从人源性噬菌体抗体库中筛选人抗HBsAg的Fab噬菌体抗体

目的从人源性噬菌体抗体库中筛选人抗HBsAgFab噬菌体抗体。方法用固相化HBsAg对所构建的噬菌体抗体库进行三轮淘筛,从中筛选人抗HBsAgFab噬菌体抗体。结果第三轮淘筛后洗脱下来的噬菌体,较第一轮增加80倍,含有抗体轻链基因和重链基因的克隆,也由淘筛前的17%增至100%,经ELISA证实,筛选到的抗HBsAg噬菌体抗体对HBsAg具有良好的结合活性,而与牛血清白蛋白和HAVAg等无关抗原均不反应。结论HBsAg对抗体库的淘筛,富集了表面呈现抗HBsAg的单克隆抗体的噬菌体。     

肝细胞生长素在体外对大鼠肾小球系膜细胞生物活性的影响

目的 观察低分子肝细胞生长素(HPN)对炎症因子刺激下的大鼠肾小球系膜细胞增殖及产生TGFβ的影响。方法 用^3H—TdR掺入法检测肾小球系膜细胞(GMC)增殖变化，用ELISA法检测肾小球系膜细胞培养上清中TGFβ的水平。结果 在无IL-1β存在时，浓度为400u/孔的低分子肝细胞生长素对常规培养的系膜细胞增殖有明显抑制作用(P＜0．01)，而对TGFβ的产生无影响；但它对IL-β刺激下的大鼠系膜细胞增殖和TGFβ产生均有明显抑制作用(均P＜0．01)。低分子肝细胞生长素在100u/孔浓度时无上述作用。结论 高剂量HPN可抑制体外培养的大鼠系膜细胞增殖，降低IL-β刺激系膜细胞产生TGFβ。低分子肝细胞生长素无种属特异性和组织特异性。     

人肝再生增强因子DNA免疫的实验研究

目的:构建人肝再生增强因子()真核表达质粒,免疫家兔,获得抗多抗血清。hALRhALR方法:将已构建的人肝再生增强因子()重组质粒,经扩增,亚克隆入真核表达质粒,构建重hALR PET11-hALRPCR pcDNA3.1 pcDNA3.1-hALR组质粒。中量制备重组质粒及对照质粒,以只免疫家兔,取血并分离血清,进行蛋白质pcDNA3.1-hALR pcDNA3.11.08mg/印迹分析。Western blot结果:构建了真核表达质粒,此重组质粒诱发了家兔抗抗体的产生。pcDNA3.1-hALRhALR结论:说明构建的重组质粒在体内有表达能力,为进一步研究的生物学活性及某些疾病的治疗奠定了基础。 hALR     

柴胡及肝细胞生长刺激物质对人传代肝癌细胞的作用

应用传代人肝癌细胞株(QGY—7703),发现人胎肝细胞生长刺激物质能独立启动人肝癌细胞DNA 增殖;所用中药仅柴胡出现延迟刺激活性,其它药物无类似作用。协同用药亦无明显增强作用.     

重组腺病毒Ad-mALR和Ad-hALR的构建及其对棕榈酸(PA)诱导的L02细胞凋亡的影响

目的 构建含肝再生增强因子(ALR)基因的重组腺病毒并探讨其抗凋亡功能.方法 采用基因重组法构建重组穿梭载体pAdTrack-TO4-mALR和pAdTrack-TO4-hALR,同源重组法构建重组腺病毒Ad-GFP-mALR和Ad-GFP-hALR,4轮扩增后获得高滴度Ad-GFP-mALR和Ad-GFP-hALR.将上述腺病毒感染L02细胞,通过绿色荧光蛋白(GFP)的表达了解其感染率;Western blotting法检测ALR及Bcl-2/Bax蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测ALR对棕榈酸(PA)诱导的L02细胞凋亡的影响.结果 重组腺病毒Ad-GFP-mALR和Ad-GFP-hALR构建成功,且均能高效感染并稳定表达于L02细胞.与非感染组和感染空载病毒组相比,过表达ALR能促进L02细胞的增殖,并抵抗PA诱导的L02细胞凋亡作用,明显降低Bax,增加Bcl-2蛋白的表达.结论 ALR对寸L02细胞具有促增殖及抗PA诱导的细胞凋亡的作用.     

肝再生增强因子在肝癌细胞中的表达及意义

目的研究肝再生增强因子(ALR)对肝癌细胞和原代大鼠肝细胞增殖作用的影响及在肝细胞癌(HCC)中的表达。方法将不同种属的ALR分别与原代大鼠肝细胞和人肝癌细胞株QGY和HepG2共同培养后，用^3H-胸腺嘧啶核苷掺入法测定这些细胞的增殖情况。并应用免疫组织化学法对9例正常肝组织和21例HCC组织中ALR的表达进行了研究。结果不同种属的ALR在体外均能刺激人肝癌细胞株QGY和HepG2增殖，并呈剂量依赖关系，但对原代大鼠肝细胞均无刺激增殖作用。在正常肝组织中ALR不表达，但在HCC肝组织中ALR均表达，且ALR的表达程度与HCC分化程度和大小均无关。结论ALR可能在HCC的发生发展中起着重要作用。     

重组大鼠肝再生增强因子对肾小管上皮细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨重组大鼠肝再生增强因子（rrALR）对体外培养的肾小管上皮细胞增殖及凋亡的影响。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞株（HK2）分组，分别加入不同浓度的庆大霉素（GM）或（和）m～LR，^3H-胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR）掺入法检测HK2细胞的增殖：吖啶橙／溴乙啶（AO／EB）染色和钙磷脂结合蛋白／碘化丙啶（annexin V／PI）双标记流式细胞术检测上述各组HK2细胞的凋亡。结果（1）rrALR对常规培养条件下的HK2细胞有直接的促增殖作用。并具有量效关系（在25ng／ml～50μg／ml的浓度范围内逐渐增强，P〈0．01）和时效关系（培养12h即有该作用，48h达到高峰，以后逐渐下降，P〈0．05）；（2）rrALR能够促进GM损伤后的HK2细胞增殖，有明显剂量依赖性（P〈0．05）；（3）rrALR呈剂量依赖性抑制GM诱导的HK2细胞凋亡（P〈0．01）。结论rrALR能够促进体外常规培养和GM损伤后的肾小管上皮细胞增殖．抑制GM诱导的小管上皮细胞凋亡，提示ALR可能对小管上皮细胞的中毒性损伤有改善作用。     

拉米夫定抑制乙型肝炎病毒X基因的转录与表达

目的 乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白在HBV相关性肝癌的发生中有着重要作用,本研究旨在探讨拉米夫定对HBV X基因复制、转录及表达水平的影响。 方法 用聚合酶链反应法检测拉米夫定对转染X基因复制的影响,用逆转录-聚合酶链反应法检测拉米夫定对转染X基因mRNA的影响,用生物分子相互作用系统检测拉米夫定对X蛋白表达的影响,探讨了拉米夫定作用的量效和时效关系。 结果 拉米夫定组与对照组HBV X基因复制的目的基因条带吸光度(A)值分别是151.4±3.5和144.0±11.4,差异无统计学意义。4.36×104mol/L拉米夫定持续作用24 h能完全抑制X基因的转录,对照组与治疗组(16 h)目的条带的A值分别为243.9±9.0和133.2±7.8,P<0.01,其抑制效应随药物浓度增加和作用时间延长而增强。4.36×104mol/L拉米夫定持续作用16 h,使代表X蛋白表达的最大结合量值从353.3±15.9降至252.3±18.8,P<0.01。结论 拉米夫定不影响HepG2x中转染的X基因复制,但对X基因的转录和蛋白表达有明显抑制作用。     

重组大鼠肝再生增强因子对系膜细胞增殖及分泌转化生长因子β的影响

目的 探讨重组大鼠肝再生增强因子（rrALR)对大鼠肾小球系膜细胞在白介素1β（IL－1β）刺激下生物活性的变化。方法 用^3H-TdR掺入法检测大鼠肾小球系膜细胞（GMC）的增殖情况，用ELISA法检测大鼠肾小球系膜细胞培养上清中TGF－β蛋白的含量。结果 rrALR在0.005pg/ml到0.1ng/ml的浓度范围内对IL－1β刺激下的GMC的增殖以及TGF－β的分泌有促进作用，并呈一定量效关系。而rrALR与无IL－1β刺激的大鼠GMC共培养则与对照组差异无显著性意义。结论 rrALR可促进IL－1β刺激下的GMC增殖及TGF－β的产生，具有炎症协同作用，同时对不同靶细胞具有不同作用。     

人肝再生增强因子阅读框的cDNA克隆和序列分析

目的获取人肝再生增强因子（ＡＬＲ）阅读框的ｃＤＮＡ克隆，为进一步研究打下基础。方法从人胎肝中提取总ＲＮＡ作为模板，以寡聚ｄＴ为引物逆转录台成第一链ｃＤＮＡ，用我们设计的引物和ＰＣＲ方法扩增双链ｃＤＮＡ。ＰＣＲ产物约３８０ｂｐ并被亚克隆人ｐＵＣ１９，经测序和ＰＣＧＥＮＥ软件分析。结果获得人ＡＬＲ完整阅读框的ｃＤＮＡ片段，长度为３７８ｂＰ。与大鼠ＡＬＲ和最近报道的人ＡＬＲ序列比较同源性分别为８６、５％和９９．２％。结论成功地克隆人ＡＬＲ完整阅读框的ｃＤＮＡ，同时提示人ＡＬＲ参与了人胎儿晚期发育过程中胎肝的生长调节。