客观，更有说服力。     

性激素结合蛋白基因多态性与肝细胞癌患者术后复发关系研究

目的探讨性激素结合蛋白(SHBG)基因Asp327Ash位点单核苷酸多态性与肝细胞癌(Hepa-tocellular Carcinoma,HCC)根治术后早期复发的关系。方法收集131例实施根治性切除术的原发性HCC患者临床病理、血液DNA及预后生存资料,以单因素分析、多因素Cox风险回归分析临床病理及Asp327Asn位点多态性与HCC术后复发关系,用Kaplan-Meier生存曲线描述各基因型的无复发生存时间,并对不同基因型无复发生存曲线进行Log-Rank检验比较。结果全组病例1、2年生存率分别为87%、76%,累积复发率分别为17%、19%。单因素及多因素分析均显示结节数可能与术后复发有关,而Asp327Asn位点多态性可能与术后复发无关。生存分析显示,在单一结节数的HCC患者中,虽然Asp/Asn+Asn/Asn、Asp/Asp基因型无复发生存时间比较差异无统计学意义(P=0.21),但生存曲线后半段明显分离。结论 SHBG基因Asp327Asn位点多态性可能与HCC术后复发无关,但是对于肝脏基本状况较好的HCC患者,该位点多态性可能对其术后远期预后有一定的影响。     

HCV基因6型流行病学研究进展

正HCV是慢性肝病和肝癌的主要原因之一。目前全球约有1.7亿人感染HCV病毒。HCV基因多样性程度高,分为至少6种基因型和至少83种基因亚型,这是HCV感染慢性化的一个重要因素。了解HCV各基因型的流行病学特点将有助于临床诊断、治疗和疾病预防。HCV基因6型有多种亚型,同时特殊的传播途径又加快了这种基因型病毒的传播速度,因此了解HCV基因6型的流行病学特点显得越来越重要。现将相关研究进展总结如下。     

MDM2基因多态性与肝细胞癌临床病理特征的关系研究①

目的：研究MDM2启动子区309位点单核苷酸多态性与肝细胞癌（简称肝癌）临床病理特征的关系。方法：收集349例肝癌病例的临床病理资料,并应用PCR-RFLP法检测患者309位点多态性。结果：X2检验未见其与肝癌临床病理特征有关。但分层分析结果显示：在女性中,其与肿瘤数目、有无癌栓有关;在男性中,其与肿瘤有无癌栓有关;在HBsAg阳性患者中,其与肿瘤数目有关。结论：在某些特征人群中,该位点多态性可能与肝癌预后有关。     

HBVB／C混合基因型对慢性乙型肝炎干扰素α抗病毒疗效的影响

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者B／C混合基因型乙型肝炎病毒（HBV）感染与干扰素α（IFN—α）治疗效果的相关性。方法经IFN—α治疗的HBeAg阳性B／C混合基因型CHB患者,采集治疗基线及治疗12周后血清,扩增HBV全基因组并进行克隆,每份标本17—20个克隆测序并进行序列分析及分子进化分析。结果2例HBeAg阳性B／C混合基因型感染CHB患者,优势病毒株均为C型毒株。经IFN-α治疗后,1例发生完全病毒学应答,1例发生部分病毒学应答并且治疗后B基因型病毒株完全清除。完全应答者与部分应答者治疗前C基因型准种复杂度为0．5562VS0．6305,部分病毒学应答者治疗后全基因组准种复杂度高于治疗前C基因型准种复杂度（0．6305VS0．7200）,全基因组核苷酸水平的平均遗传距离高于治疗前（0．00454VS0．00648核苷酸替换／位点）。结论（1）B／C混合基因型感染CHB患者优势病毒株为C型毒株。（2）B基因型病毒株对干扰素的敏感性高于C基因型,B／C混合基因型感染患者治疗后病毒准种复杂度及准种多样性升高。     

HPLC法同时测定呼伦贝尔产赤芍防治心血管系统疾病有效物质群中3种成分的含量

目的:建立同时测定呼伦贝尔产赤芍防治心血管系统疾病有效物质群中芍药苷、羟基芍药苷、芍药内酯苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Inertsil ODS-SP(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水溶液(梯度洗脱),流速为1.0ml/min,检测波长为230 nm,进样量为20μl。结果:芍药苷、羟基芍药苷、芍药内酯苷的质量浓度分别在10.00¹00.00、1.00100.00、1.00²5.00、0.4025.00、0.40¹0.00μg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r分别为0.999 5、0.999 1、0.999 2);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2%;平均加样回收率分别为98.17%(RSD=1.14%,n=6)、98.08%(RSD=1.50%,n=6)、98.07%(RSD=1.03%,n=6)。结论:该方法操作简便、快速,结果准确,可用于控制呼伦贝尔产赤芍的质量。     

多普勒超声诊断急性输尿管梗阻的实验研究

本研究利用多普勒超声对８例左侧输尿管结扎与８例正常对照家犬在术后２４小时内行双肾内动脉及肾脏超声（ＵＳ）观测，测取双肾内动脉阻力指数（ＲＩ），并与ＵＳ结果对比。结果表明，实验组梗阻侧肾ＲＩ在输尿管梗阻后８小时开始上升，且显著高于对照组肾ＲＩ（Ｐ＜０．００１），实验组双肾ＲＩ差值（＞０．１）显著高于对照组双肾ＲＩ差值（＜０．１）（Ｐ＜０．００１），在输尿管梗阻后８小时，实验组健侧肾ＲＩ显著低于对照组及术前ＲＩ（Ｐ＜０．００１），有１例家犬ＲＩ升高时ＵＳ未显示集合区扩张（１３％）。我们认为多普勒超声对诊断急性输尿管梗阻有重要意义。