中成药DNA提取技术优化及其在人参类制剂分子鉴定中的应用

目的 建立并完善从中成药及保健品中提取DNA的有效方法,并在人参类制剂中进行验证。方法 使用中成药和保健品中常用的辅料(如淀粉、蔗糖、葡萄糖等)模拟CTAB法提取DNA过程,用以筛选影响提取DNA效率的因素;使用甲醇作为沉淀试剂优化传统的CTAB法,并使用MAS-PCR方法对市场上人参类中成药及保健品进行分子鉴定,以验证优化的技术。结果 中成药及保健品中的淀粉(包括药源性淀粉和辅料添加的淀粉)通过CTAB反应后生成极性较大的复合物,其与70%乙醇不能互溶,而且在碱性条件下对DNA有强烈的溶解作用,从而影响了CTAB法提取DNA的提取效率;利用甲醇作为沉淀试剂能够有效去除CTAB裂解过程中产生的高极性复合物的影响,70%甲醇-醋酸钠溶液能够有效提取中成药及保健品的DNA;利用优化的DNA提取方法和MAS-PCR法实现了11种市售人参类制剂的快速分子鉴定,结果显示8种与商品描述一致、1种有掺伪情况、2种为伪品。结论 使用甲醇作为沉淀试剂优化传统的CTAB法,可以较好地克服中药制剂中淀粉对DNA提取的不利影响,可以有效地实现基于DNA的中药制剂分子鉴定。     

3 种常见尘螨分子进化关系的初步探讨

为探讨粉尘螨（Dermatophagoides farinae）、屋尘螨（Dermatophagoides pteronyssinus）和梅氏嗜霉螨（Euroglyphus maynei）的分类，采用PCR扩增获得粉尘螨1类(Der f 1)和2类变应原(Der f 2)的cDNA片段，经测序后推导氨基酸序列, 与GenBank中的屋尘螨Der p 1、Der p 2和梅氏嗜霉螨Eur m 1、Eur m 2氨基酸序列进行比对，分别构建1类和2类变应原分子进化树。结果显示变应原之间相似度，Der p 1与Eur m 1为86%，Der p 1与Der f 1为83%；Der p 2与Eur m 2为87%，Der p 2与Der f 2为67%。用变应原氨基酸序列构建分子进化树，1类变应原Der p 1与Eur m 1聚成一簇，2类变应原Der p 2与Eur m 2聚成一簇。结果表明屋尘螨和梅氏嗜霉螨亲缘关系较近，而与粉尘螨较远。     

闭合尺桡远端骨折94例手术与非手术治疗体会

目的探讨尺桡远端骨折稳定性及手法与手术治疗愈合时间。方法94例尺桡远端骨折（含骨骺分离骨折）病人随机分为两组。手法复位外固定组。手术切开复位内固定组。结果参照1975年全国骨科会议《骨折疗效标准草案》评定，手法组显著优于手术组，有显著的临床意义。结论对尺骨和桡骨其中之一折端相对稳定者，主张手法复位外固定，愈合时间显著缩短。     

中西医结合治疗溃疡性结肠炎46例

<正> 我院自1990年6月至1996年2月,应用中西医结合方法治疗溃疡性结肠炎46例,收到满意疗效,现报告如下。 1 临床资料 本组46例中,男26例,女20例,年龄18—46岁;病史最短8个月,最长16年。46例患者起病均缓慢,腹痛、腹泻每日3—5次,大便呈糊状软便,常     

针灸对细胞免疫功能的影响(综述)

<正> 临床和实验研究都表明,针灸对细胞免疫功能具有重大影响。其报告的文献颇多,亦有此方面的文献综述,但仍欠完整。尤以近年研究的新成果,缺漏不少。为此,笔者仅就有关资料作一补充综述。一、针灸对细胞免疫若干客观指标的影响(一)针灸对白细胞总数及分类的影响有人对8例健康人捣刺双侧合谷及足三里发现,原来白细胞在6000/mm~3。以上者,针后均见下降;而针前在6000/mm~3以下者,针后均见上升;且原来越低者上升越显著。在临床实践中也观察到,针刺治疗某些炎症初期白细胞总数不高时,针后可使其升高;而针刺治疗某些炎症白细胞总数升高者,针后又使其下降。北京肿瘤医院放射科曾报道,针刺治疗放疗反应引起的白细胞减少症,有效率达90%。最近有人又报告针剌治疗放疗及化疗引起的白细胞减少症,针后白细胞总数平均上升5,128/mm~3。但亦有人针刺大椎、肺俞、足三里治疗热带嗜酸性白细胞增多症,有效率达100%。基于上述事实,故认为针刺     

张锡纯运用山茱萸特色初探

山茱萸味酸,性微温,归肝肾二经,具补肝肾,收敛之功。张锡纯在《医学衷中参西录》中载有近二十首方用之,别具特色,现就其运用特色初探于后,以飨同道。 一、补虚固脱救危候 张氏认为,凡人体元气之脱,皆脱在肝,故人虚极之时,其肝风必先动;肝风动,是元气欲脱之先兆,此时,治疗当以补虚固脱为先。张氏曰:“萸肉救脱之功,较参、术、芪不更胜哉!”又     

浅论中医学模式的方法论问题

医学模式是一个重要的理论概念,它勾画出医学科学总的特征,并直接影响人们认识和处理医学研究对象的思维方式,故越来越引起医学界的重视。生物医学模式向生物心理社会医学模式的转变将是西医学一场深刻的革命,必将推动医学科学的加速发展。显然,对中医学模式的探讨,同样具有重要的意义。关于中医学模式的刍型,何氏提出“形神——环境模式”说,刘氏提出“天人相应模式,”说,然其方法论基础是不谋而合的,     

雷公藤甲素急性中毒对大鼠心肌的损伤

目的观察雷公藤甲素(TP)急性中毒的心肌毒性。方法用急性毒性实验统计学软件AOT425StatPgm上下增减剂量法检测po给予TP的半数致死量(LD50)。将60只大鼠分为正常对照组,TP0.6,1.2和2.4mg·kg-1组,除正常对照组外,大鼠一次性ig给予TP。观察其外观体征和行为活动,测定心电图;Aeroset全自动生化分析仪检测血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;HE染色观察心肌组织病理改变;用图像分析技术测定心肌损伤面积百分比;透射电镜观察心肌超微结构的变化;免疫组化SP法测定心肌细胞肌钙蛋白(CTnT)的表达。结果雄性SD大鼠poTP的LD50值为1.19mg·kg-1。大鼠ig给予TP0.6,1.2和2.4mg·kg-1后15～20h,TP1.2和2.4mg·kg-1组心率与对照组比较明显减慢(P<0.01),并可见S-T段压低、T波高尖、Q波增宽和脱失等心电图改变。大鼠ig给予TP0.6,1.2和2.4mg·kg-1后20h,血清CK和LDH活性较正常对照组485±70和(712±105)U·L-1明显升高,CK活性分别为661±60,917±101和(1220±157)U·L-1,LDH活性分别为1013±155,1362±208和(2013±224)U·L-1。HE染色结果表明,心肌损伤面积随TP剂量增加而增大(r=0.8,P<0.01),心肌组织病理改变主要为心肌细胞肿胀、空泡变性、溶解坏死和收缩带坏死,电镜观察可见线粒体肿胀、嵴减少、空泡形成和心肌纤维断裂,免疫组化观察可见心肌细胞CTnT缺失。结论 TP急性中毒可导致心肌急性损伤,并呈剂量相关性;其作用机制可能与线粒体损伤和细胞膜破坏有关。