p53基因突变子175 H、248 W和273 H的定点突变及表达载体的构建

目的：定点诱变合成p53基因突变子进而构建表达载体。 方法：以野生型p53基因为模板,采用PCR体外定点突变技术,设计2对引物,将突变位点设 计在引物上,通过重叠延伸法2次PCR扩增,扩增片段上含有所需要的突变位点,最后将扩 增片段克隆入pcDNA3.1载体中。 结果：在预期位点已经发生突变,p53基因第175位密码子由精氨酸（cgc）突变为组氨酸（cac）,第248位密码子由精氨酸（cgg）突变为色氨酸（tgg）,第273位密码子由精氨酸（cgt）突变为组氨酸（cat）。p53基因突变子表达载体成功构建。 结论：PCR技术诱导定点突变准确、高效。基因突变体的成功构建,为进一步研究该突变位 点奠定了基础。     

辐射危害的阈值问题──纪念伦琴发现X射线100周年

自伦琴发现Ｘ射线一个世纪以来,核辐射和核技术已广泛应用于人类社会生活和经济发展的各个方面,并促进了放射科学领域的深入研究。低水平辐射对健康的影响倍受重视,其中对辐射致癌的危险尤为关注。辐射致癌有无阈值,既涉及放射生物学理论,又关系辐射防护实践。辐射兴奋效应的研究获得了日益增多的科学证据,对辐射致癌的“无阈”假说提出了疑问。已知低水平辐射诱导适应性反应、增强免疫功能、抑制肿瘤生长,这是辐射兴奋效应研究中三个相互联系的核心问题。从分子水平阐明三者的本质,将有助于加深人们对辐射致癌有无阈值的理解。     

低剂量辐射的兴奋效应及其诱导的适应性反应

低剂量辐射可产生与大剂量电离辐射明显不同的效应,现已从不同角度发现低剂量辐射对机体的防御适应性功能有刺激作用,并可诱导机体对相继辐射的各种损伤产生明显的抗性,分别被称为低剂量辐射的兴奋效应(Hormesis)和适应性反应(Adaptive response)。本文从分子水平、亚细胞水平至整体水平所表现的辐射兴奋效应和适应性反应作一综述,并试图对它们的生物学意义作初步评价。     

辐射血液学和辐射免疫学研究

在第八届国际辐射研究大会上,辐射造血和免疫效应的研究报告集中在E组(In vivo radiobiology),同时也散在于其它各组以及某些大会报告和专题讨论会之中。     

尿醛固酮放射免疫分析法:不用层析的方法的可靠性

著者报导了一种简化的尿内醛固酮放射免疫分析法。用二氯甲烷提取酸水解尿样,不需进一步层折纯化,即可直接测定。用醛固酮-1,2,3H(45居里/mM)为示踪物,以重结晶的醛固酮作标准。     

毛细管放射免疫分析法的方法学原理

著者研制的毛细管放射免疫分析法是将抗体吸附于塑料毛细管内壁,使操作大为简化,不用离心或滤过,亦免去了吸取各反应液的操作,从而减少误差。用25mM的Tris缓冲液(pH8.4)稀释抗血清(若稀释度超过1000倍则需加血清白蛋白)将抗体吸附于毛细管壁,这可在用前数月制备。     

pEgr.p-TNFα的构建及其在NIH3T3细胞中的辐射诱导表达

目的分离和扩增Egr-1启动子,构建pEgr p-TNFα质粒,探讨不同辐射剂量对被转染的NIH3T3细胞中TNFα表达的影响.方法用PCR方法从小鼠基因组DNA中分离并扩增出Egr-1启动子,构建pEgr.p-TNFα表达质粒,脂质体介导的转染法转染小鼠NIH3T3细胞,用ELISA方法检测不同剂量X射线照射后的TNFα表达水平.结果本实验得到的Egr-I启动子序列与报道基本一致,Egr-1启动子和TNF α cDNA正确插入表达载体;各照射组在不同剂量X射线照射后8 h,TNFα表达水平均高于假照射组(P＜0.05～0.001).结论本实验分离和扩增的Egr-1启动子具有辐射激活和诱导下游基因表达增强的功能,低剂量辐射可激发并启动下游基因表达,在基因-放射联合治疗中有重要意义.     

X射线全身照射诱导小鼠派伊氏板细胞凋亡及其机理的研究

目的 研究不同剂量X射线全身照射后小鼠派伊氏板细胞凋亡相关基因蛋白表达的变化规律。初步阐明凋亡调控的部分分子机理。方法 应用光、电镜技术观察小鼠派伊氏板细胞凋亡的形态改变,并用流式细胞术检测小鼠派伊氏板细胞Bcl-xL及Fas-L蛋白表达的变化。结果 2GyX射线全身照射后派伊氏板细胞凋亡增加,且Bcl-xL蛋白表达下降,Fas-L蛋白表达升高;75mGyX射线全身照射后,派伊氏板细胞凋亡减少,且Bcl-xL蛋白表达升高,Fas-L蛋白表达下降。结论 凋亡相关基因Bcl-xL、Fas-L在电离辐射诱导的派伊氏板细胞凋亡方面起重要的调控作用。     

PSP94抗血清制备及正常、增生和癌变前列腺人外周血PSP94分析

构建了GST－PSP94融合蛋白表达质粒pGEX-PSP94,并使其在大肠杆菌中表达了GST－PSP94融合蛋白。该融合蛋白经亲合层析纯化后,免疫家兔获得了PSP94抗血清。经Wenstrn blot分析,该PSP94抗血清可与重组PSP94蛋白发生特异性结合。用它对正常人和前列腺增生病人各10例、前列腺癌病人5例的外周血PSP94浓度进行了分析。结果显示,PSPS94在这三种人外周血中的浓度无明显差异。提示PSP94不能作为前列腺癌的血清标志物。     

NF—kB不同二聚体的活化与辐射诱导凋亡的关系

转录因子k基因结合核因子（NF-kB)一直被看作是细胞的存活因子,对辐射诱导的细胞凋亡起强烈的抵抗作用,然而,近来的研究逐渐研究,NF－kB不同亚基的组合可能有着不同,甚至完全相反的作用,对这方面课题的深入研究,无地理解中,高一辐射免疫抑制效应的机制可提供有意义的理论依据,并对临床肿瘤的放针提供新的有价值的资料。k