Hsp90靶向抑制多肽P7与多西他赛联用对肺腺癌细胞系A549的协同抗肿瘤作用

目的研究热休克蛋白90(Hsp90)双功能靶向抑制多肽LPLTPLP(P7)与临床化疗药物多西他赛(DTX)联用对肺腺癌细胞系A549的影响。方法以DTX与P7单独或联合使用对A549细胞进行处理,48 h后,用CCK-8法评价细胞活性;通过流式细胞计量术检测DTX与P7单独或联合使用后的A549细胞凋亡率;用蛋白免疫印迹技术检测DTX与P7单独或联合使用对A549细胞凋亡以及耐药相关蛋白表达的影响。结果DTX与P7对细胞存活具有协同抑制作用;联合用药组细胞凋亡率为25.8%,显著高于DTX组(P<0.05);联合用药组凋亡相关蛋白Bcl-2、PARP显著下调(P<0.05);cleaved-PARP显著上调(P<0.05);耐药蛋白主要穹窿蛋白(MVP)显著下调(P<0.05)。结论DTX协同靶向性多肽P7能显著提高A549细胞的凋亡率,其机制可能与降低凋亡抑制蛋白Bcl-2表达水平、失活DNA修复酶PARP及降低耐药蛋白MVP表达有关。     

谷红注射液对脑缺血再灌注大鼠皮层血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨谷红注射液对脑缺血再灌注大鼠梗死侧皮层区血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠30只,分为假手术组(n=6)、模型组(n=6)、乙酰谷酰胺组(n=6)、红花注射液组(n=6)和谷红注射液组(n=6)。采用大鼠大脑中动脉梗阻(MCAO)2 h再灌注模型,再灌注24 h后腹腔注射给药,连续14 d。治疗后,ELISA法检测各组大鼠皮层区VEGF表达。结果与假手术组相比,模型组VEGF表达显著降低(P0.001)。与模型组相比,乙酰谷酰胺组和谷红注射液组VEGF的表达提高(P0.05)。结论谷红注射液能提高大鼠脑缺血再灌注后皮层区VEGF的表达,可能是其发挥抗脑缺血再灌注损伤的作用机制之一。     

中枢Sigma受体药理学研究进展

广泛分布于中枢神经系统的Sigma (σ)受体在调节NMDA能、多巴胺能、胆碱能神经系统和神经肽及神经甾体激素功能中发挥重要作用 ,参与学习记忆、条件性恐惧应激反应、精神分裂症等生理病理过程。σ受体药理学的研究将为临床诊断治疗提供新的靶点。     

HSP90靶向抑制剂P7与阿霉素联用对急性髓性白血病细胞凋亡的协同增效作用

目的探讨热休克蛋白HSP90靶向抑制多肽LPLTPLP(P7)与临床标准化疗药物阿霉素(DOX)联用对急性髓性白血病细胞系NB4的影响。方法多肽P7与DOX单药或两药联合处理NB4细胞系48 h后,CCK-8法检测细胞的存活,并用等效图解法解析其作用;流式细胞计量术检测NB4细胞凋亡水平;蛋白免疫印迹检测NB4细胞凋亡蛋白PARP的表达水平及剪切水平。结果 P7与DOX对细胞存活具有协同抑制作用;P7与DOX联合用药组细胞凋亡率为63.9%,约等于P7和DOX两药单独用药时凋亡率之和;两药联用组凋亡相关蛋白PARP总蛋白表达显著下调(P0.01),cleaved-PARP的水平显著上调(P0.01)。结论 P7协同DOX能显著提高NB4细胞的凋亡比例,其机制可能与DNA修复酶PARP的失活有关。     

长期低剂量性激素替代疗法对绝经后妇女外周苯二氮卓受体的影响

目的本实验研究长期低剂量激素替代疗法(HRT)对绝经后妇女体内激素水平及外周型苯二氮卓受体(PBR)的影响。方法筛选北京协和医院医护人员中符合入组条件并接受HRT治疗持续4年以上志愿者83人,同时以年龄为配比条件筛选出99人作为对照。以酶联免疫反应法测血浆雌二醇、孕酮、睾酮含量;以同位素标记法测外周血PBR结合活性。结果与对照组相比,HRT组受试者血浆中雌二醇维持在较高水平,两组之间在各个年龄段都有显著差异(P<0.05),而血浆中孕酮、睾酮水平未见显著差异。各年龄段HRT组PBR水平均高于对照组,并在50～59年龄段两组之间有显著性差异(P<0.01)。受试者血中PBR结合活性与雌激素水平呈明显相关性。结论长期低剂量HRT使绝经后受试者体内雌激素水平维持在一个较高浓度的同时血小板上PBR亦处于较高的水平。     

Hsp90在胰腺癌组织中表达升高及其临床病理意义

目的分析热休克蛋白90(Hsp90)在胰腺癌组织中的表达水平与肿瘤发生、发展和转移的关系及其对预后的影响。方法用市售组织芯片,通过免疫组化法测定2009年1月至2013年8月期间病理确诊为胰腺癌的63例患者癌标本和癌旁组织中的Hsp90表达,用ANOVA或者t检验分析Hsp90表达水平与患者相关临床病理指标之间的关系。结果胰腺癌组织中Hsp90的表达量显著高于癌旁组织,与肿瘤的病理分级、淋巴结转移、临床分期、TNM分期有关(P0.05)。结论胰腺癌组织中高表达Hsp90与胰腺癌的高侵袭、高转移能力密切相关,高表达的Hsp90可能作为胰腺癌的预后指标以提示患者预后差。     

儿茶酚胺类应激激素促进小鼠肝癌细胞系H22中G0期细胞周期再入

目的探讨应激激素对小鼠肝癌细胞系H22中G_0期细胞周期再入的作用及机制。方法 CD44和CD133流式抗体染色确定H22细胞中是否存在肿瘤干细胞;体外应激激素皮质酮(CORT)、肾上腺素(EPI)和去甲肾上腺素(NE)处理H22细胞48 h后,Ki-67和PI流式抗体染色检测G_0期细胞比例以及细胞周期变化;相应的受体拮抗剂验证介导G_0期细胞周期再入的受体亚型;Western blot检测细胞周期相关蛋白Skp2和p27~(kip1)表达水平。结果 H22细胞中肿瘤干细胞(CD44~+CD133~+)比例为0.80%±0.15%;与对照组相比,皮质酮处理后G_0期细胞比例不变,而儿茶酚胺类应激激素EPI和NE处理后G_0期细胞分别降低了62.50%和53.00%,同时,EPI和NE组H22细胞总数增加,G_2/M和S期细胞比例升高;Skp2蛋白表达显著升高(P0.05),p27~(kip1)蛋白表达显著降低(P0.05);与EPI和NE组相比,添加α1肾上腺素能受体拮抗剂特拉唑嗪和哌唑嗪处理后G_0期细胞比例升高;哌唑嗪处理后Skp2蛋白表达显著降低(P0.05),p27~(kip1)蛋白表达显著升高(P0.05)。结论儿茶酚胺类应激激素通过激活α1肾上腺素能受体促进小鼠肝癌细胞系H22中G_0期细胞周期再入,其机制可能与S期激酶相关蛋白Skp2表达升高及其靶蛋白p27~(kip1)的降解有关。     

HSP90抑制剂抑制糖酵解并促进小鼠肝癌细胞系H22凋亡

目的探讨热休克蛋白HSP90抑制剂对小鼠肝癌细胞糖酵解和细胞凋亡的影响及其潜在的作用机制。方法皮质酮(CORT)、糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486和HSP90抑制剂17-AAG处理小鼠肝癌细胞系H22后检测乳酸和ATP水平;流式细胞仪检测H22细胞凋亡;CORT、RU486和17-AAG分别处理H22细胞,利用Western blot检测GR及PI3K/Akt通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,CORT促进GR核转位,RU486使其水平降低,与CORT单独处理相比,CORT与17-AAG共处理可抑制CORT对GR核转位的促进作用(P0.05);CORT处理后乳酸和ATP水平显著升高(P0.05),与17-AAG共处理后此作用被显著抑制(P0.05),乳酸和ATP水平分别下降了24%和17%;17-AAG可显著升高H22细胞总凋亡率,呈现剂量依赖性(P0.05);与对照组相比,CORT显著上调pAkt表达水平,与17-AAG共处理后表达水平显著下降(P0.05)。结论 HSP90抑制剂17-AAG通过抑制GR核转位从而抑制糖酵解并促进肝癌细胞系凋亡,其机制可能与对PI3K/Akt通路的调控有关。     

肿瘤干细胞与干细胞因子

组织结构的异常生长往往会导致良性或恶性肿瘤的形成,前者不具有侵袭性并且经过手术移除后不再复发,而后者往往伴随着无限生长、高转移和易复发的特点。随着研究的不断进展,人们对肿瘤的发生、发展有了更进一步的认识,并提出了肿瘤     

绝经后妇女长期低剂量激素替代疗法的研究——Ⅳ．脑代谢产物的磁共振波谱分析

目的应用质子磁共振波谱（MRS）观察长期低剂量激素替代疗法（HRT）对绝经后妇女脑组织代谢产物的影响,并与载脂蛋白E不同基因型（ApoEε3和ε4）携带者进行比较分析。方法筛选北京协和医院151例绝经后健康女职工纳入了本研究,其中68例采用了小剂量HRT（4-33年,平均11．7年）,为HRT组。对照组83例为未经HRT的本院志愿者。所有研究对象采用聚合酶链反应限制性内切酶多型性（PCR—RFLP）方法测定ApoE基因分型,并采用3．0TVH3扫描仪行脑部MRS分析,以谱线下积分面积计算脑代谢产物N-乙酰天门冬氨酸（NAA）、胆碱化合物（Cho）、肌醇（mI）和肌酸（Cr）。结果NAA主要存在于神经元及其轴索。在ApoEeε基因者中,HRT组和对照组灰质、白质和海马的代谢产物无明显差异,但在ApoEε4基因携带者中,NAA／Cr比值HRT组为（1．54±0．08）,对照组为（1．45±0．13）,呈显著性差异（P〈0．05）。结论HRT对与认知相关的脑海马神经元有保护作用,特别对携带阿尔兹海默病（AD）的易感基因携带者具有重要意义。