SYTO9/PI荧光探针标记的铜绿假单胞菌PAO1菌株生物被膜形成的动态观察

目的 探讨铜绿假单胞菌细菌生物被膜(biofilm,BF)形成发展过程中空间立体结构变化.方法 SYTO9/PI荧光探针标记PAO1菌株,体外建立6h、1d、3d及6d时间组铜绿假单胞菌PAO1菌株BF模型,激光共聚焦显微镜(confocallaser scanning microscopy,CLSM)摄取BF形成发展各阶段不同层面的图片堆,经图像结构分析软件(image structure analy-zer,ISA)分析获得PAO1菌株BF相关空间结构参数定量化数据.结果 ①CLSM结合SYTO9/PI荧光探针标记,实现了对PAO1菌株BF动态形成过程的观察.②随着BF形成时间的延长,各层死菌比例逐渐增加,且死菌多分布于微菌落中心.③ISA软件定量化分析显示,随着BF发展,厚度显著增加,前3d增加程度显著大于后3 d;区域孔率显著下降趋势;平均扩散距离呈逐渐增加趋势;结构熵呈显著上升趋势.结论 利用ISA程序结合SYTO9/PI荧光探针可以表征PAO1菌株BF的空间结构特征和BF各层细菌的生存状态.     

体外模拟肿瘤微环境中致大鼠MSCs瘤化因子分析

 目的 探讨模拟肿瘤微环境中骨髓间充质干细胞（MSCs）肿瘤转化的发生与HGF、IL-6、BFGF关系。方法 实验组为C6胶质瘤与MSCs间接共培养模拟肿瘤微环境下MSCs的生长,对照组为星型胶质细胞与MSCs间接共培养模拟正常微环境下MSCs的生长,空白对照组MSCs单独培养;QPCR,免疫荧光检测各组的P53和MDM2的基因和蛋白的表达;ELISA检测各组HGF、IL-6、BFGF的表达;免疫荧光检测对应升高的细胞因子作用于MSCs后的STAT3蛋白的表达。结果 实验组的MSCs形态肿瘤化;MSCs的MDM2 mRNA是对照组的1.56±0.21(P<0.05),MDM2蛋白表达率比对照组升高90±7%(P<0.01);MSCs的P53的mRNA表达是对照组的0.55±0.10, 而P53突变蛋白表达率比对照组升高87±5%(P<0.01);HGF、IL-6水平比对照组中达水平升高(P<0.05);过量IL-6处理组的MSCs的STAT3激活蛋白表达率比正常量IL-6处理组明显升高(P<0.01)。结论 IL-6参与MSCs在肿瘤微环境下的肿瘤转化的发生。     

婴幼儿鼻咽部及眼结膜沙眼衣原体检测与初步基因分型

沙眼衣原体 (Ｃｔ)既是成人性病又是患儿下呼吸道感染重要病原菌[1,2 ] 。Ｃｔ分型是流行病学研究所必需的 ,基因分型已成功地用于成人泌尿生殖道分离株[2 ,3] ,但迄今未见对患儿Ｃｔ分离株分型 ,现将我们这方面的研究报道如下。材料和方法一、菌株(一 )临床分离株　 1996年 1～ 8月 ,5ｄ～ 8个月患儿下呼吸道感染的鼻咽拭子 2 48例 ,其中 110例加下睑结膜刮取标本 ,共 35 8份。基因分型对照采用我校附二院性病门诊泌尿生殖道Ｃｔ聚合酶链反应 (ＰＣＲ)阳性随机标本6株。(二 )Ｃｔ标准株　血清型Ａ～Ｋ ,Ｂａ ,Ｌ1～ 3 ,5 0年代沙眼代表株Ｔ…     

裂解酶片段长度多态性在沙眼衣原体主要外膜蛋白基因分型中的应用研究

目的 建立沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白基因（ompl）上游引物5′末端地高辛标记裂解酶片段长度多态性（CFLP）分型方法，并对Ct临床分离株进行分型。方法 取临产孕妇宫颈刮片及其新生儿鼻咽拭子组成母婴配对标本300对605份，用套式聚合酶链反应扩增Ct ompl第四可变区；用建立的CFLP方法对其进行基因分型。结果 孕妇宫颈Ct检出率11％（33／300），母婴传播率24．2％（8／33）；8对Ct阳性母婴配对标本CFLP图谱呈四类，经测序证实分别为E、F、H、D型（各3、2、2、1对），各占37.5％、25％、25％和12．5％，且每对母子CFLP图谱完全一致；同一标本不同批次和相同基因型不同标本的CFLP图谱一致。结论 上游引物5′末端地高辛标记Ct ompl CFLP分型方法灵敏度高、重复性好、操作简便、快速、费用相对低廉，无放射污染，是一种极具潜力的Ct基因分型方法。     

应用连接酶链反应检测沙眼衣原体DNA

目的 建立检测沙眼农原体感染的具有高度敏感性和特异性的缺口—连接酶链反应—酶联免疫吸附测定法。方法 根据CT主要外膜蛋白稳定区设计2对互补探针并分别对其两端标记生物素和地高辛，对6种CT标准株、鹦鹉热衣原体标准株和其他细菌进行Gap—LCR反应并以ELISA和EB染色电泳检测扩增产物以比较两者的检测限度。结果Gap LCR可检出6种CT标准株并不与其他细菌发生交叉反应，ELISA可检出10fg DNA模板的扩增产物，较EB电泳法敏感10倍。结论 Gap—LCR—ELISA是一高度敏感特异的检测CT感染的核酸扩增技术，是适宜于我国广大医疗基层单位进行大规模CT分子流行病学研究的极具前景的方法。     

磁标记大鼠间充质干细胞肝脏移植的磁共振成像活体示踪

目的探讨1.5 T MRI活体示踪磁标记干细胞经门静脉肝脏移植的可行性。方法大鼠间充质干细胞以菲立磁和DAPI标记后,经门静脉注入大鼠肝脏,分别于移植前及移植后1 h、3 d、7 d和14 d行MRI扫描,并与组织荧光显像和铁染色对照。结果移植后1 h、3 d、7 d及14 d肝脏信噪比分别为1.10±0.26、8.18±1.55、11.08±1.30、14.15±1.02,7 d以内肝脏信噪比与移植前比较均有明显降低(P<0.05)。各时相肝组织铁染色与荧光显像的空间分布一致。结论1.5 T MRI活体示踪经门静脉移植的磁标记干细胞是可行的,MRI示踪时间可持续7 d。     

沙眼衣原体感染与异位妊娠关系的临床观察

目的探讨血清沙眼衣原体(CT)及其热休克蛋白60(C-HSP60)抗体反应与异位妊娠(EP)的关系.方法检测了47例EP患者(EP组)和46例宫内妊娠妇女(对照组)血清CT抗体.用基因工程的方法重组C-HSP60,以纯化后的C-HSP60蛋白为抗原,采用酶联免疫吸附法,检测了两组妇女血清C-HSP60抗体水平.结果 EP组和对照组血清沙眼衣原体IgG抗体阳性率分别为68.1%和34.8%,两组有显著性差异(P<0.05);EP妇女C-HSP60 IgG抗体阳性率为25.5%,高于对照组阳性率4.3%,两者有显著性差异(P<0.05).在沙眼衣原体血清学阳性妇女中,EP组C-HSP60 IgG抗体阳性率为34.4%,与宫内妊娠组0%(0/16)相比,有显著性差异 (P<0.05).两组在血清沙眼衣原体IgM、C- hsp60IgM抗体水平上皆无显著性差异(P>0.05).结论女性生殖道沙眼衣原体感染是导致EP的重要原因,C-HSP60与其发病机理有非常密切的关系.     

肿瘤微环境中间充质干细胞的相关生物学特性分析

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在肿瘤微环境中是否获得肿瘤细胞的相关生物学特性而导致恶性转化。方法通过6孔板结合Transwell小室建立间充质干细胞和大鼠C6胶质瘤细胞的共培养体系,以共培养组为实验组,另设单独培养的间充质干细胞作为对照组。于相差显微镜下观察培养后两组细胞的形态学改变;采用流式细胞术(FCM)分析细胞周期变化;采用荧光定量PCR和免疫荧光法检测间充质干细胞mdm2、p53mRNA水平及共培养后两组细胞中p53突变蛋白和mdm2癌蛋白的表达。结果共培养后实验组细胞表现为胶质瘤细胞样形态。细胞周期检测结果显示共培养7d后,对照组G1期细胞占90.48%±6.62%,实验组占82.22%±2.74%,两组间差异无统计学意义(P>0.05);对照组S期细胞占4.66%±4.16%,实验组占7.35%±1.93%,两组间差异亦无统计学意义(P>0.05)。定量PCR及免疫荧光检测显示,实验组p53mRNA水平明显降低,为对照组的0.24倍(P<0.05);部分实验组细胞(24.8%)中表达突变型p53蛋白,而对照组无突变p53蛋白表达(P<0.05)。实验组mdm2mRNA及其蛋白的表达水平...     

兔骨髓间充质干细胞心脏移植治疗扩张型心肌病的实验研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)心脏移植后对兔扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy, DCM)心功能、心肌结构及心内膜单相动作电位(monophasic action potential durations, MAP)的影响.方法 新西兰兔分为正常对照组(n=12),DCM实验组(n=13),DCM对照组(n=13),DCM模型通过静脉注射阿霉素诱导.DCM实验组移植骨髓MSCs, DCM对照组注射培养基,移植后4周采用超声心动图和MAP参数评价心功能和电生理的改变;并取移植区心肌组织行免疫荧光染色以观察移植细胞的增殖分化情况,另选部分心肌组织做HE染色和透射电镜查看心肌组织形态学改变.结果 与正常组相比,DCM各组心功能明显受损、MAP时程延长、心肌细胞变性坏死,且实验组受损较对照组轻;移植的细胞有肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)和缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)的表达.结论 体内移植骨髓MSCs后在一定程度上可改善DCM心功能,使病损心肌组织病变减轻,并可能抑制心电紊乱的进一步发展.     

骨髓间充质干细胞移植对扩张型心肌病兔心功能及结构重构的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)体内移植后对扩张型心肌病(DCM)兔心功能及结构重构的影响.方法 采用新西兰白兔26只经多柔比星(ADR)诱导DCM模型,再将建模成功的动物随机分为实验及对照组.实验组每只移植(4～6)×106个MSCs,对照组注射培养基.移植后4周采用超声心动图检测其心功能和透射电镜观察其心脏超微结构变化.采用SPSS 14.0软件进行统计学分析.结果 对DCM兔行病理检查,发现用ADR后心肌间质水肿,肌纤维空泡变性、坏死.电镜下肌原纤维减少,线粒体增大增多,线粒体内嵴断裂.移植骨髓MSCs后,实验组左室收缩末期内径(LVDD)较对照组降低,左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)升高,二组比较有显著性差异(Pa＜0.05),实验组病理损害较对照组轻.结论 体内移植骨髓MSCs可改善DCM兔心功能,并抑制其结构重构的进展.