建立人工面神经反射弧恢复失神经支配眼轮匝肌的闭眼功能

目的：建立人工面神经反射弧,恢复面瘫兔的闭眼功能。 方法：试验动物为新西兰兔12只。采用手术切断面神经制备单侧周围性面瘫模型,患侧行肌电图检查确诊。术后第5天患侧植入刺激电极,健侧植入采集电极并留置1月。患侧分别于术后第7天、第28天给予电流刺激;而健侧采集电极则连续采集2周的肌电信号。建立健侧眼轮匝肌肌电信号采集、中枢信号处理模式识别、患侧电流刺激眼轮匝肌系统。当健侧眼轮匝肌采集的肌电信号经信号识别、提取以及电脑分析判断,符合其闭眼刺激阈值时,即对人工电刺激器发出指令,由刺激电极直接作用于患侧眼轮匝肌,引起眼睑完全闭合。结果：刺激方式为正负方向矩形波,电流强度为0.40—0.70mA之间可引起患侧眼轮匝肌收缩,眼睑完全闭合。当健侧眼睑闭合时,其肌电信号电压大于50uV,触发电刺激器,电流刺激即引发患侧眼轮匝肌收缩,完成眼睑闭合。结论：利用MEMS技术,在面瘫兔模型建立“人工面神经反射弧”,恢复患侧眼轮匝肌闭眼功能。     

兔眼轮匝肌的肌电信号研究

目的 分析健康家兔眼轮匝肌(orbicularis oculi muscle,OOM)不同运动模式下的肌电信号特征,明确肌肉功能与肌电之间的关系,以期获得OOM肌电控制信号的信息,为人工面神经假体恢复单侧周围性面神经麻痹患者的闭眼功能提供参考.方法 将微电极经上、下眼睑植入健康家兔的OOM内,采集OOM的肌电信号,并从时域、频域两方面分析信号特征.结果 自然持续睁眼、自然持续闭眼、自然眨眼、诱发闭眼模式下OOM肌电的峰振幅分别为(28.8±4.8)μV、(36.0±4.7)μV、(398.8±195.7)μV和(715.4±249.7)μV,4种模式下的肌电信号功率谱(power spectrum density,PSD)峰频率分别为(98±17)Hz、(142±22)Hz、(203±58)Hz和(349±81)Hz.肌电活动在自然睁眼及自然闭眼时较平稳、幅值较低;自然眨眼及诱发闭眼时,肌电幅值明显增强,且诱发闭眼时肌电振幅增强程度较自然眨眼时强烈.持续睁眼与持续闭眼时肌电峰值绝对值均小于50 μV;自发眨眼及诱发闭眼动作发生时的肌电起始幅值绝对值在50～60 μV之间.OOM肌电PSD能量分布的整体频带为0～500 Hz,主要集中频带为20～350 Hz.在时域内,持续睁眼与持续闭眼OOM的肌电信号峰值绝对值差异无统计学意义(P＞0.05);其他各模式下峰值绝对值的两两比较差异均有统计学意义(P值均＜0.05).在频域内,持续睁眼与持续闭眼OOM肌电信号PSD峰频率的差异无统计学意义(P＞0.05);其他各模式下PSD峰频率间的两两比较差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 睁眼时OOM处于舒张状态,眼睑闭合动作是OOM收缩的结果.OOM肌电信号在不同运动模式下各具特点,可作为计算机判断识别此肌运动模式的依据,但根据时域和频域内OOM肌电特征很难将自然持续睁眼和自然持续闭眼状态进行区分.     

巯基化衍生结合分散液相微萃取-气相色谱/串联质谱-选择反应监测技术测定尿样中超痕量氯乙烯基胂酸

目的：建立路易氏剂染毒尿样中超痕量氯乙烯基胂酸（CVAOA）的分析检测方法。方法采用正交实验,优化分散液相微萃取（DLPME）条件,优化结果为：将250μl甲醇（分散溶剂）、250μl乙酸乙酯（萃取溶剂）、3,4-二巯基甲苯（DMT）（衍生试剂,用量满足摩尔比CVAOA∶DMT=1∶100）混合液,加入到pH=1的1 ml尿样中,90℃衍生并萃取60 min,使用气相色谱/串联质谱-选择反应监测模式〔GC/MS/MS（SRM）〕对衍生产物进行定性定量分析。结果本法在50 pg/ml~1μg/ml浓度范围内呈现良好的线性（r2=0.9999）,相对标准偏差（RSD）＜10%,检出限可达18 pg/ml,定量限为56 pg/ml,远低于已报道的DLPME分析方法。对低、中、高3种浓度（0.5、5和50 ng/ml）的路易氏剂染毒尿样进行检测,准确度为98.2%~104%,RSD为6.9%~8.9%。结论本文所建方法灵敏度高,专属性好,准确度和精密度良好,且操作简单,适用于真实染毒样品分析。     

白藜芦醇对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用和机制研究

目的探讨白藜芦醇对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用及作用机制。方法将45只C57BL/6雄性健康小鼠随机分成3组：假手术组（Sham组）、脓毒症模型组[盲肠结扎穿孔（CLP）组]和白藜芦醇实验组（CLP+白藜芦醇组）,每组15只,采用CLP术构建脓毒症小鼠模型,术后72h每组选取存活的5只小鼠处死并取材,检测血肌酐、尿素氮、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、肾损伤标志物-1（KIM-1）、沉默信息调节相关酶1（SIRT1）表达情况;观察小鼠肾脏结构、肾细胞凋亡情况,计算生存率,检测肾脏组织Caspase-3的表达。结果与Sham组相比,CLP组小鼠肾小球毛细胞血管扩张、充血,肾小管上皮细胞水肿、颗粒性变样,管腔缩小,大量炎症细胞浸润,血肌酐、尿素氮水平均升高（均P＜0.05）,血清NGAL、KIM-1水平均升高（均P＜0.05）;可见大量肾小管上皮细胞凋亡,SIRT1mRNA、蛋白表达水平均升高（均P＜0.05）,Caspase3蛋白表达上调（P＜0.05）;小鼠7d成活率为0%。与CLP组相比,CLP+白藜芦醇组小鼠肾小球毛细血管扩张不明显,炎症细胞浸润有所减轻,血肌酐、尿素氮水平均降低（均P＜0.05）,血清NGAL、KIM-1水平均降低（均P＜0.05）;且肾小管上皮细胞凋亡明显减少,SIRT1mRNA、蛋白表达水平均升高（均P＜0.05）,Caspase3蛋白表达下调（P＜0.05）,小鼠7d成活率为30%（P＜0.05）。结论白藜芦醇可能通过激活SIRT1信号抑制凋亡通路抑制肾小管上皮细胞凋亡,减轻脓毒症相关性急性肾损伤程度。     

脓毒症患者血小板微粒与微RNA-155水平的变化规律及意义

目的 探讨血小板微粒(PMPs)和微RNA(miRNA)-155与脓毒症患者病情和预后的关系.方法 选择脓毒症患者61例,根据28 d预后将其分为存活组和死亡组;根据病情严重程度将其分为脓毒症组、严重脓毒症组及脓毒症休克组.比较各组患者APACHEⅡ评分,使用流式细胞仪进行PMPs定量,利用实时荧光定量PCR检测患者血浆miRNA-155水平.Spearman相关性分析确认PMPs水平、miRNA-155水平与患者APACHEⅡ评分的关系.结果 与存活组比较,死亡组患者PMPs水平较高(P＜0.05).脓毒症、严重脓毒症、脓毒症休克3组患者的PMPs水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).死亡组患者的miRNA-155水平相对于存活组提高(P＜0.05),严重脓毒症组及脓毒症休克组患者的miRNA水平较脓毒症组明显提高(P＜0.05).患者PMPs水平及miRNA-155水平均与APACHEⅡ评分呈正相关,同时患者PMPs水平与microRNA-155水平也呈正相关.PMPs水平联合miRNA-155水平预测脓毒症患者死亡的ROC曲线下面积达0.831.结论 脓毒症患者的PMPs水平及miRNA-155水平与脓毒症患者的病情及预后有关,miRNA-155可能引起脓毒症患者的PMPs水平增高.     

微小RNA-320检测在体外循环所致急性呼吸窘迫综合征中的临床价值及其机制研究

目的研究微小RNA（microRNA）在体外循环（CPB）诱导的急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者中表达,并初步探讨其机制。 方法设定体外循环转流开始前（T1）、转流结束后4 h（T2）、术后8 h（T3）、术后16 h（T4）等4个时间点,采用microRNA微阵列芯片分析32例因CPB诱发ARDS患者microRNA变化,并通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术加以验证。酶联免疫分析法检测患者肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）在T1~T4等4个时间点的水平变化,同时计算呼吸指数和氧合指数。Pearson相关性分析研究microRNA-320（miR-320）与TNF-α、IL-6、呼吸指数、氧合指数、Murray急性肺损伤评分以及急性病生理学和长期健康评价（APACHE）Ⅱ评分的相关性。体外培养人肺腺癌A549细胞,并转染pcDNA3.1-miR-320,采用细胞增殖检测试剂盒8（CCK-8）法和流式细胞术分析pcDNA3.1-miR-320转染对A549细胞48 h存活和凋亡率的影响。 结果在T1与T4时间点,ARDS患者血液标本中共有8个microRNA表达差异有统计学意义（t=28.313、30.014、25.313、20.312、29.442、21.443、18.427、22.369,P均< 0.001）,其中5个出现降低,3个出现增高,其中miR-499的降低程度（0.28 ± 0.09）最为显著,而miR-320的增高程度（1.62 ± 0.12）最为显著（P均< 0.05）。qRT-PCR证实从T1至T4时间点,miR-320相对表达水平（1.00、1.14 ± 0.07、1.34 ± 0.06、1.71 ± 0.08）逐渐升高,差异有统计学意义（F=20.648,P < 0.05）。CPB诱发ARDS的患者T1与T4时间点相比,TNF-α[（110 ± 10）ng/L vs.（254 ± 16）ng/L]、IL-6[（86 ± 8）ng/L vs.（165 ± 11）ng/L]、呼吸指数[（0.182 ± 0.021）vs.（0.381 ± 0.032）]均增高,氧合指数[（350 ± 22）vs.（245 ± 18）]下降,差异均有统计学意义（P均< 0.05）。Pearson相关性分析发现,miR-320的表达水平与Murray急性肺损伤评分,APACHEⅡ评分,T4时间点TNF-α、IL-6、呼吸指数均呈正相关（r=0.685、0.744、0.737、0.711、0.846,P均< 0.05）,而与氧合指数呈负相关（r=-0.745,P < 0.05）。pcDNA3.1-miR-320转染的A549细胞组与对照组48 h细胞存活率[（82% ± 8%）vs. 100%]、凋亡率[（20.0% ± 1.1%）vs.（9.4% ± 0.8%）]相比,差异均具有统计学意义（P均< 0.05）。 结论miR-320水平与TNF-α、IL-6等肺部损伤指标具有相关性,miR-320的高表达可能介导CPB导致的ARDS,作用机制为诱导肺泡上皮细胞的凋亡,因此miR-320具有临床诊断、评估ARDS生物学指标的潜能。