大鼠垂体IL-2表达和组织定位及卵巢切除对其表达的影响

目的:探讨在大鼠垂体前叶中是否有白细胞介素-2(IL-2)表达,并明确其组织定位,以及卵巢切除(OVX)对其表达的影响. 方法:将大鼠分为正常对照组(NOR)、卵巢切除组(OVX)、卵巢切除 雌二醇组(OVX E)、卵巢切除 油剂组(OVX O)和假手术组(SO),取垂体前叶标本进行免疫组化染色,并以图像分析方法分析垂体前叶细胞中IL-2免疫阳性物质含量的变化. 结果:IL-2免疫反应阳性物质仅分布于前叶,在中叶和后叶则未见. 与正常对照组相比,OVX组和OVX O组IL-2免疫阳性物质含量明显增多;而OVX E组IL-2免疫阳性物质含量无明显变化. 结论:我们首次报道IL-2在大鼠垂体的组织定位,机体雌激素水平下降可明显上调其表达.     

融合蛋白HSP70-EGFP的表达、纯化及其在树突状细胞内化抗原中的应用

目的:研究树突状细胞(DCs)对热休克蛋白70(HSP70)融合蛋白的内化作用.方法:首先原核表达并分离纯化HSP70和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白HSP70-EGFP.实验中所用DCs来源于人外周血.内化实验分3组进行:将1,2组DCs分别与融合蛋白HSP70-EGFP和蛋白EGFP孵育30 min;第3组先将DCs与HSP70孵育30 min,再与HSP70-EGFP孵育30 min.之后将3组DCs转至37 ℃孵箱内,培养0.5,1,2和24 h,应用流式细胞仪检测含HSP70-EG-FP或EGFP的DCs数量.应用IL-12 Eli-spot法检测HSP70-EGFP等抗原促进DCs分泌IL-12的效果.结果:①成功获得了重组蛋白HSP70-EGFP,Mr约为97 000,HSP70-EGFP表达量占总蛋白的35.7%.纯化后的融合蛋白HSP70-EGFP溶液经紫外线灯照射时发出鲜绿色的荧光.②流式细胞仪检测结果显示在37 ℃孵育0.5 h后,HSP70-EGFP孵育的DCs组阳性率为63.3%,其余两组为阴性.在37 ℃孵育1,2和24 h后,3组阳性率均大于80.0%.IL-12 Eli-spot检测结果显示,在刺激DCs活化及分泌IL-12的水平上,HSP70-EGFP与脂多糖(LPS)之间的差别无统计学意义(P＞0.05),而HSP70-EG-FP的活化DCs能力明显高于EGFP(P=0.001).结论:①受体介导的吞噬作用在DCs内化HSP70-EGFP的初始阶段起主要作用,随孵育时间的延续,吞饮作用占主要地位.②HSP70-EGFP可促进DCs分泌特征性细胞因子IL-12.     

充分利用机能模拟实验，提高实验教学效果

为了提高实验课的教学效果，将机能模拟实验软件应用于基础医学综合实验课程五期教学中，培养了学生自主学习实验技能的积极性，提高学生实验的成功率和理论联系实际的能力，取得了良好的教学效果。     

基础医学形态学实验教学的改革与实践

通过建立新的形态学实验教学体系和新的教学模式．对目前基础医学教育形态学实验教学进行相应的改革和实践，使得形态学实验教学更加符合21世纪人才培养的需要。     

逆转录-半套式-聚合酶链反应在乙脑早期诊断中的应用

目的：为了探讨ＲＴ－ＰＣＲ用于乙脑临床诊断的可行性。方法：根据乙脑病毒Ｅ蛋白基因区设计了３条引物，采用逆转录－半套式－聚合酶链反应（ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法，从实验室到临床应用上，对该方法的敏感性和特异性、临床检测的可靠性进行了探索，并与ＩｇＭＥＬＩＳＡ捕捉法进行了比较。结果：本方法所用引物的敏感性高，特异性强。在此基础上，检测了４７例临床上确诊为乙脑患者的标本（特异性ＩｇＭ阳性），４３例ＲＴ－ｓｅｍ－ｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ结果为阳性，与ＩｇＭ检测的符合率为９１％。在２０例特异性ＩｇＭ阴性、临床上怀疑为乙脑的患者中，１２例ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ结果为阳性，阳性率为６０％。结论：上述结果提示，ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ用于乙脑患者的临床诊断是可行的，若与ＩｇＭＥＬＩＳＡ捕捉法相结合可进一步提高阳性率。另外，对１６例核酸检测阳性的患者进行了追踪检查，结果有１４例患者恢复期标本的ＲＮＡ检测仍为阳性，提示该病毒并未随着症状的消失而立即消失。     

鼠源性JEV-McAh用于快速诊断及免疫治疗的实验研究

本文综合报道了本室近年来在鼠源性JEV-McAb用于快速诊断及免疫治疗方面的研究结果。(1)应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了6株稳定分泌JEV-McAb杂交瘤细胞系,并鉴定了它们的生物学和免疫学特性;(2)建立了用单抗快速检出JEV抗原、抗体及免疫复合物的方法;(3)对3株有中和活性     

日本脑炎病毒和乙型肝炎病毒抗原真核表达载体的体外共表达

作者构建了日本脑炎病毒（Ｊａｐａｎｅｓｅｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓｖｉｒｕｓ，ＪＥＶ）前膜蛋白囊膜蛋白（ｐｒＭＥ）和乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）前Ｓ蛋白（ｐｒｅＳ）的真核表达载体，分别命名为ｐｃＤＮＡ３Ｅ和ｐＳＧ５ｐｒｅＳ。等量混合这两种质粒，转染ＣＯＳ７细胞进行瞬间表达，应用单克隆抗本ＥＬＩＳＡ法检测特异性抗原。结果表明，单独及混合转染的细胞培养上清中均有特异性抗原表达。本项研究为进一步发展新型日本脑炎病毒和乙型肝炎病毒核酸疫苗打下了基础，也初步显示了核酸疫苗技术在联合疫苗研制中的应用前景     

肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人HSP70融合基因的构建及原核表达

目的:构建及原核表达肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因.方法:采用加端PCR方法,将EPVTKAEML的基因序列融合到人HSP70基因的3′端;将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a( )中,构建重组质粒pET-28a( )/EPVTKAEML-HSP70.经限制性内切酶BamH I、Xho I双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测表达结果.结果:应用加端PCR方法扩增出约2.0 kb的目的片段,序列测定结果证实,EPVTKAEML的基因序列成功地融合到人HSP70基因的3′端.经BamH I、Xho I酶切鉴定证实,融合基因成功地克隆到原核表达载体pET-28a( )上;转入重组质粒的E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析发现在相对分子质量(Mr)约72 000处有表达量明显增多的蛋白条带.结论:成功地构建并表达了肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人HSP70的融合基因.     

胶质细胞:帕金森病致病中的两面派

帕金森病是一类常见的病因不明的神经退行性疾病,普遍认为是由多种致病因素混合导致,其中由胶质细胞所介导的神经炎症日益受到重视。神经胶质细胞主要包括星形胶质细胞,小胶质细胞和少突胶质细胞,目前的研究主要集中在前两者,生理状态下,这两种胶质细胞协同维护着神经系统的稳态,当受到各种内外刺激而过度活化后,在继续发挥保护作用的同时,又可以通过各自不同的分子机制加重周围神经元的损害。明确具体的分子机制,就可以通过药物靶向干预来充分发挥胶质细胞的保护作用并抑制其损害作用,达到治疗帕金森病的目的。现就这一领域的研究进展进行综述。     

课外科研中学员常见问题分析及对策

就学员在课外科研不同时期常见问题进行分析并提出相应的对策。在初期学员往往对科研工作充满好奇心和神秘感，要引导学员树立对科研工作意义的正确认识；选题阶段要帮助学员解决所遇到的选题困难、选题的原则把握不好等问题；确定题目后要依据实验设计的原则完成好实验设计；在实验实施阶段要做好实验的准备、树立克服困难的信心、相互沟通协作完成实验；最后应当完成好论文的总结和撰写。