肝细胞移植联合肝再生增强因子治疗大鼠急性肝功能衰竭的研究

目的 探讨同种异体肝细胞腹腔移植联合肝再生增强因子(augmenter of liver regenration, ALR)对D-氨基半乳糖(D-gal)诱导的急性肝功能衰竭大鼠的治疗作用.方法 采用D-gal诱导大鼠急性肝功能衰竭,诱导后24 h,59只大鼠随机数字表法分成4组.Ⅰ组15只:腹腔注射生理盐水;Ⅱ组15只:经腹腔移植2×107肝细胞, 以后腹腔注射生理盐水;Ⅲ组15只:经腹腔移植2×107肝细胞,同时腹腔注射ALR 50 μg·kg-1·d-1;Ⅳ组14只:腹腔注射ALR50 μg·kg-1·d-1.观察大鼠的存活率、肝脏功能、移植肝细胞存活情况、病理变化.结果 Ⅱ组、Ⅲ组大鼠存活率(46.7%、66.7%)显著高于Ⅰ组(0.0%)(P=0.006;P=0.0002),Ⅲ组(66.7%)与Ⅳ组(14.3%)有显著差异(P=0.008),其他组间无明显差异(P＞0.05).移植后第1、2天Ⅱ组腹水AST高于Ⅲ组(P=0.001), Ⅱ组第1、2天腹水ALT高于Ⅳ组,Ⅱ组、Ⅲ组第1、2天腹水TBil高于Ⅰ组(P＜0.05).Ⅲ组肝脏病理改变轻于其他组.Ⅲ组大鼠腹腔移植的肝细胞存活数多于Ⅱ组.结论 同种异体肝细胞经腹腔移植联合ALR可明显改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率,促进移植肝细胞存活和增殖,促进肝组织及功能恢复.     

噬菌体随机肽库技术在肿瘤靶向治疗中的应用

肿瘤的保守治疗主要是化疗及放疗,化疗在作用于肿瘤的同时也损害了健康的组织和器官.靶向治疗只针对肿瘤组织,有较好的特异性和靶向性,将成为治疗肿瘤的主要方法.靶向治疗的关键是特异性载体的构建,利用噬菌体随机肽库技术筛选出的肽分子小、组织穿透性好,能成为理想的载体.此技术简便易行、分离纯化效率高,必将对肿瘤靶向治疗产生深远影响.     

低分子量肝细胞生长素理化性质的研究

通过链霉蛋白酶P、N-糖苷酸F、O-糖苷酶、唾液酸酶水解低分子量肝细生长素,以探讨低分子量肝细胞生长素(HPN)的理化性质与生物活性。 一、材料与方法 1.材料:(1)低分子量肝细胞生长素(HPN):以乳猪肝脏为原料制备、纯化出的分子量约为6.54×10~3的耐热、促进肝细胞生长物质的纯品(研究所自行纯化)。(2)链霉蛋白酶P、NP40购自美国Sigma公司;N-糖苷酸F、唾液酸酶、O 糖苷酶购自美国Roche公司;~3H-TdR:购于北京中国原子能研究院,浓度为37×10~6Bq/ml,用前以RPMI1640培养基稀释,每10μl培养墓含37×10~3Bq~H-TdR。其余试剂购自北方同正公司和重庆医药有限公司试剂部。(3)QGY细胞由重庆医科大学病毒性肝炎研究所提供。     

IL-10、TNF-α对慢性乙型肝炎患者树突状细胞的影响

目的 研究IL-10和TNF-α对慢性乙型肝炎患者树突状细胞的分化与功能的影响.方法 健康志愿者和慢性乙型肝炎患者各15例,取外周静脉血,分离获得外周血单个核细胞(PBMC),常规培养获得DC组.培养期间用IL-10刺激的为imDC组;TNF-α刺激的为mDC组;先后用IL-10、TNF-α刺激的为imDC+TNF-α组.各组收获细胞后分别检测反映DC成熟度的各种分子及其体外诱导的自体淋巴细胞增殖效应.结果 源于慢性乙型肝炎患者的常规培养的Dc在数量,HLA-DR、HLA-A、B、C和CD86表达,IL-12p70分泌及其诱导的淋巴细胞增殖效应,均低于健康者组(P＜0.01).源于慢性乙型肝炎患者的mDC与健康者mDC表达的HLA-DR、HLA-A、B、C和CD86比较无显著性差异;2组mDC诱导自体淋巴细胞增殖效应和分泌的IL12p70均明显增加,比较有显著性差异(P＜0.01);2组imDC的HLA-DR、HLA-A、B、C和CD86低表达,分泌的IL-12p70极低,不能强烈激活诱导淋巴细胞增殖效应,与DC组比较有显著性差异(P＜0.01).加入TNF-α刺激后HLA-A、B、C,HLA-DR,CD86仍低表达,分泌的IL-12pT0和淋巴细胞增殖效应仍较低.健康对照组、慢性乙型肝炎组的上清夜中IL-21的ELISA检测值均较低,无显著性差异.结论慢性乙型肝炎患者常规培养的DC在数量和功能上低于健康者.TNF-α可促进常规培养的DC成熟为mDC、IL-10可抑制DC成熟.慢性乙型肝炎患者的DC同健康者一样可进行有效的调控,分化成熟后功能强于健康者常规培养的DC,或可提高自体DC治疗性疫苗在不同免疫状态下的治疗效果.     

细胞色素P450的特性及其应用研究

细胞色素P450(CYP450)是微粒体混合功能氧化酶中最重要的一族氧化酶,其在生物体内分布广泛.CYP450参与多种外源性化合物的代谢、内源性物质的生成,尤其影响肿瘤的发生、发展及药物治疗,CYP45O在医学和药学领域的研究一直非常引人注目.     

慢性乙型肝炎过继免疫治疗的进展

过继免疫治疗 (ａｄｏｐｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ)是将体外激活的免疫活性细胞或细胞因子进行免疫性转移 ,输给肿瘤或感染病毒的宿主 ,使它们在体内产生协同作用 ,由免疫活性细胞杀伤、溶解肿瘤细胞或病毒感染的细胞 ,直接或间接地介导机体的抗肿瘤或抗病毒效应。它是医学生物学、分子生物学、肿瘤学、细胞工程和遗传学技术发展的结果。过继免疫治疗包括免疫活性细胞因子过继免疫疗法和免疫活性细胞过继免疫疗法。前者包括输注ＩＬ 1～ 12 ,ＩＦＮ、ＴＮＦ、ＴＧＦ、ＥＧＦ和干细胞生长刺激因子等疗法 ,已用于或目前试用于临床的…     

HBV无症状携带者树突状细胞的分化及功能研究

目的 研究HBV无症状携带者树突状细胞的分化及功能.方法 抽取健康对照者(A组)、HBV无症状携带者(B组)外周静脉血,经密度梯度离心法分离获得PBMC,用TNF-α、IL-10分别和rhIL-4、rhGM-CSF刺激培养,获得:成熟树突状细胞(mDC)、不成熟树突状细胞(imDC).rhIL-4、rhGM-CSF刺激培养获得树突状细胞(DC)作组内对照.imDC组加入TNF-α刺激,检验imDC的稳定性.流式细胞仪检测各组反映树突状细胞成熟度的各种分子.结果 A、B组内mDC细胞膜表达HLA-DR,HLA-ABC分子,分泌的IL-12p70与imDC、DC、imDC+TNF-α组相比明显增加;A、B组间mDC的HLA-DR,HLA-ABC表达无显著性差异,IL-12p70分泌差异有统计学意义(P<0.01).imDC的HLA-ABC、HLA-DR低表达,IL-12p70分泌也较低,与本组内DC比较结果差异有统计学意义(P<0.01);A、B组间imDC的HLA-DR,HLA-ABC低表达,IL-12p70分泌差异无统计学意义.imDC加入TNF-α后HLA-ABC、HLA-DR仍低表达,IL-12p70分泌低于本组内DC,结果差异有统计学意义(P<0.01);A、B组间结果无显著性差异.结论 在A、B组,TNF-α均有效促进DC成熟为mDC,IL-10均抑制DC的成熟,不受A、B组细胞来源影响.mDC分泌大量IL-12p70,并在B组低于A组,说明B组mDC存在一定的功能不足.     

肝再生增强因子在急性肾衰大鼠模型肾组织中的表达及意义

目的 探讨在庆大霉素所致急性肾衰大鼠肾组织中肝再生增强因子(ALR)的表达部位、表达量变化及其与肾小管上皮细胞增生的关系。方法 建立由庆大霉素所致的中毒性急性肾衰大鼠模型，采用免疫组织化学方法检测实验第4、6、8、12、16、21天肾组织中肝再生增强因子的表达和分布情况以及小管上皮细胞增生程度。结果 ALR在正常肾组织内主要表达于髓质区的髓襟、远曲小管和集合管；在实验第4天除了在上述部位表达增强外，在皮质区损伤和再生的近端小管上皮细胞有弱表达，第8天在上述部位表达最强，第12天在皮、髓质区表达开始下降，至21d几乎恢复到正常水平；在正常及肾衰大鼠肾小球内未见ALR表达。对照组肾小管上皮细胞增生指数(PI)为0．6％，实验组第4、6、8、12、16、21天的PI分别为10．4％、17．4％、34．2％、19．2％、8．4％、3．8％。皮质、髓质区ALR表达阳性的面积与小管上皮细胞PI成正相关(r分别为0．913和0．954，P＜0．01)。结论 ALR在庆大霉素所致中毒性急性肾衰大鼠肾脏组织表达明显增强，且与肾小管上皮细胞增生程度成正相关。提示肝再生增强因子参与了中毒性急性肾衰的病理改变过程，其作用可能与肾小管上皮细胞再生有关。     

结合HBV血清学标志和肝内抗原的形态分布探讨与HBV复制、病变程度及预后的关系

通过慢性乙型肝炎和重型乙型肝炎病人肝内ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ的形态和分布观察，发现血清病毒学标志和肝内病毒抗原特殊形态分布所反映的病毒复制状态是一致的。病毒抗原在肝细胞内的形态和分布与肝炎病变程度密切相关。重型肝炎肝内ＨＢＶ抗原检出低，其预后差，形态分布以ＨＢｓＡｇ膜型、核周分布和ＨＢｃＡｇ浆型为主。核周分布仅见于亚大块坏死灶旁或灶中。     

LPS通过p38MAPK-CBP诱导巨噬细胞RAW264.7表达和释放HMGB1

 目的 检测LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1和相关信号分子p38MAPK、NF-κB、CBP的表达,探讨脓毒症时巨噬细胞表达和释放HMGB1的信号传导机制。 方法 采用LPS刺激RAW264.7细胞,在不同的时间点用免疫细胞化学、激光共聚焦显微镜观察细胞内相关信号分子p38MAPK、NF-κB、CBP的变化,ELISA检测培养上清HMGB1的含量,Real-time PCR检测培养细胞HMGB1的mRNA水平,Western blot检测胞浆和胞核内HMGB1的含量。 结果 随着LPS的刺激,细胞浆内p38MAPK的绿色荧光逐渐增强,NF-κB的绿色荧逐渐减弱,而细胞核内NF-κB绿色荧光逐渐增强,CBP的绿色荧光逐渐增强,三者均于刺激后6 h达高峰。LPS刺激后12-48 h培养细胞胞浆和上清中HMGB1蛋白含量逐渐增加,而12-24 h胞核内HMGB1含量逐渐减少,36 h后又逐渐增多,各不同时间点差异具有显著性(P<0.01);而细胞内HMGB1 mRNA表达在LPS刺激后0-12 h无明显变化, 24 h、36 h和48 h明显增高,与0h相比差异有显著性(P<0.01)。 结论 LPS通过依次激活巨噬细胞内信号分子p38MAPK、NF-κB及CBP来诱导HMGB1的合成、转位和释放表达的。