分子间三链DNA的应用

自Dervan等1987年首先证实三链DNA的形成可介导对靶DNA的特异切割以来,有关三链DNA的研究进展很快。本文综述了近几年分子间三链DNA在基因表达调控、染色体作图、基因分离及定点诱变等方面的应用,并对三链DNA应用中存在的几个问题及相应的解决方法作了简单介绍。     

一种新型DNA病毒(TTV)对恒河猴的实验感染

1材料和方法收集潜伏期病人粪便，以0．01mol／LPBS液制成20％粪提取液，静脉（10ml／只）和灌胃（20ml／只）接种恒河猴，再以阳性猴粪便经口传代。以一只猴灌阴性粪便液并行检测对照。每日收集粪便和隔日血液标本1周，继每周粪便，每月血清一次6个月。2只灌胃的猴在第4日手术，第7日杀死，另2只猴接种6个月时手术，收集胆汁、肝脏和上中下3处空历组织，以优R检测猴血液和粪便，原位杂交检测活俭或杀死猴的空肠和肝内的病毒。2结果与讨论静脉接种猴4～7日后血液检出病毒，几乎同时粪便也检出病毒。口服接种猴当日粪便检出病毒，可能是排…     

用部分补平法克隆乙型肝炎病毒preS／S基因

目的探讨利用Ｋｌｅｎｏｗ大片段对ＤＮＡ末端作部分补平而使非匹配粘端形成匹配粘端的可行性。方法用 ＢａｍＨＩ、ＸｂａｌＩ消解载体 ｐｃＤＮＡ３,用 ＢｇｌＨ、Ｈｉｎｄ Ⅲ从含乙型肝炎病毒全基因组质粒中切取 ＨＢＶｐｒｅＳ／Ｓ基因片段。 ｐｃＤＮＡ３的 ＸｂａｌＩ及 ｐｒｅＳ／Ｓ基因的 Ｈｉｎｄ Ⅲ切口端经 Ｋｌｅｎｏｗ大片段作部分补平后形成二碱基的互补粘端。连接修饰 后的ｐｒｅＳ／Ｓ基因片段与ｐｃＤＮＡ３并转化后筛选阳性克隆。结果限制性内切酶分析显示ｐｒｅＳ／Ｓ基因被定向克隆于载 体ｐｃＤＮＡ３的预定位点。结论部分补平法是连接非匹配ＤＮＡ粘性末端的较好选择。     

乙型及丙型病毒性肝炎发病机制的新设想

近几年来的实验研究提示肝细胞凋亡在肝炎的发病机制中起重要作用。表现在：（１）乙型及丙型肝炎人肝组织中肝细胞凋亡的数量显著高于正常人;（２）乙型及丙型的表达水平程度,（３）小鼠实验模型中大量肝细胞的凋亡可引起重型肝炎,而抑制凋亡能减轻肝组织的损伤。（４）在细胞毒性Ｔ细胞引起的转基因小鼠的肝炎模型中,肝炎的发生先后经历了细胞凋亡、细胞坏死几个不同的阶段。本文将试图我们对肝细胞凋亡与乙型及丙型肝炎发病的     

乙型肝炎病毒全基因重组真核表达质粒的构建

目的 构建乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）全基因重组真核表达质粒,旨在转染肝细胞,建立 ＨＢＶ复制状态模型。方法体 外连接 ＨＢＶ（ａｙｗ亚型） ＤＮＡ获得 ６．４ ｋｂ的双拷贝 ＤＮＡ片段,然后将其插入 ｐｃＤＮＡ３载体的 ＥｃｏＲＶ位点。结果通过 聚合酶链反应（ＰＣＲ）和酶切筛选和验证获得头尾串联双拷贝ＨＢＶ全基因重组真核表达质粒。结论成功构建了ＨＢＶ 全基因重组真核表达质粒。     

一种无包膜DNA病毒对恒河猴的实验感染

目的 通过实验证明恒河易感和输血传播病毒（ＴＴＶ）可经肠道传播。方法 潜伏期病人粪便的抽提液,静脉和灌胃接种恒河猴,再以猴阳性粪便传代。以ＰＣＲ检测猴血液和粪便、原位杂交检测活检或杀死猴的空肠和肝内的病毒。结果 静脉接种４￣７ｄ、灌胃７￣１０ｄ发生病毒血症,灌胃３￣４ｄ内粪便出现病毒,静脉接种血液和粪便同时出现病毒。阳性粪便可传代。观察２４周血液和粪便仍携带病毒。血清ＡＬＴ不升高,无肝病变。肝细胞     

间变性淋巴瘤激酶通路标签与乳腺癌细胞去分化、新辅助化疗反应及复发风险的相关性

背景与目的间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)信号通路的异常激活参与了多种癌症的发生。本研究的目的是确定这一信号通路在乳腺癌发病中的作用。方法从42个芯片数据集共6381例乳腺癌样本中提取了ALK通路标签的数据并计算了ALK通路的活性,用logistic回归和生存分析检验了ALK通路标签的评分与临床因素之间的相关性。结果我们的结果表明,在这42个数据集中,高ALK通路活性是激素受体阴性、高级别乳腺癌的显著危险因素。注释了患者新辅助化疗反应信息的15个数据集的分析结果表明,ALK通路活性与病理完全缓解(pathological complete response,pCR)呈正相关(总OR=1.67,P <0.01),这种相关性在HER2阴性和1&2级乳腺癌中比HER2阳性和3级乳腺癌患者中更显著。注释了生存信息的30个数据集的分析结果表明,ALK通路活性与乳腺癌患者复发风险呈正相关(总HR=1.21,P <0.01),在年龄> 50岁、淋巴结阳性或新辅助化疗后有残存病灶的患者中尤其显著。结论 ALK可参与乳腺癌的发生,...     

Klenow大片段的聚合酶及核酸酶活性在重组质粒构建中的巧用

目的 探讨应用大肠杆菌Klenow大片段同时补平及切平DNA 3'凹端或3'凸端的可行性。方法 以构建乙型肝水（乙肝）病毒S基因的真核表达载体为例，用Kpn I及Xhol I消解含乙肝病毒前S/S基因的质粒，切除质粒中的前S区基因序列。通过Klenow大片段的核酸外切酶的活性切平质粒Kpn I切口的3'凸端，再利用其聚合酶活性补平Xhol I的3'凹端。处理后的质粒经连接酶作用而自身环化后，转化并筛选阳性克隆。结果 重组质粒获得了限制性内切酶分析的证实；对重组质粒的序列测定表明，Kpn I及Xhol I酶切端经Klenow大片段切(补)平并重新连接后其接续口端序列与预期一致。结论 对质粒作内部改建中，质粒两端分别为3'凸端及3'凹端时，可以同时利用Klenow大片段的两种酶活性将DNA末端修饰为平端，以便于使质粒自身环化。     

Klenow大片段的聚合酶及核酸酶活性在重组质粒构建中的巧用

目的 探讨应用大肠杆菌Klenow大片同时补平及切平DNA3‘凹端或3‘凸端的可行性。方法 以构建乙型肝水（乙肝）病毒S基因的真核表达载体为例，用KpnⅠ及XhoⅡ消解含乙肝病毒前S／S基因的质粒，切除质粒中的前S区基因序列。通过Klenow大片段的核酸外切酶的活性切平质粒KpnⅠ切口的3‘凸端，再利用其聚合酶活性补平XhoⅠ的3‘凹端。处理后的质粒经连接酶作用而自身环化后，转化并筛选阳性克隆。结果 重组质粒获得了限制性内切酶分析的证实；对重组质粒的序列测定表明，KpnⅠ及XhoⅡ酶切端经Klenow大片段切（补）平并重新连接后其连续口端序列与预期一致。结论 对质粒作内部改建中，质粒两端分别为3‘凸端及3‘凹端时，可以同时利用Kelnow大片段的两种酶活性将DNA末端修饰为平端，以便于使质粒自身环化。     

细胞凋亡信号的基本转导通路

在诱导细胞凋亡过程中,许多细胞外刺激常共用一段相同的信号转导路径,可称之为凋亡的基本信号通路。ＴＮＦ受体家族如ＴＮＦ受体及Ｆａｓ受体在与相应的配体结合后,通过蛋白死亡区的相互作用,激活ＩＣＥ蛋白酶家族;活化的蛋白酶引起多种底物如核酸酶抑制剂、细胞骨架蛋白等的降解,导致细胞出现凋亡的生化及形态学改变。