真核表达载体pIRES2-EGFP-hFasL的构建及鉴定

背景：FasL通过与靶细胞上Fas结合诱导程序性细胞死亡,可维持机体内稳态,诱导同种异基因移植免疫耐受,促进肿瘤细胞凋亡。目的：构建带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP及目的基因hFasL的真核表达载体pIRES2-EGFP-hFasL。方法：通过实时聚合酶链反应RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞中扩增出hFasL基因,与真核空载体plRES2-EGFP一起,经XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切,T4DNA连接酶连接,从而构建pIRES2-EGFP-hFasL。用紫外分光光度计测定质粒浓度及纯度,经酶切、PCR技术、基因测序等方法进行鉴定。结果与结论：扩增出的hFasL条带大小约846bp,构建的plRES2-EGFP-hFasL经酶切后在846bp和2000bp处有特异性条带,DNA测序证实hFasL与Genebank上的序列完全一致。提示成功构建了含有hFasL及EGFP的真核表达载体plRES2-EGFP-hFasL。     

丹参对大鼠肝星状细胞转化生长因子β1与Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的 :探讨丹参抗肝纤维化的可能机制。方法 :链蛋白酶、胶原酶离体灌注大鼠肝脏 ,Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞 (HSC)体外培养。不同浓度的丹参处理 ,用RT -PCR法半定量检测HSC的转化生长因子 β1(TGF - β1)mRNA与Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果 :丹参对HSC的TGF - β1与Ⅰ型胶原mRNA的表达有抑制作用。结论 :丹参抗肝纤维化作用可能与TGF - β1和Ⅰ型胶原mRNA的表达下调有关。     

原发性肝癌治疗进展

外科治疗是肝癌的最佳治疗方法,肝移植的出现进一步提高了肝癌的治愈率,经皮治疗是小肝癌患者不能手术的另一种治疗方法,经动脉化学栓塞是目前已明确对生存有益的惟一姑息性治疗方法,化学疗法有效率绝大多数在20%以下,抗雄激素治疗已确定无效,而基于生物学科学进步而发展的生物治疗越来越受到关注。     

胆道大肠杆菌对大肠菌素敏感性的观察研究

<正> 在正常的大肠杆菌及其它肠杆菌科的细菌中,可以携带产生大肠菌素(Colicin)的col质粒,大肠苗素为一类抗菌物质。包幼迪等从628株肠道大肠杆苗中筛选出11株对抗生素全敏感Col~+菌,其对15株不同指示菌的抗菌谱不同,重复多次,每次结果相符,因此认为11株Col~+菌的Col质粒的结构及表型均不同,提示该     

肿瘤坏死因子α逆转入肝癌多药耐药性的实验研究

目的 探讨肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）作为多药耐药（ＭＤＲ）逆转剂,特别是作为多重ＭＤＲ逆转剂的作用及其机制,方法 用本单位建立的肝癌ＳＭＭＣ７２２１ＭＤＲ亚系列作为ＭＤＲ模型,用ＭＴＴ法观察了ＴＮＦα对ＭＤＲ的逆转作用,用ＲＴ－ＰＣＲ,流式细胞术观察ＴＮＦα对ＭＤＲ基因表达的影响,结果ＴＮＦα对ｍｄｒ１,ＬＲＰ,ＧＳＴＦ１和ＴｏｐｏⅡα基因介导的耐药性逆转率为８７．５２％－１００％,对ＭＲＰ基因介     

还原型谷胱甘肽在行经肝动脉介入栓塞化疗患者的临床应用

目的 观察还原型谷胱甘肽对行经肝动脉介入化疗栓塞(TACE)的患者肝功能的临床应用效果.方法 对照组用肝泰乐等护肝药物治疗;实验组在用肝泰乐等护肝药物的基础上,将还原型谷胱甘肽(阿拓莫兰)1.8g加入5%葡萄糖500mL静脉点滴,每天1次.两组均在TACE术前3d～术后7d用药,并在TACE前3d及其后第三天,第七天抽取血清,检测TBIL、DBIL、ALT、AST、TP、ALB和CHE.结果实验组ALT、AST在TACE术后第七天与术前比较无显著性差异(P＞0.05),对照组ALT、ASTD在TACE术后第七天与术前比较有显著升高(P＜0.05).两组患者TACE术后TP、ALB、CHE与术前比较均显著下降(P＜0.01).结论 还原型谷胱苷肽对TACE引起的患者肝功能有显著的保护作用.     

快速康复外科在肝癌肝切除围手术期的应用研究

  目的  探讨快速康复外科(fast track surgery, FTS)理念在原发性肝癌肝切除围手术期应用的效果和安全性。   方法  收集福建医科大学附属第一医院115例需行肝切除的原发性肝癌患者, 随机分为FTS治疗组(FTS组)及围手术期采用传统方法治疗组(对照组), 比较两组患者术后肛门开始排气时间、开始下床活动时间、肝功能变化、术后并发症发生率、住院时间和患者总的住院费用等指标。   结果  FTS组患者术后肛门开始排气时间、开始下床活动时间显著早于对照组(P < 0.05), 肝功能恢复更快, 与对照组比较有显著性差异(P < 0.05), 术后并发症发生率、住院时间与对照组比较显著降低(P < 0.05), 总的住院费用与对照组相比减少, 但两组间无显著性差异(P > 0.05)。   结论  运用FTS理念在肝癌肝切除的围手术期治疗是安全、有效的, 术后并发症的发生率更低, 患者恢复更快, 同时可减少总的住院费用, 值得临床推广。      

DRH1和Ki-67在胃癌中的表达

引言DRH1是[1]新发现的一个基因,与肝细胞癌密切相关。作者用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对胃癌DRH1mRNA的表达进行检测,同时用免疫组织化学SP法检测了胃癌中细胞核增殖抗原Ki-67的表达。1资料和方法1.1资料病理证实的胃癌组织及癌旁正常组织40例;男32例、女8例;年龄28~78岁,平均58.03岁;高中分化腺癌20例、低分化腺癌14例、未分化癌1例、粘液腺癌及印戒细胞癌5例;局限于浆膜内20例,超出浆膜20例;淋巴结转移37例,淋巴结无转移3例;pTNM分期Ib2例、Ⅱ19例、Ⅲa17例、Ⅲb1例、Ⅳ1例。术前无抗肿瘤治疗。标本于手术切除后20min内置入-80℃冰箱保存。1.2主要试剂引物:DRH1上游5′-TCGGAGGTGGAGTACCTGAA-3′、下游5′-CGAGACTGGACCAGAAGTGA-3′,产物333bp;内参照基因β—actin上游5′-GCTATCCAGGCTGTGCTATC-3′、下游5′-ACTGTGTTGGCGTACAG-GTC-3,产物491bp(上海博亚生物技术有限公司设计合成)。Trizol-reagent(GIBCO-BRL公司)。逆转录试剂盒A...     

IL-1O基因修饰的树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受的实验研究

目的:探讨hIL-10基因修饰的未成熟树突状细胞(imDC)诱导大鼠肝移植免疫耐受的能力.方法:行以DA大鼠为供体、Lewis大鼠为受体的同种异体原位肝移植100例,随机分为5组(每组4只):未注射DC组(对照组)、mDC组、imDC组、空载体组及hIL-10基因转染组;分别于移植前5d每天给Lewis大鼠腹腔注射mDC、imDC、空载体转染的imDC和hIL-10修饰的imDC各2 × 106个,于肝移植术后3、7、10d各处死4只,观察外周血肝功能及IL-12变化,并对移植后大鼠做生存分析.结果:IL-10组术后移植肝为非确定型急性排斥反应到轻度急性排斥反应.肝功能示IL-10组在7d、10d时,肝功能有所恢复,但与imDC组及空载体组相比差异无统计学意义.ELISA检测示,术后7d,IL-10组的血清IL-12浓度均低于mDC组及imDC组.IL-10组中位生存期(40d)长于其他组.结论:hIL-10基因修饰的imDC诱导同种异体大鼠肝移植免疫耐受能力显著增强,显著延长同种异体肝移植大鼠的生存期.