IgAN肾小球硬化大鼠模型血/尿胱抑素C水平与肾纤维化的相关性研究

目的：探讨IgAN肾小球硬化大鼠模型血/尿胱抑素C水平的变化情况及其与肾小球硬化和小管间质纤维化的相关性。方法：将16只SD雄性大鼠随机分为假手术组和复合感染合5/6肾切除组,采用ELISA法检测大鼠第0、4、8、12周的血清胱抑素C水平及第0、4、6、8、12周的尿胱抑素C水平的动态变化,免疫荧光观察肾小球IgA表达情况,Masson染色观察第12周大鼠IgAN肾小球硬化和肾小管间质纤维化的情况,并进行肾小球硬化积分和肾小管-间质纤维化积分,分析其与血/尿胱抑素C水平变化的相关性。结果：复合感染合5/6肾切除组血/尿胱抑素水平均明显高于假手术组,呈时间依赖性上升,并与肾小球硬化积分和肾小管间质纤维化积分呈正相关（R1=0.81,R2=0.66,P〈0.01和R3=0.70,R4=0.69,P〈0.01）。结论：血/尿胱抑素C水平可能是反映IgAN肾小球和肾小管间质纤维化程度的可靠指标。     

糖尿病肾病大鼠肾组织α-actinin-4表达及通络泄浊方的干预作用

目的：探讨α-actinin-4在糖尿病肾病大鼠肾组织中表达的变化,并观察通络泄浊方对其表达的影响。方法：采用链脲佐菌素（STZ）法制作大鼠模型,随机分为正常对照组、模型组、通络泄浊方组、科素亚组和通络泄浊方＋科素亚组。采用Realtime-PCR及Westernblot方法检测肾组织α-actinin-4mRNA和蛋白的表达。结果：与正常对照组相比,模型组mRNA表达和蛋白明显降低（P〈0.01）,给药组与模型组相比,mRNA和蛋白表达明显增高（P〈0.01）。结论：α-acti-nin-4的表达降低参与了糖尿病肾病大鼠蛋白尿的发生;通络泄浊方可以通过上调DN大鼠肾组织α-actinin-4mRNA和蛋白的表达而改善大鼠的肾功能及蛋白尿水平。     

糖尿病肾病大鼠nephrin的表达及通络泄浊方的干预作用

目的研究nephrin在糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织中表达的变化,并探讨通络泄浊方对糖尿病大鼠肾组织nephrin表达的影响。方法采用链脲菌素STZ法制作大鼠模型,随机分为正常对照组、模型组、通络泄浊方组(中药组)、氯沙坦组(西药组)和通络泄浊方联合氯沙坦组(中西药组)。各组采取相应的干预措施。12周时检测大鼠尿微量白蛋白排泄率(UAER)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肾重指数(K/Bw);采用HE、PAS染色法及透射电镜观察大鼠肾组织病理情况;采用免疫组化、Real-time PCR及Westernblot方法检测DN大鼠肾组织nephrin mRNA和蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组尿微量白蛋白排泄率、血肌酐、尿素氮及肾重指数均明显升高,而nephrin mRNA表达和蛋白均明显降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组尿微量白蛋白排泄率、血肌酐、尿素氮及肾重指数均有不同程度的降低,nephrin mRNA和蛋白表达均明显增高(P<0.05)。结论 Nephrin表达降低参与了糖尿病肾病大鼠蛋白尿的发生;通络泄浊方通过上调DN大鼠肾组织nephrin mRNA和蛋白的表达而改善大鼠的肾功能及蛋白尿情况。     

肾小管间质病变的中医药实验研究述略

近年来 ,国内外对肾脏疾病的研究重点逐渐从肾小球损伤转移到肾小管间质病变。研究表明 ,肾小管损伤及间质纤维化更相关于肾脏病的预后 ,因此研究对肾小管间质病变的有效治疗对于延缓慢性肾脏病发展至终末期肾衰具有重要意义。研究表明 ,中医药具有良好的抗肾小管损伤及间质纤维化的作用。为此 ,笔者就目前的研究概况作一综述。单味中药及其有效成分提取物的研究　绞股蓝皂甙　俞氏〔1〕通过兔近端肾小管上皮细胞原代培养技术制作体外庆大霉素损伤模型 ,并用绞股蓝皂甙进行体外防治研究 ,结果为 :绞股蓝皂甙能显著减轻庆大霉素引起的细胞分…     

肾络宁对实验性IgA肾病大鼠IL-10及其mRNA表达的影响

目的 :观察肾络宁对IgA肾病大鼠肾组织IL 10及其mRNA表达的影响。方法 :运用牛血清白蛋白预免疫复合葡萄球菌肠毒素B感染的方法复制大鼠IgA肾病模型 ,同时喂饲肾络宁(肾络宁组 ) ,另设对照组喂饲肾炎康复片。用ELISA法和RT PCR法检测各组IL 10含量及其mRNA表达。结果 :正常组IL 10含量为 2 6 0 7± 0 2 2 6 pg/ml,模型组为 2 4 5 8± 0 2 6 6 pg/ml,肾络宁组为 3 2 2 9± 0 2 70 pg/ml,肾炎康复片对照组为 2 85 0± 0 2 11pg/ml。RT PCR示肾络宁组IL 10mRNA表达明显增加。结论 :肾络宁能明显提高实验性IgA肾病大鼠肾组织中抗炎症因子IL 10的含量及其mRNA表达 ,从而减轻肾组织病理损害 ,对IgA肾病有一定的治疗作用     

温阳活血方对慢性马兜铃酸肾病大鼠肾组织Caspase-3和BMP-7表达的影响

目的:观察温阳活血方对慢性马兜铃酸肾病大鼠肾组织Caspase-3和BMP-7表达的影响,探讨温阳活血方对慢性马兜铃酸肾病的肾保护机制。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为5组:(1)正常对照组(n=8):予生理盐水灌胃;(2)模型组(n=10):按关木通水煎液10mL.kg-1.d-1(相当于关木通40g.kg-1.d-1,马兜铃酸A 2.6mg.kg-1.d-1)给大鼠灌胃;(3)中药组(n=10):在模型组基础上,再予温阳活血方30g.kg-1.d-1灌胃;(4)西药组(n=10):在模型组基础上,再予科素亚33.3mg.kg-1.d-1灌胃;(5)中西药结合组(n=10):在模型组基础上,再予(温阳活血方30g.kg-1.d-1+科素亚33.3mg.kg-1.d-1)灌胃。20周末,检测大鼠尿蛋白、肾功能,光镜和电镜观察肾脏病理,采用免疫组化检测肾组织Caspase-3和BMP-7的表达。结果:与正常组和治疗组比较,模型组大鼠24h尿蛋白、Scr、BUN均明显升高(P<0.01);肾脏病理显示治疗组较模型组肾损害明显减轻;与正常对照组和治疗组比较,模型组大鼠肾组织Caspase-3表达明显升高(P<0.05),BMP-7的表达减少(P<0.01)。结论:温阳活血方能有效防治慢性马兜铃酸肾病,其机制可能与降低Caspase-3升高BMP-7有关。     

肾络宁对IgA肾病大鼠肾小管间质损害的实验研究

目的：探讨IgA肾病大鼠肾小管间质损害及中药复方肾络宁的干预作用。方法：SD大鼠随机分为正常组、模型组、肾络宁组、肾炎康复片组。采用牛血清白蛋白和葡萄球菌肠毒素B复合感染的方法建立大鼠IgA肾病模型；实验共16周，药物干预后常规检测尿红细胞、尿蛋白、血尿素氮、肌酐、尿NAG酶，以及免疫荧光观察肾组织病理；原住杂交，免疫组化及计算机图像分析系统观察大鼠肾小管间质损害的病理变化，以及Ⅲ型胶原（Col-Ⅲ）、转化生长因子β1（TGF-β1）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的表达情况。结果：模型组出现肾小管上皮细胞变性，线粒体结构消失，数量减少，间质成纤维细胞增生及胶原纤维形成；尿红细胞、尿蛋白、NAG酶、血肌酐、尿素氮明显增高，Col—Ⅲ、TGF-β1、PAI-1、TIMP-1表达明显增高，MMP-1表达明显降低。肾络宁及肾炎康复片组小管间质损害明显减轻；血尿、蛋白尿、血肌酐、尿素氮、尿NAG明显降低，Col—Ⅲ、TGF-β1、PAI—1、TIMP—1表达明显降低，MMP—1表达明显升高。结论：肾络宁可明显减轻IgA肾病大鼠肾小管间质损害，改善肾功能，延缓间质纤维化及肾衰竭的进程。     

IgA肾病中肾小球系膜细胞表型转化及肾络宁的防治作用

目的探讨IgA肾病大鼠肾小球系膜细胞的表型转化及中药复方肾络宁的作用。方法SD大鼠随机分为正常组、模型组、肾络宁组、肾炎康复片组;采用牛血清白蛋白和葡萄球菌肠毒素B复合感染的方法建立大鼠IgA肾病模型;常规检测尿红细胞、尿蛋白、血肌酐,光镜、电镜、荧光免疫观察肾组织病理;免疫组织化学染色和计算机图象分析系统观察大鼠肾小球系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、细胞间黏附分子(ICAM-1)的表达情况。结果模型组肾小球系膜区α-SMA、FN、ICAM-1明显阳性表达(P<0.01),系膜区重度IgA沉积,系膜细胞中度增生,基质增多,毛细血管狭窄,血尿及蛋白尿、血肌酐明显增高;肾络宁及肾炎康复片组α-SMA、FN、ICAM-1表达明显减低(P<0.01),IgA轻度沉积,系膜细胞及基质轻度增多,血尿、蛋白尿及血肌酐明显减低。结论IgA肾病大鼠肾小球系膜细胞发生表型转化,中药复方肾络宁可明显抑制IgA肾病大鼠肾小球系膜细胞的表型转化,改善临床及病理变化,肾络宁是防治IgA肾病的有效方药。     

足细胞相关蛋白在糖尿病肾病中的表达及氯沙坦的干预

目的:研究Nephrin、Podocin在糖尿病肾病大鼠肾组织中表达的变化,并探讨氯沙坦的干预作用。方法:60只健康雄性SD大鼠,采用小剂量STZ(25mg/kg)联合完全弗氏佐剂腹腔注射建立DN大鼠模型,反复测量三次血糖值均≥16.7mmol/L视为造模成功。采用随机数字表的方法将造模成功的大鼠分配至对照组、模型组、氯沙坦组。12周末处死大鼠,收集大鼠尿液测定24h尿白蛋白排泄率;光镜观察肾脏病理;western blot检测肾组织中Nephrin、Podocin蛋白的表达。结果:(1)与对照组比较,模型组大鼠24h尿白蛋白排泄率(UARE)均明显升高(P<0.01);与模型组比较,氯沙坦组大鼠24hUARE明显下降(P<0.01);(2)肾脏病理显示对照组肾组织结构基本正常,模型组肾组织损伤明显,经氯沙坦干预后,肾脏病理损伤减轻;(3)western blot检测结果:模型组与正常对照组比较,肾组织中Nephrin、Podocin蛋白表达明显降低(P<0.01),氯沙坦组与模型组相比,肾组织Nephrin、Podocin蛋白均有明显的提高(P<0.01)。结论:(1)糖尿病肾病大鼠足细胞Nephrin、Podocin蛋白表达的减少;(2)氯沙坦对糖尿病肾病大鼠肾脏有明显的保护作用,可以减少蛋白尿。(3)氯沙坦可以通过上调DN大鼠肾组织Nephrin、Podocin蛋白的表达而减轻蛋白尿。     

Basigin/CD147参与马兜铃酸损伤人肾小管上皮细胞的体外实验

目的:探讨马兜铃酸(AA)对人肾小管上皮细胞损伤机制及细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(Basigin/CD147)在损伤过程中发挥的作用。方法:不同浓度AA(10、20、40μg/ml)作用于人近端肾小管上皮细胞(HK-2)不同时间(24、48 h)后,MTT比色法检测细胞增殖变化;Basigin/CD147干扰质粒转染HK-2,选取AA最适浓度(20μg/ml),ELISA法检测不同时间段(24、48 h)细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)含量;实时定量(Real-time)PCR法检测Basigin/CD147 mRNA表达;Western印迹检测Basigin/CD147、TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达。结果:AA 48 h组TGF-β1含量显著高于空白组(P0.05),siRNA+AA 48 h组TGF-β1低于48 h AA组(P0.05);AA48 h组Basigin/CD147 mRNA含量显著高于空白组(P0.05),siRNA+AA 48 h组Basigin/CD147 mRNA显著低于48 h AA组(P0.05);AA 48 h组Basigin/CD147、α-SMA、TGF-β1蛋白表达明显高于空白组(P0.05),siRNA+AA 48 h组Basigin/CD147、α-SMA、TGF-β1蛋白表达均显著低于48 h AA组(P0.01)。结论:Basigin/CD147参与介导AA所致HK-2细胞损伤过程,干扰Basigin/CD147表达可能抑制AA引起的细胞纤维化;Basigin/CD147蛋白表达调控异常可能是引起马兜铃酸肾病的重要发病机制之一。