微管微创技术在终止早早孕中的应用

目的:探讨微管微创技术应用于终止早早孕(50天以内)手术的可行性。方法:确诊为宫内早早孕(50天以内)并自愿要求终止妊娠的妇女200例,按病人意愿分两组:观察组施行微管微创技术手术86例,对照组施行传统人工流产术114例。了解手术时间、疼痛情况、完全流产率、术中出血量、人流综合征、术后月经恢复情况等。结果:1.观察组手术时间3-10分,出血量3-10ml;对照组手术时间3-12分,出血量5-40ml,两组比较手术时间无显著差异,手术中出血量有显著差异;2.观察组出现较重疼痛为9.3%,对照组出现较重疼痛为66.66%,两组手术疼痛有显著差异;3.观察组术中术后并发症发生3例,发生率为3.5%,对照组手术并发症发生18例,发生率为15.79%,两组比较有显著差异。结论:微管微创技术在终止早早孕手术中有较大优势,值得临床推广。     

丙泊酚复合芬太尼、咪达唑仑用于无痛输卵管结扎术的临床观察

目的探讨丙泊酚复合芬太尼、咪达唑仑用于无痛输卵管结扎术的镇痛效果及不良反应。方法将受术者随机分为三组,每组60例。A组为普鲁卡因局部麻醉组,使用0.5%普鲁卡因行腹部切口部位局部麻醉,剂量40～60ml;B组为氯胺酮复合丙泊酚静脉全麻组,用药剂量:氯胺酮1mg/kg静脉注射后,丙泊酚1.5mg/kg静注维持麻醉;C组为丙泊酚复合芬太尼、咪达唑仑静脉全麻组,用药剂量:咪达唑仑2～4mg静注后,静注复合液15～20ml,复合液为丙泊40ml(400mg)+芬太尼4ml(0.2mg)+麻黄碱1ml(30mg),随后根据受术者情况利用余下的复合液维持麻醉。结果A组完全无痛率28.3%,其中镇痛效果Ⅰ级为8.3%,Ⅱ级为20%。B组完全无痛率100%,其中镇痛效果Ⅰ级为16.7%,Ⅱ级为83.3%,本组有明显的呼吸抑制、循环系统改变及精神症状等不良反应,术后苏醒时间较长;C组完全无痛率100%,镇痛效果全部为Ⅰ级,无明显不良反应,术后苏醒时间短。三组比较:三组之间镇痛效果相比较有显著性差异(p<0.01);B组与C组之间不良反应及苏醒时间相比较有明显差异(p<0.05)。结论丙泊酚复合芬太尼、咪达唑仑用于无痛卵管结扎术,麻醉镇痛效果好、不良反应少、苏醒时间短,是一种安全、有效、理想的静脉麻醉方法。     

联合药物保守治疗异位妊娠38例疗效观察

目的 探讨异位妊娠联合药物保守治疗与血清绒毛膜促性腺激素（β—HCG）水平的关系和临床疗效。方法 选择符合药物保守治疗条件的异位妊娠38例，针对血清β—HCG水平不同，给予甲氨蝶呤（MTX）50mg加生理盐水30ml隔日静脉注射1次，共1～4次，总剂量50～200mg，24h后给予亚叶酸钙（CF）解救，5mg隔日肌注1次共1～4次；同时联合米非司酮口服及丙酸睾酮肌注。结果 38例中成功治愈36例，成功率94．7％。结论针对血清β—HCG水平不同，给予MTX总剂量50～200mg，联合米非司酮口服及丙酸睾酮肌注治疗异位妊娠，是一种安全有效、治愈率高、治愈时间较短、药物不良反应小的保守治疗方法。     

实时荧光定量PCR检测人IL-9 mRNA方法的建立及应用

目的：建立检测人白介素-9（interleukin-9,IL-9）mRNA的SYBR Green I实时荧光定量PCR（real—time fluorescence quantitative PCR,qRT—PCR）方法。方法：分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear ceils,PB—MC）,经PMA和离子霉素刺激活化后提取总RNA并逆转录成cDNA。扩增产物与pMD-18T载体连接构建质粒标准品。采用qRT—PCR方法检测IL-9mRNA的表达水平。评价该方法的线性及特异性,应用该方法检测Graves病患者PBMC中IL-9 mRNA表达水平。结果：建立了人IL-9的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。该法的标准曲线相关系数r^2为0．995～0．998,熔解随线分析产物为单峰。Graves病患者PBMC中IL-9 mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组（P〈0．01）。结论：建立的检测人IL-9 mRNA的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法灵敏、特异性好,为进一步临床应用提供了实验基础。     

Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠GITRL蛋白并鉴定

目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(G ITRL)蛋白。方法:用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切GITRL-PMD18T载体,回收目的基因G ITRL,并定向克隆入穿梭质粒pFastBacHTA中。以pFastBacHTA-G ITRL转化感受态DH10Bac细菌,在DH10Bac细菌内重组pFastBacHTA与杆粒发生转座。筛选阳性克隆,提取重组杆粒,转染Tn昆虫细胞株,获取完整的重组杆状病毒。反复感染Tn细胞,扩增病毒同时表达目的蛋白,用Western blot法进行蛋白鉴定。结果:经核苷酸序列测定及PCR鉴定,成功地获得含GITRL基因的重组杆粒。在杆粒转染的Tn细胞中表现有细胞病变,推断转染成功并获得重组杆状病毒。Western blot法鉴定显示,在Mr20000处有特异性的蛋白条带。结论:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功地表达了小鼠GITRL蛋白,为进一步研究其生物学活性及功能奠定了实验基础。     

附苓方通过DRP1调控糖代谢重编程抑制卵巢癌细胞转移的机制研究

[目的] 研究附苓方(Compound Fuling Granule，CFG)对卵巢癌细胞糖代谢及转移的影响，并探讨其作用机制。[方法] 体外培养人卵巢癌HEY-T30细胞，采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8，CCK-8)检测不同浓度的CFG(0.25、0.5、1、1.5、2 mg·mL-1)干预24 h后各组细胞活力；以Transwell实验检测CFG对HEY-T30细胞迁移的影响；采用乳酸测定试剂盒及葡萄糖检测试剂盒检测CFG对HEY-T30细胞乳酸生成量及葡萄糖消耗量的影响；采用免疫印迹法检测动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1，DRP1)、糖酵解及转移相关蛋白的表达；以Mito-Tracker Red标记线粒体，观察线粒体形态。采用慢病毒转染技术，构建DRP1稳定敲低的人卵巢癌HEY-T30细胞，以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction，Real-time qPCR)检测DRP1的mRNA表达，以乳酸测定试剂盒及葡萄糖检测试剂盒检测CFG对DRP1敲低的HEY-T30细胞乳酸生成量及葡萄糖消耗量的影响，Transwell实验检测CFG对DRP1敲低的HEY-T30细胞迁移的影响，免疫印迹检测CFG对DRP1敲低的HEY-T30细胞转移及糖代谢相关蛋白表达的影响。[结果] 与对照组比较，CFG浓度在0.5、1、1.5、2 mg·mL-1时细胞存活率明显下降(P<0.01)；0.5、1 mg·mL-1浓度组细胞线粒体平均长度明显增大(P<0.01)，DRP1蛋白表达量明显下降(P<0.05，P<0.01)，细胞乳酸生成量及葡萄糖消耗量明显下降(P<0.01)；0.25、0.5、1 mg·mL-1浓度组细胞迁移数量明显减少(P<0.05，P<0.01)。敲低DRP1后，卵巢癌细胞的糖酵解水平及迁移能力减弱(P<0.05，P<0.01)，糖酵解及转移相关蛋白表达有不同程度的下降(P<0.05，P<0.01)，CFG对卵巢癌细胞糖酵解及转移的抑制作用也被减弱。[结论] CFG可能通过DRP1调控糖代谢重编程，从而抑制卵巢癌细胞转移。