超声微泡介导绿色荧光蛋白基因在视网膜神经节细胞表达的实验研究

目的探讨超声微泡介导绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因在视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)中的转染效率、优化转染的条件及毒性。方法体外培养RGCs,以GFP基因为报告基因,微泡造影剂(声诺维)为载体,用超声辐照介导质粒pEGFP-N1转染RGCs。实验组为质粒组、微泡+质粒组、超声+质粒组、超声+微泡+质粒组,超声+微泡+质粒组根据转染条件不同分成亚组;对照组为空白对照。荧光显微镜和流式细胞仪测定GFP的表达,MTT法检测RGCs的活性。结果与超声+质粒组相比,超声+微泡+质粒组RGCs转染率增加约5倍。优化转染条件后,频率300kHz,声强1.25W/cm2,连续波,辐照时间60s,微泡浓度45μg/ml,质粒浓度50μg/ml时,24孔板培养的RGCs转染率为(26.87±3.12)%。毒性实验证明超声微泡在该条件下进行基因转染对RGCs无毒副作用。结论在一定条件下,超声破裂微泡能增强基因的转染与表达,有望成为一种安全、有效的基因载体。     

超声微泡介导bcl-xl基因抗视网膜神经节细胞凋亡作用的实验研究

目的评价超声微泡介导bcl-x1基因抗视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡的作用。方法体外混合培养Long Evans大鼠RGCs，并建立N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）损伤的RGCs凋亡模型。将体外培养的RGCs分为A组（正常对照组），B组（NMDA组），C组（bcl-x1转染＋NMDA组）；其中C组在加入NMDA前48h用超声微泡介导bcl-x1转染RGCs。转染48h后采用免疫组化分析转染细胞和未转染细胞的bcl-x1蛋白水平；加入NMDA36h后采用吖啶橙／溴化乙锭（AO／EB）双荧光染色检测细胞凋亡的形态特征，琼脂糖电泳检测细胞凋亡DNA片断。结果免疫组化检测表明转染细胞与未转染细胞的bcl-x1蛋白表达水平有差异，AO／EB检测发现B组可见大量凋亡小体，C组可见少许凋亡细胞。琼脂糖电泳检测亦发现B组呈典型的DNA“梯度”条带，而A组和C组无明显的DNA“梯度”条带。结论超声微泡介导bcl-x1基因抗视网膜神经节细胞凋亡有一定作用，有可能为视网膜视神经疾病的基因治疗提供一种新的方法。     

术前轻度认知功能障碍对早期术后认知功能障碍的预测价值

[摘要]目的：评估非神经/非心脏手术术前存在MCI的患者术后早期POCD的发病率，明确MCI对术后发生早期POCD的预测价值。方法：回顾性分析2018年9月至2021年6月上海市同济医院行非心脏/非神经外科共106例手术患者的病例资料，所有入组患者于手术前至少一天和术后第七天进行神经心理学评估,排除4例MMSE＜23分。将研究对象随机分为建模组（87例）和验证组（15例）。建模组人群根据MCI诊断标准将患者分为MCI组和非MCI组，比较其术后早期POCD的发病率。同时对POCD组和非POCD组进行比较，分析各因素与发生早期POCD之间的关系，找出具有统计学意义的因素（P<0.05），并运用Logistic回归分析确定发生早期POCD的危险因素，构建发生早期POCD的预测模型。验证组人群用来对预测模型进行外部验证，进而评估该预测模型的诊断价值。结果：建模人群中MCI患者28例（32.2%），发生早期POCD的患者6例（21.4%），非MCI患者59例（67.8%），发生早期POCD的患者16例（27.1%），两组患者发生早期POCD的风险无统计学意义（P=0.568，P>0.05）。在对各种相关因素（P<0.05）与早期POCD发生之间的关系进行Logistic回归分析后发现，数字符号替代测试（符号）评分结果是发生早期POCD的独立危险因素(P=0.03)。对构建的预测模型进行外部验证，建模组AUC值为0.883（95%CI0.807-0.959），验证组AUC值为0.840（98%CI0.583-1.000），无论是建模组还是验证组，其校准曲线均提示该预测模型具有较好的稳定性。结论：术前预先存在MCI并不影响术后早期POCD的发生。     

异基因造血干细胞移植后EB病毒再激活的研究进展

EB病毒再激活是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后常见的并发症,病死率达13.8％.allo-HSCT后机体的免疫抑制状态和慢性炎症反应可促进EB病毒的复制.近年来,端粒特异性逆转录酶(TERT)调控EB病毒发生裂解感染的机制得到进一步阐明.allo-HSCT后EB病毒再激活与多种因素相关,其治疗仍较困难.抢先治疗可以有效降低EB病毒感染相关死亡率,但该治疗方法的干预时机仍未完全明确.利妥昔单抗及早期减停免疫抑制剂广泛应用于allo-HSCT后EB病毒再激活的临床治疗,而目前该病免疫疗法的研究也取得较大进展.笔者拟就allo-HSCT术后EB病毒再激活的感染机制、影响因素、诊断及治疗进行综述.     

基质金属蛋白酶在钙化主动脉瓣中的表达及意义

目的 研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织抑制物(TIMP-2)在退行性钙化主动脉瓣中的表达及意义.方法 对15例钙化主动脉瓣膜及10例非钙化瓣膜进行免疫组化染色(SP法)及光镜电镜观察.观察MMP-2及TIMP-2的表达情况及瓣膜形态学改变.结果 钙化组MMP-2及TIMP-2表达均明显高于非钙化组(均P<0.01),细胞外基质及内皮下可见大量棕黄色颗粒,非钙化瓣膜仅可见散在的棕黄色颗粒分散在细胞外基质中.电镜下钙化瓣膜内皮损伤,间质钙化明显.结论 MMP-2及TIMP-2的表达在瓣膜钙化中起重要作用,其不仅影响基质退变还参与基质的重构,但其在钙化瓣膜中的活化和调节机制尚不清楚,有待更进一步研究.     

孕酮对缺血再灌注视网膜caspase-3、bax表达的影响

目的研究孕酮(Progesterone PROG.)预治疗对网膜缺血-再灌注损伤caspase-3、bax表达的影响,探讨其神经保护机制。方法通过升高兔眼内压制作视网膜缺血模型,将大白兔随机分为PROG组,对照组。造模前24 h,PROG组耳缘静脉注射孕酮4mg/kg,对照组注射等量BBS。观察造模后不同时间点两组视网膜组织学变化及caspase-3、bax表达。结果造模后各时间点HE染色对照组视网膜内层厚度均比PROG组薄,内核层细胞数较少(P<0.05);对照组和PROG组造模后24 h均检测出caspase-3、bax表达,PROG组较少(P<0.05)。结论 PROG预治疗可减少凋亡,下调caspase-3、bax表达可能参与神经保护。     

非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏、骨骼肌、脂肪组织脂联素受体的表达

目的 探讨非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝脏、骨骼肌,腊肪组织脂联素受体表达的变化.方法 高脂餐喂养20周,建立NASH大鼠模型,设普通饲料对照组,观察体质量、血搪、血脂,肝功能和肝组织病理,并以实时荧光定量PCR法检测大鼠肝脏、骨骼肌,内脏脂肪纽织AdipoR1、AdipoR2mRNA的表达.结果 与普通饲料对照组相比,模型组大鼠的体质量、血搪、TG,TCH、ALT和AST升高,肝组织脂防变(Z=-2.304,P=0.021),炎症(Z=-2.541,P=0.011)、纤维化(Z=-2.408,P=0.016)王著增加,肝脏的AdipoR1(0.98±0.04vs2.13±0.13)和AdipoR2(0.34±0.10vs1.75±0.19)表达降低,脂肪组织AdipoR1(0.19±0.11vs1.39±0.14)和AdipoR2(0.47±0.07vs1.58±0.18)表达降低,骨骼肌AdipoR1(6.98±0.56vs2.47±0.66)和AdipoR2(4.52±0.97vs0.46±0.15)表达上升,差异均有统计学意义(p<0.05).结论 高脂餐诱导的NASH大鼠肝脏及脂肪组织AdipoR1、AdipoR2mRNA表达降低,骨骼肌AdipoR1、AdipoR2表达增加,提示NASH发病可能涉及肝脏,骨骼肌、脂肪组织脂联素受体表达异常.     

形态测量学在阿尔茨海默病和轻度认知障碍的早期诊断及病程转化预测的应用研究

阿尔茨海默病(AD)和轻度认知障碍( MCI)的发生率不断攀升,然而目前却尚无有效的方法预防或者治疗.由于形态学测量方法可以全面、客观地获取脑结构的定量信息,利用形态学测量方法探讨MCI和早期AD的诊断,以及MCI转化AD的预测研究已受到了国内外研究人员的关注.形态测量学在脑功能方面研究的主要方法有基于体素的形态学测量方法(VBM)、基于张量的形态测量学( TBM)和基于形变的形态测量学(DBM)3种方法,其中,尤以VBM受到国内外科研工作者的关注,并取得了一些研究成果.随着成像技术的进步,人脑解剖图像和结构图像分辨率不断提高,形态测量学技术特别是VBM方法在MCI和AD疾病诊断及转化预测方面的研究取得了一些进展,但尚处于起步阶段,许多问题还有待于深入研究来加以解决.     

糖皮质激素通过抑制p38MAPK信号通路缓解大鼠内毒素性急性肺损伤

目的： 研究糖皮质激素对内毒素导致的急性肺损伤的影响及作用机制。方法: 成年雄性SD大鼠被随机分为6组：对照组（control 组,n=6）;LPS组（n=24）;地塞米松＋LPS组（Dex＋LPS组,n=24）;糖皮质激素受体拮抗剂RU486组（RU486组,n=6）;RU486+LPS组（n=24）以及RU486＋Dex＋LPS组（n=24）。除对照组和RU486组外,其余4组在注射LPS后1、3、6、12 h又被分为4个亚组。分别检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α和IL-6的浓度,肺组织的病理变化,以及肺组织中p38MAPK的活化状态和MKP-1的表达情况。另外又分别比较了LPS组与RU486＋LPS组、Dex＋LPS组与RU486＋Dex＋LPS组大鼠48 h的死亡率。结果: 注射LPS后,BALF中TNF-α 和IL-6的浓度明显升高（P<0.05）,HE染色显示肺组织内广泛炎症反应。而这些现象在应用RU486后变得更加严重,并且RU486＋LPS组的死亡率也明显高于LPS组(P<0.05)。地塞米松能明显缓解LPS导致的肺损伤,糖皮质激素受体(GR)参与此作用。另外,在注射LPS后,肺组织中磷酸化的p38MAPK的表达明显升高,而MKP-1的表达则明显受到抑制。地塞米松能显著降低p38MAPK的磷酸化,这一作用也是GR依赖的。结论: 糖皮质激素活化GR诱导肺组织中MKP-1的表达,进而抑制p38MAPK的活化,从而发挥其抗炎作用,缓解LPS诱导的肺损伤。     

超声微泡介导增强型绿色荧光蛋白基因转染视网膜神经节细胞的体内实验

BACKGROUND： Studies have demonstrated that ultrasound-mediated microbubble destruction significantly improves transfection efficiency of enhanced green fluorescent protein （EGFP） in in vitro cultured retinal ganglial cells （RGCs）. OBJECTIVE： To investigate the feasibility of ultrasound-mediated microbubble destruction for EGFP transfection in rat RGCs, and to compare efficiency and cell damage with traditional transfection methods. DESIGN, TIME AND SETTING： In vivo, gene engineering experiment. The study was performed at the Central Laboratory, Institute of Ultrasonic Imaging, Chongqing Medical University from March to July 2008. MATERIALS： Eukaryotic expression vector plasmid EGFP and microbubbles were prepared by the Institute of Ultrasonic Imaging, Chongqing Medical University. The microbubbles were produced at a concentration of 8.7 × 10^11/L, with a 2-4 μm diameter, and 10-hour half-life in vitro. METHODS： A total of 50 Sprague Dawley rats were randomly assigned to four groups. Normal controls （n = 5） were infused with 5 μL normal saline to the vitreous cavity; the naked plasmid group （n = 15） was infused with 5 pL EGFP plasmid to the vitreous cavity; in the plasmid with ultrasound group （n = 15）, the eyes were irradiated with low-energy ultrasound wave （0.5 W/cm^2） for a total of 60 seconds （irradiated for 5 seconds, at 10-second intervals） immediately following infusion of EGFP plasmids to the vitreous cavities. In the microbubble-ultrasound group （n = 15）, the eyes were irradiated with the same power of ultrasonic wave immediately following infusion of microbubbles containing EGFP plasmids to the vitreous cavities. MAIN OUTCOME MEASURES： After 7 days, retinal preparations and EGFP expression in RGCs were observed by fluorescence microscopy. RGC quantification in the retinal ganglion cell layer was performed. In addition, EGFP mRNA expression was semi-quantitatively determined by RT-PCR. RESULTS： The transfection efficiency of EGFP to RGCs by microbubbles with ultrasound was significantly greater than the other groups, and no obvious damage was detected in the RGCs. CONCLUSION： Under irradiation of low-frequency ultrasound waves, ultrasound-mediated microbubble destruction was effective and resulted in safe transfection of the EGFP gene to the RGCs.