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HIV感染的检测在预防AIDS传播方面有重要作用。本研究以重组抗原pG1免疫Balb/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了5株识别HIV核心抗原p24的杂交瘤细胞株D3,1H1,2G10,3H5和4H6。经鉴定这5株McAb与其它病毒抗原无交叉反应,分别识别3个不同的抗原表位。应用两株识别不同表位的McAb2G10和3H5建立了检测HIVp24抗原的夹心ELISA法,并初步检测了24份HIV抗体阳性血清。 相似文献
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人CD40—Ig融合蛋白表达载体的构建及其在COS—7细胞的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
CD40/CD40L途径是除B7/CD28途径之外的重要的共刺激信号转导途径,在T细胞活化过程中扮演着十分关键的角色。因而,该途径可能在同种移植排斥的诱导和效应阶段的不同时期发挥关键作用。本研究旨在获得人CD40分子胞外区和人IgG1Fc段的融合蛋白,以探索阻断CD40/CD40L共刺激途径在免疫治疗中的潜在应用。首先,从人B淋巴瘤细胞系Daudi中提取细胞胞总RNA,利用RT-PCR技术扩增人C 相似文献
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目的:检测造血生长因子受体FLT3 在非造血来源的黑素瘤细胞系B16 中的表达,并研究其配基FLT3-Ligand(FL)对B16 细胞的作用。方法:通过RT-PCR检测B16 细胞中FLT3 m RNA的表达,流式细胞仪检测FLT3 蛋白在B16 细胞表面的表达,在培养液中加入不同浓度的FL对B16 细胞进行培养。结果:FLT3 在B16 细胞中有m RNA 的表达,在B16 细胞表面有蛋白质的表达。FL对B16 细胞的生长有抑制作用,并且这种抑制作用是浓度依赖性的,在一定的浓度范围内随着FL浓度的增高而增强。结论:FLT3 的分布不仅仅局限于小鼠的造血系统和神经系统,也表达于上皮性的肿瘤细胞B16 中,并在其配基FL的作用下抑制B16 细胞的生长。 相似文献
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人CD40-Ig融合蛋白在CHO细胞中的表达与纯化研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 建立稳定表达CD40-Ig融合蛋白的工程细胞株,获得大量融合蛋白以研究靶向阻断CD40:CD40L途径防治移植物抗宿主病(GVHD)策略的应用潜力。方法 自真核瞬时表达载体pIG/40Ig中切下CD40-Fc融合基因,插入pcDNA3.1载体中构建稳定表达载体。利用脂质体Lipo-fectamine将该载体转染CHO细胞,G418筛选抗性克隆;夹心ELISA法检测上清中CD40-Ig融合蛋白的表达;Westem blot法鉴定其免疫学活性。利用有限稀释法对筛选出的混合克隆单克隆化。滚瓶法无血清大批培养工程细胞,ProteinA亲和层析法纯化,SDS-PAGE后薄层扫描分析纯度。利用流式细胞术检测该蛋白与Jurkat细胞表面CD40L的结合功能。结果 CD40-Fc融合基因插入pcDNA3.1载体后构建成功稳定表达载体p3.1/40Ig,转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达CD40-Ig融合蛋白的基因工程细胞株,命名为p3.1/40Ig,转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达CD40-Ig融合蛋白的基因工程细胞株,命名为B2。ProteinA亲和层析纯化融合蛋白纯度达95%以上,该融合蛋白可特异结合Jukat细胞表面的CD40L。结论 CD40-Ig融合蛋白可模仿天然分子与其配基结合,为研究靶向CD40:CD40L途径的治疗制剂在防治GVHD中的潜在应用提供了有用的工具。 相似文献
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阻断CD40/CD40L相互作用延长移植物抗宿主病小鼠存活时间 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:克隆表达人CD40-Ig融合蛋白,并在小鼠移植物抗宿主病(GVHD)模型中研究利用其阻断CD40/CD40L相互作用的保护性效果。方法:利用RT-PCR技术自人Daudi细胞系中克隆CD40基因胞外区,并插入含有人IgG1Fc段基因的pIG1载体中,构建携带CD40-Fc融合基因的瞬时表达载体转染COS-7细胞,间接夹心ELISA法检测CD40-Ig融合蛋白的表达,再将CD4-Fc融合基因连接入pcDNA3.1的相应位点构建稳定表达载体转染CHO细胞,筛选分泌CD40-Ig融合蛋白的阳性重组CHO细胞并进行无血清大规模培养,收获培养上清利用ProteinA亲和层析法纯化融合蛋白。SDS-PAGE,Western blot和配基结合实验鉴定CD40-Ig的性质,将C57BL6/J(H-2^b)小鼠的脾细胞经尾静脉注射入亚致死剂量照射的BALB/c(H-2^d)小鼠体内建立急性GVHD模型。通过体内注射CD40-Ig融合蛋白评价其对急性GVHD小鼠的保护效果。结果:按上述方法分别构建了哺乳动物表达载体pIG/40Ig和p3.1/40Ig。ELISA和Western blot确定在COS-7和CHO细胞中表达了CO40-Ig融合蛋白,SDS-PAGE结果显示该蛋白具有通过二硫键结合的二聚体结构并以同源二聚体的形式存在,纯化的CD40-Ig可与CD40L结合,体内应用CD40-Ig融合蛋白治疗可延缓小鼠GVHD病情发展并显著延长小鼠的平均存活时间。结论:CD40/CD40L相互作用在GVHD的病理过程中可能扮演了十分重要的角色,提示人CD40-Ig融合蛋白在临床预防和治疗GVHD方面的巨大应用潜力。 相似文献
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抗HCV分片段酶联免疫检测试剂的临床评价 总被引:6,自引:0,他引:6
在克隆表达了丙型肝炎病毒不同区抗原(HCV-C、NS-3、NS-4、NS-5)的基础上,研制出抗HCV抗体分片段酶联免疫检测试剂。对该试剂特异性、灵敏度进行了临床评价。结果显示该试剂具有良好的特异性和灵敏度。 相似文献
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复制型DNA疫苗是基于常规DNA疫苗和RNA复制子疫苗的基础上发展起来的一种新型疫苗,既具有稳定性好、安全性高的优点,又实现了外源基因的高效表达。本文就复制型DNA疫苗的构建、作用机制、优点以及最新的研究进展作一简要综述。 相似文献
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分泌抗HIVp24单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其初步鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
以含人免疫缺陷病毒(HIV)核心抗朱p24全部氨基酸序列的重组蛋白pG1免疫小鼠,用免疫脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地建立了5株分泌抗HIVp24单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。经鉴定,这5株McAb与乙肝核心抗原(HBcAg),丙肝C区,NS-3区抗原不发生交叉反应,而与重组p24抗原产生特异反应,本组单抗的研制成功为建立检测HIVp24抗原的方法奠定了基础。 相似文献
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DNA免疫法制备抗人Flt3-ligand单克隆抗体及其鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
Flt3 ligand(FL)是近几年新发现的一种相对分子质量 (Mr)为 30 0 0 0的糖蛋白 ,其中有Mr 为 120 0 0的糖类〔1,2〕,主要参与体内的造血调控。在体外培养体系中 ,Flt3 ligand可与IL 3,IL 6,SCF及GM CSF等细胞因子协同 ,刺激造血干 /祖细胞增殖 ,并能协同诱导造血干 /祖细胞分化为树突状细胞等 ,因而在造血干 /祖细胞的体外培养中获得广泛应用〔1,3〕。DNA免疫法是一种新的制备单克隆抗体(mAb)的免疫方法 ,它不需要制备大量抗原 ,只需将编码抗原的cDNA克隆到真核表达载体上 ,用重组质粒对动物… 相似文献