肝癌Huh7干细胞样细胞的富集培养及鉴定

目的：建立一种体外有效富集、培养和鉴定具有肝癌干细胞特征的细胞亚群的方法。方法：采用成球培养法利用肿瘤干细胞样细胞（cancer stem cell, CSC）分化培养基对肝癌Huh7细胞进行富集培养,获得的干细胞样细胞于体外进一步扩增获得肝癌干细胞球。流式细胞术检测Huh7干细胞样细胞表面肿瘤干细胞标志物EpCAM、CD90和CD133的表达,平板克隆集落形成实验和裸鼠成瘤实验分别检测Huh7细胞和Huh7干细胞样细胞的克隆集落形成能力、体内成瘤能力。结果：Huh7细胞成球培养3~7 d后即可形成肝癌干细胞样细胞球,获得的干细胞样细胞具有自我更新和增殖能力,其EpCAM阳性细胞比例较Huh7细胞明显增加\[（99.6%±0.31）% vs（0.12%±0.05）%,P<0.01\],但两种细胞CD90\[(0.11%±0.06)% vs (0.09%±0.07)%, P>0.05\]和CD133\[(0.17%±0.08)% vs (0.15%±0.05)%, P>0.05]表达差异无统计学意义。Huh7干细胞样细胞克隆集落形成数量明显多于Huh7细胞\[（188.67±12.5）vs （79±16.7）个,P<0.01\];当接种量为5×104个细胞时,与接种Huh7细胞的对照裸鼠相比,接种Huh7干细胞样细胞的裸鼠成瘤时间更短（11 vs 30 d）,成瘤率更高（100% vs 16.67%）;接种5×105数量级的细胞时,实验组成瘤体积\[（171.90±10.94）vs（86.39±11.21）mm3, P<0.01\]和瘤体质量\[（2.98±0.82）vs（0.32±0.17）g, P<0.01\]均明显大于对照组。结论：利用成球培养法能够从Huh7肝癌细胞系中富集培养获得Huh7肝癌干细胞,其具有比Huh7细胞更强的成瘤能力。     

埃博拉治疗中心卫生防疫工作中遇到的问题及解决方案探讨

目的总结中国埃博拉治疗中心卫生防疫工作中遇到的问题及对策,为未来类似传染病的防控和医疗中心的管理提供借鉴。方法中国医疗队于2014年11月中旬奔赴利比里亚抗击埃博拉病毒病（EVD）,笔者作为抗埃援利医疗队中的一员,全程参与了医疗队卫生防疫组的日常工作,将卫生防疫工作遇到的问题及对策进行总结。结果面对含氯消毒剂泄漏、氯气污染、焚烧炉故障等问题,卫生防疫组积极采取了调整放水策略、防护氯气危害、维修旧炉并安装新炉等应对措施。由于处置得当,保证了医疗队各项工作的顺利开展,实现了医务人员“零感染”的目标。结论合理的设计、详尽的预案和对突发情况的灵活处理,是卫生防疫工作成功的关键,此次经验可以为以后的传染病疫情防控工作提供借鉴。     

人工骨替代材料在口腔种植中的研究与应用

<正>现在越来越多的缺失牙患者选择种植牙修复。 口腔颌面部因外伤、肿瘤和畸形等疾病常导致颌骨 组织的缺损,而骨缺损常常是影响口腔种植成功的 关键。尽管骨移植是目前常采用的方法,但供区骨 量有限以及存在着某些难以解决的问题。因此,不 少学者开始考虑选择人工骨替代材料。1988年美 国健康发展委员会把牙科种植的骨替代材料归类为 六大替代材料之一。本文就人工骨替代材料的 研究进展及其在口腔种植医学中的应用作一综述。     

从“异病同治”谈麒麟丸在男科中的应用进展

辨证论治是指导中医临床的核心,麒麟丸是在朱丹溪五子衍宗丸基础上,根据中医理论进行加减而成。"异病同治"理论是中医"治病求本"思想的体现,基于这一治则,临床上运用麒麟丸治疗男性不育症、迟发性性腺功能减退症、早泄与勃起功能障碍中均取得一定疗效。因此,本文就近年来国内关于麒麟丸在男科疾病中的应用进展作一综述。     

胸主动脉覆膜支架置入术在支架近端锚定区不足时左锁骨下动脉的处理方法及支架直接覆盖左锁骨下动脉开口的安全性分析

目的分析胸主动脉覆膜支架置入术在支架近端锚定区不足时左锁骨下动脉的处理方法及支架直接覆盖左锁骨下动脉开口的安全性。方法收集该院收治的20例胸主动脉覆膜支架置入术在支架近端锚定区不足患者,所有患者均需要在左锁骨下动脉实施支架直接覆盖左锁骨下动脉开口处理,分析其治疗效果和安全性。结果所有患者均成功在主动脉中植入覆膜支架,并且在左锁骨下动脉开口,成功植入烟囱支架,没有I型内漏等情况出现。结论在胸主动覆膜支架植入术实施过程中,若近端锚定区域不足,可直接覆盖左锁骨下动脉开口,可取得更加安全有效的治疗效果。     

利用五特征转基因小鼠获得的全人源抗VEGF单抗的抑制血管生成及抗肿瘤活性

为研究一种全人源抗VEGF单克隆抗体在体外和体内的抑制血管生成和抗肿瘤活性,利用细胞划痕实验检测抗体抑制人脐静脉内皮细胞（HUVEC）迁移的活性;MTT法检测抗体抑制分泌VEGF的肿瘤细胞增殖能力;Annexin V/PI 双染检测抗体诱导肿瘤细胞凋亡活性;通过建立胃癌原位模型,静脉注射给予不同剂量的抗体,免疫组化方法检测抗体在体内的抑制血管生成和抗肿瘤活性。结果表明一定剂量的全人源抗VEGF抗体能够显著抑制HUVEC细胞的迁移,明显抑制4种分泌VEGF的肿瘤细胞增殖并显示了一定的诱导肿瘤细胞凋亡的能力。静脉注射一定剂量的抗体能够显著抑制胃癌原位肿瘤的生长和肿瘤血管生成。进而表明该全人源抗VEGF单克隆抗体能够在体外和体内都表现出显著的抑制血管生成和抗肿瘤活性。     

恶性胸膜间皮瘤误诊为胸壁结核一例

1病历摘要 女,46岁,因左侧胸痛2个月、胸闷1周入院.2个月前无诱因出现左侧胸痛,为阵发性钝痛,无胸闷,伴有低热,全身发力,食欲差,近1周出现胸闷、气短,活动后加重.体检:T37.1 ℃,BP110/75 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),双眼睑无苍白,气管轻度右偏;双侧锁骨上未触及肿大淋巴结,左侧胸壁腋中线第6～7肋可见3 cm×4 cm ×4 cm肿块,无红肿;皮温正常,无波动,基底固定,无触痛;左下肺呼吸音消失,左下肺扣诊浊音;心、腹未见异常;查血沉8 mm/h,结核菌素试验(PPD试验)弱阳性.     

血小板源生长因子和血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞中p57基因表达的影响

为观察血小板源生长因子BB和血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞p57蛋白和基因表达的影响及其在血管平滑肌细胞增殖增生中的作用。用贴壁法培养鼠胸主动脉平滑肌细胞,加入血小板源生长因子BB 20ug/L或血管紧张素Ⅱ 1umol/L刺激24h,用Western蛋白印迹法检测p57蛋白水平,用DNA芯片技术检测p57 mRNA的表达量,结果发现,血小板源生长因子BB刺激组p57 mRNA和p57蛋白表达量明显高于血管紧张素Ⅱ刺激组,分别为后者的2．47倍和1．7倍,而血管紧张素Ⅱ刺激组p57蛋白表达量与对照组接近,保持在较低水平,研究结果提示,在血小板源生长因子刺激引起的血管平滑肌细胞增殖过程中p57基因表达明显增高,p57基因的高表达可能起抑制血管平滑细胞过度增殖的作用。     

血小板源生长因子和血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞中细胞周期相关基因表达的影响

目的:观察血小板源生长因子-BB(PDGF-BB)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞(VSMC)中细胞周期相关基因表达影响的异同。方法:第4-6代培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞,AngⅡ10^-6mol/L和PDGF-BB20μg/L刺激静止后的VSMC,24h收集细胞。用TR1zol试剂提取VSMC中的总RNA,然后用DNA酶纯化总RNA,按DNA芯片试剂盒(Atlas^TMHuman CellCycle Arrays,Clontech公司)的步骤用标记探针,并纯化探针,然后杂交、显影,检测细胞周期相关基因的表达。结果:PDGF-BB刺激组cyclinD3mRNA、cyclinG1mRNA、p57mRNA和p16mRNA相对光密度值明显高于AngⅡ组,前者分别为后者的2.67倍、1.59倍、2.47倍、1.78倍,AngⅡ组E2F-3mRNA和DP2mRNA表达量分别低于PDGF-BB组40.34%和54.07%;而p15mRNA、p19mRNA、E2F-1mRNA、E2F-5mRNA以及N-mycmRNA仅在PDGF-BB刺激组表达;p53结合蛋白mRNA相对A值在AngⅡ组高,为PDGF-BB组的1.94倍;PCNAmRNA、c-myc结合蛋白mRNA、p53依赖性细胞生长因子mRNA、cyclinCmRNA、cyclinB1mRNA、E2F-3mRNA表达在PDGF-BB组和AngⅡ组中接近。结论:在PDGF-BB和AngⅡ诱导的VSMC增殖或肥厚过程中,细胞周期相关基因的表达是不完全相同的。     

步行运动试验对充血性心力衰竭患者血浆可溶性炎性细胞因子和氧化应激的影响

目的：采用6min步行运动试验,观察充血性心力衰竭（CHF）患运动前后血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α）、可溶性Fas、可溶性细胞间黏附分子－1（sICAM-1)、一氧化氮（NO）和丙二醛（MDA）等因子的变化,以及运动训练对其的影响。方法：50例CHF患和20例健康对照进行了6min步行运动试验,并于运动前及运动后抽取静脉血;血浆TNF－α、可溶性Fas和sICAM-1的含量测定采用双抗体夹心法;NO和MDA的含量测定采用比色法。10例患运动1个朋后进行了随访。结果：CHF组的基础状态血浆TNF－α、可溶性Fas、sICAM-1、MDA和NO的含量均高于对照组;6min步行运动后,对照组上述指标明显改变,而CHF患运动后即刻血浆TNF－α、可溶性Fas、sICAM-1和NO水平较运动前显增加,血浆MDA含量在运动后30min增加达高峰。运动训练1个月后的随访表明,无论基础状态还是运动后CHF患血浆TNF－α、可溶性Fas、sICAM-1、NO、MDA的水平均较前次实验明显降低。尽管第2次实验运动后即刻血浆可溶性细胞因子和氧化应激水平高于运动前,但均低于或与治疗前的基础状态差异无显性。结论：CHF患较正常人运动耐受性降低,接近CHF患日常生活活动的运动将短时间增强血浆可溶性细胞因子和氧化应激水平。