输血传播病毒(TTV)基因变异的临床意义

目的 :研究TTV基因变异与其致病性的关系。方法 :采用巢式多聚酶链式反应 (PCR)扩增TTVDNA ,收集TTVDNA阳性病例 5 2例 ,其中献血员 4例 ,乙型肝炎病毒携带者 5例 ,慢性乙型肝炎患者 11例 ,慢性重型乙型肝炎患者 32例 ,采用单链构象多态性 (SSCP)方法进行TTV基因变异检测。结果 :献血员、乙型肝炎病毒携带者、慢性乙型肝炎、慢性重型乙型肝炎患者中 ,SSCP电泳条带数分别为 1.2 5± 0 .5 0 ,1.6 0± 0 .5 5 ,3.36± 1.36 ,4 .5 9± 1.83;慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者组中SSCP电泳条带数显著多于其他组 (P <0 .0 5 ) ;慢性重型乙型肝炎患者中SSCP电泳条带数显著多于慢性乙型肝炎患者 (P <0 .0 5 )。结论 :TTV存在基因变异 ,TTV基因变异株的复杂性或称准种感染的复杂性可能是TTV与HBV感染者重叠感染使病情加重的因素之一     

丙型肝炎病毒包膜蛋白基因片段的克隆与表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ和基因重组技术，从湖南地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者血清中克隆了ＨＣＶ包膜蛋白基因片段（Ｅ１，Ｅ２／ＮＳ１）经与已知基因型的ＨＣＶ－１，ＨＣＶ－Ｊ，ＨＣＶ－Ｊ６和ＨＣＶ－Ｊ８进行核苷酸序列的比较分析，这些基因片段属１ｂ型ＨＣＶ基因。将克隆基因重组于表达质粒ＰＭＡＬ－ＣＲＩ中，在大肠杆菌内进行高效表达，获得了融合蛋白ＭＢＰ－Ｅ１，ＭＢＰ－Ｅ２／ＮＳ１，经ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ分析证实     

人基质金属蛋白酶-1融合蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备与初步应用

目的 :获得兔抗人基质金属蛋白酶 1 (MMP 1 )多克隆抗体 ,并将其初步应用于临床检测。方法 :将人MMP 1融合蛋白经亲和层析法纯化 ,并将其作为抗原免疫家兔 ,获得兔抗血清 ,经饱和硫酸铵纯化 ,获得初步纯化的兔抗人MMP 1多克隆抗体。用双抗夹心间接酶联免疫吸附实验 (ELISA)测定正常对照、慢性肝病、肝硬化患者血清MMP 1的OD值。结果 :获得初步纯化的兔抗人MMP 1特异性多克隆抗体 ,该抗体能与人MMP 1起反应。结论:制备的MMP 1多克隆抗体可初步用于临床检测     

超声检测门静脉血流在病毒性肝炎分级分期中的应用

应用二维超声（B超）、彩色多普勒血流显像（CDFI）和彩色多普勒能量图（CDE）检测160例病毒性肝炎住院患者,结合血清Ⅳ型胶原（Ⅳ—C）和层粘连蛋白（LN）的检测结果,综合评价它们的价值。     

重型乙型肝炎外周血单核细胞基因表达谱研究

目的 应用基因芯片技术建立慢性重型乙型肝炎外周血单核细胞基因表达谱。方法 应用含8192条人体cDNA的微阵列芯片和来自外周血单核细胞的标记cDNA，分析了10例慢性重型乙型肝炎和10例无症状HBsAg携带者（ASC）基因表达谱。通过应用GenePix 4000B扫描仪和ImaGene3.0分析软件比较Cy5标记的慢性重型肝炎来源cDNA与Cy3标记的ASC来源cDNA的杂交结果，获得个体基因的相对表达比值。结果 在8192个基因中，初筛出249个（3％）表达差异达2倍以上的基因，其中主要是细胞信号和传递，细胞周期和代谢，凋亡及炎症相关类基因（占79％）。结论 这些结果提示了乙型肝炎病毒感染机体致慢性重型肝炎过程中，全面改变了宿主细胞内基因表达，并为进一步对这些差异表达基因的功能研究提供了一个框架。     

绿色荧光蛋白和HCV5′NCR调控荧光素酶双顺反子真核表达载体的构建及其在肝细胞中的表达

目的 :探讨绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)和HCV 5′NCR(noncodingregion)调控荧光素酶双顺反子真核表达载体的构建及其在肝细胞中的表达。方法 :用基因重组技术 ,将真核表达载体pCMVNCRLuc的HCV5′NCR及其调控的荧光素酶基因亚克隆至报告载体pEGFP C1的GFP基因下游 ,构建含GFP和HCV 5′NCR调控荧光素酶双顺反子的真核表达载体pGFPNCRLuc。用脂质体基因转染技术 ,将pGFPNCRLuc转染至肝细胞株QSG770 1。结果 :GFP和荧光素酶基因均得到高效表达 ,其荧光素酶表达强度与pCMVNCRLuc比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,GFP表达水平与pEGFP C1比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :成功构建HCV和HCV 5′NCR调控荧光素酶双顺反子真核表达载体 ,HCV和荧光素酶基因在肝细胞内得到共表达。该结果为特异性抗HCV药物评价系统的建立创造了条件     

病房——培养德才兼备医师最好的课堂

教室固然是培养医师的场所,但病房与之相比却有着更加重要的意义,是理论联系实际最好的地方,同时又是培养年青一代的医德、医风、礼貌待人,优质服务乃至优秀的临床学家的最好课堂。在病房中学生把学到的理论付诸于实践,通过实践又巩固所学的理论,尤为重要的是学生每天都面对病人,病人既是他们的老师,又是他     

五种丙型肝炎病毒(HCV)基因重组抗原斑点酶免疫反应检测血清抗-HCV

五种丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因重组抗原斑点酶免疫反应检测血清抗－ＨＣＶ谭德明刘双虎胡国龄刘安国刘国珍应用五种丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因重组抗原，包括ＨＣＶ核心蛋白（Ｃｏｒｅ），包膜蛋白１（Ｅ１）、包膜蛋白２（Ｅ２／ＮＳ１）、ＮＳ３和ＮＳ５抗原〔１，２...     

丙型肝炎病毒核心基因疫苗诱导小鼠细胞及体液免疫应答

为了探索丙型肝炎病毒核心区基因疫苗对小白鼠细胞及体液免疫功能的影响。本文将ＨＣＶ核心区基因定向克隆于质粒ｐｃＤＮＡ３巨细胞病毒启动子下游,构建了能在真核细胞内表达的重组基因疫苗ｐｃＤＮＡ３－ＨＣＶ,将此疫苗通过多点肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠。结果发现接种了该疫苗的小鼠出现抗－ＨＣＶＩｇＧ阳性,其抗体水平明显高于对照组,同时Ｔｈ１免疫应答相关的细胞因子ＩＬ－２及γ干扰素水平也明显高于对照组,其结果