树突细胞及神经干细胞/前体细胞联合移植促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复

目的 观察树突细胞(dendritic cells,DCs)及神经干细胞/前体细胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)联合移植对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)修复的作用,并初步探讨其机制.方法 SD成年大鼠80只制作脊髓损伤模型,随机数字表法分为4组,SCI 9 d后分别移植Hanks平衡盐溶液(Hanks balanced salt solution,HBSS)、DCs、NSPCs、DCs+NSPCs.通过BBB评分法评估SCI大鼠运动功能,组织病理学方法观察损伤局部病理学改变.采用增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)转基因SD大鼠脑来源的NSPCs,损伤局部移植2周后观察存活情况.免疫组织荧光法观察损伤局部神经生长因子3(neurotrophin-3,NT-3)的表达变化.结果 移植84 d后DCs+NSPCs组运动功能明显改善(P＜0.05),DCs+NSPCs组、NSPCs组、DCs组、HBSS组BBB评分分别为(11.70±0.99)、(9.75±0.50)、(7.40±0.93)、(5.93±0.78),相邻两组有统计学差异(P＜0.05).DCs+NSPCs组损伤区范围及空洞均明显减少(P＜0.05),NSPCs存活数量明显增加(P＜0.01),显著上调损伤区NT-3的表达.结论 DCs联合NSPCs移植能够促进神经干细胞存活,减少损伤区范围及空洞形成,改善SCI大鼠运动功能.损伤区NT-3的表达增加可能是促进修复的机制之一.     

显微镜辅助下寰枢关节后路钉棒固定融合术——改良Goel 术式的临床应用

目的 探讨显微镜辅助下实施寰枢关节后路钉棒固定融合术(改良Goel术式)的可行性及技术操作要点。方法 回顾性分析2014年12月—2017年6月陆军军医大学第三附属医院脊柱外科行上颈椎手术治疗23例患者的临床资料,其中男16例、女7例,年龄18～71(35.1±16.9)岁;陈旧性齿突骨折不愈合所致的寰枢关节不稳定13例,新鲜齿突骨折合并寰枢关节后脱位、不完全脊髓损伤4例,新鲜齿突骨折合并寰椎枕骨化的寰枢关节可复性脱位6例。患者均接受双人双目手术显微镜辅助下寰枢关节后路钉棒固定融合术。术中在2～20倍显微镜下精细解剖寰枢关节后方的神经血管丛,显露并直视寰椎侧块、枢椎峡部全长、寰枢侧块关节后方,并以其为解剖标志直视下确定进钉点、建立钉道,然后植入寰椎侧块螺钉与枢椎峡部螺钉。观察手术时间、手术出血量、并发症以及螺钉位置和术后6个月骨性融合情况,比较术前、术后3个月的寰枢前间隙(AADI)、日本骨科协会(JOA)评分。结果 23例手术顺利实施,无严重并发症发生,手术时间(2.8±0.8)h,出血量(80.4±17.8)mL。术后第2天复查CT示枢椎峡部螺钉均位于骨内,位置满意。术后3个月AADI(屈曲位)以及JOA评分分别为(2.5±0.8) mm和(11.8±1.8)分,较术前的(8.8±2.6) mm和(9.2±1.5)分均有明显改善,差异均有统计学意义(t=12.352、12.058, P值均＜0.01)。随访6个月CT示植骨融合良好。未见螺钉松动、内固定失效。结论 术中使用显微镜辅助放大与照明,实施改良Goel术式比裸眼下施术具有更好的可行性;通过对后方神经血管丛的精细解剖,使相关解剖标志可被直视,从而提高了该手术安全性与规范性。     

Ⅱ型胶原体外促进大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化

目的 探讨Ⅱ型胶原(collagen Ⅱ)在体外促进大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向软骨细胞的定向分化作用.方法 体外培养BMSCs,分不同collagen Ⅱ接种浓度组(25、50、100、200 μg/mL)和空白对照组,分别作用于BMSCs 7、14、21 d,采用CCK-8法检测各不同浓度组对BMSCs活性的影响;qPCR法和免疫荧光法检测不同浓度组处理BMSCs后,各浓度组与空白对照组相比,collagen Ⅱ、SOX9及aggrecan mRNA及蛋白表达量的差异.结果 ①CCK-8检测结果显示各浓度组在7、14、21 d D(450)值差异无统计学意义(P＞0.05);②qPCR检测结果显示21 d后,不同浓度组与空白对照组比较,collagen Ⅱ、SOX9及aggrecan mRNA表达量均升高(P＜0.05),以100 μg/mL组最高(P＜0.01);14 d时,各浓度组collagen Ⅱ、SOX9及aggreean mRNA以100 μg/mL组上调最明显(P＜0.05),而在7d时,各组之间三者mRNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05);③各浓度组21 d时免疫荧光结果显示:在100 μg/mL Ⅱ组collagen Ⅱ、SOX9及aggrecan mRNA蛋白的表达量较其他各组均明显上调(P＜0.05).结论 collagen Ⅱ可在体外促进大鼠BMSCs向软骨细胞分化,其中以100 μg/mL组促进作用最为明显.     

甲酰基肽受体1对BV-2细胞迁移的影响及机制的体外研究

目的 探讨甲酰基肽受体1(formyl peptide receptor 1,FPR1)对BV-2细胞迁移的影响及潜在机制.方法 免疫荧光染色检测BV-2细胞FPR1的表达,Transwell小室实验分别检测浓度为1、10、50、100、500 nmol/L的FPR1特异性激动剂(formylmethionyl-leucyl-phenylalanine,fMLP)对细胞迁移的影响,划痕实验及Transwell小室实验验证fMLP促进细胞迁移的作用可以被FPR1特异性阻断剂Boc-MLF所抑制.Western blot检测激动剂组、阻断剂组和阻断剂+激动剂组BV-2细胞经干预后其FPR1蛋白和磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-extracellular regulate kinase,p-ERK)蛋白表达量的变化.结果 经免疫荧光染色结果显示,BV-2细胞表达FPR1,主要位于细胞膜表面.随着fMLP浓度的升高,Transwell迁移实验结果显示BV-2细胞的迁移能力明显增加(P＜0.05),呈现出明显的剂量依赖性.100 nmol/L及500 nmol/L激动剂组效果最明显,fMLP促进BV-2细胞迁移的最适浓度为100 nmol/L.划痕及Transwell小室实验结果显示5μmol/L的Boc-MLF可显著阻断上述现象(P＜0.05).fMLP可以上调BV-2细胞中FPR1的表达(P＜0.05),并且显著活化胞内ERK信号通路,上调p-ERK蛋白的表达水平(P＜0.05),Boc-MLF又可显著抑制上述改变(P＜0.05).结论 BV-2细胞表达FPR1,且FPR1在促进BV-2细胞迁移中具有重要作用.     

脊柱手术后切口并发症的外科处理

目的观察脊柱术后切口并发症的发生率,探讨其外科处理措施及疗效。方法回顾性分析2002年6月～2006年3月收治405例脊柱手术患者的病例资料,记录术后切口并发症的发生率、类型、外科处理及其疗效。结果20例（4．94％）发生切口愈合不良,绝大部分经过换药等保守治疗治愈;8例（1．98％）发生切口深部感染,均采用再次手术清创、引流治愈。所有病例无与并发症相关的残留功能障碍。结论及时诊断及选择性外科治疗脊柱术后切口并发症,可取得良好的效果。     

Sox2在NT-3促进大鼠神经干细胞分化中的作用

目的探讨Sox2在神经营养因子3(neurotrophin-3,NT-3)促进原代大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化中的作用及其机制。方法选取孕14~15 d SD胎鼠,培养原代脑源性NSCs。观察NT-3对NSCs中Sox2表达及NSCs分化的影响:采用不同浓度NT-3(25、50、100 ng/m L)刺激NSCs24 h后,检测Sox2、DCX、Olig2、GFAP蛋白的表达量。探索NT-3对Sox2产生影响的机制:使用PI3K/AKT通路阻断剂(10μmol/L LY294002)选择性阻断NT-3的作用后,检测AKT、p-AKT和Sox2在蛋白水平表达量的变化。结果随着NT-3浓度的升高,NSCs中Sox2蛋白水平的表达明显上调(P<0.05),各NT-3处理组的NSCs向神经元前体细胞分化的比例明显增加(P<0.05),100 ng/m L NT-3组效果最强,呈现出明显的剂量依赖性;与对照组相比,100 ng/m L NT-3组的p-AKT及Sox2蛋白水平显著上调(P<0.05),且LY294002可阻断此作用(P<0.05)。结论 NT-3能够上调NSCs中Sox2的表达,后者进而诱导NSCs向神经元方向分化,其可能是通过激活PI3K/AKT信号通路起作用。     

脊柱手术中硬脊膜损伤及术后脑脊液漏的处理

目的 探讨脊柱外科手术的常见并发症——术中硬脊膜损伤及术后脑脊液漏的外科处理措施，并观察其疗效。方法 回顾性分析2002年6月-2006年3月接受脊柱手术的405例患者资料。其中男298例，女107例；年龄11～78岁，平均46．2岁。病程3个月～5年。术中硬脊膜损伤或切开者28例（6．91％），其中颈椎3例，胸椎和腰椎19例，骶椎6例：28例中术后有6例发生脑脊液漏。术中未发现硬脊膜损伤而术后发生脑脊液漏2例。术后脑脊液漏的总发生率为1．98％。采用修复硬脊膜裂口、严密缝合切口各层、卧床休息和伤口加压包扎等综合措施处理。观察并记录处理疗效。结果 所有患者获随访3个月～4年，平均1年5个月。术前症状获不同程度缓解。8例术后脑脊液漏患者均获临床治愈，其中6例硬脊膜囊背侧瘘主要通过卧床休息、伤口加压包扎和再次手术缝合治愈，2例硬脊膜囊腹侧和侧方瘘尚需附加持续腰椎蛛网膜下腔引流。并发中枢神经系统感染1例，经多科协作治疗而愈合。结论 及时、正确地进行术中干预和术后处理，可有效治疗脊柱手术中硬脊膜损伤并预防术后脑脊液漏形成。     

腰椎退行性疾病行后路内固定融合术后早期感染清创的危险因素分析

目的探讨腰椎退行性疾病行后路内固定融合术后早期感染清创的危险因素。方法回顾性分析行后路内固定融合术治疗腰椎退行性疾病的患者资料,将发生手术部位感染(SSI)且需行清创治疗的60例患者纳入清创组,于同期未发生SSI的患者中按照1∶4比例随机抽取240例纳入无感染组。对患者一般资料、手术相关资料、影像和实验室相关资料进行组间单因素分析,筛选出具有统计学差异的指标纳入二元Logistic回归,分析与感染清创相关的危险因素,并选取属于计量资料的因素进行受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果单因素分析结果显示,2组患者美国麻醉医师协会(ASA)评分、合并糖尿病、总住院时间、住院花费、脊柱侵袭性指数(SII)、手术时间、手术椎体数、失血量、术中输血、皮下脂肪厚度、术前血红蛋白、术前白细胞、淋巴细胞、C反应蛋白(CRP)、血清白蛋白和术前血糖比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果表明,SII、皮下脂肪厚度、血清白蛋白和术前血糖是腰椎退行性疾病行后路内固定融合术后早期感染清创的危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示SII的临界值为9.5,皮下脂肪厚度的临界值为23.5 mm,血清白蛋白的临界值为35.8 g/L,术前血糖的临界值为6.18 mmol/L。结论更高的SII、更厚的皮下脂肪、更低的血清白蛋白和术前更高的血糖会增加腰椎退行性疾病行后路内固定融合术后发生早期感染清创的风险。     

新型止血材料Arista AH在脊柱手术中的临床应用

目的评价一种新型止血材料Arista AH控制脊柱手术中活动性出血的有效性和安全性,并初步探讨其在脊柱手术中的适应证.方法采用随机对照试验,筛选2005年1-5月期间脊柱手术患者52例,随机分为试验组和对照组,试验组术中使用Arista AH止血,对照组采用常规外科手术方法止血,评价两组的止血效果及副作用.结果两组在止血效果及副作用等各项指标评价方面无显著差异(P＞0.05).Arista AH对脊柱后路手术中的出血止血效果等同于常规外科操作技术,优势在于操作简单;对于前路手术中椎体切除过程中的出血止血效果略优于常规操作技术.结论AristaAH是一种安全、有效的脊柱外科术中止血剂,在前后路手术中均有其应用价值.     

急性创伤性腰椎滑脱症的临床特点与手术疗效分析

目的总结急性创伤性腰椎滑脱症的临床特点,并观察手术治疗的效果。方法回顾性分析2000年1月～2004年6月收治的6例创伤性腰椎滑脱症的临床资料,通过6～28个月随访,观察经后路内固定、椎间及后外侧融合术的疗效。结果6例均为L5椎体滑脱;4例因治疗合并伤漏诊腰椎滑脱而使之成为陈旧性损伤;2例曾在外院行腰椎后外侧内固定术失败。本组术后腰痛症状完全缓解,1例翻修发生一过性神经根不全功能障碍;术后X线片示5例解剖复位(83．3％),融合率为100％。结论急性创伤性腰椎滑脱均为严重创伤所致,易发生在L5,因合并伤而致早期漏诊率较高。经后路内固定、椎间及后外侧融合术有望获得良好的临床疗效。