次声作用后第Ⅱ类mGluRs在大鼠CA_1区表达的改变及其激动剂DCG-Ⅳ的作用

目的　观察次声作用后第 类 m Glu Rs在大鼠 CA1 区表达改变的规律和其激动剂二羧基环丙基甘氨酸 (DCG- )的作用 ,探讨次声致脑损伤的作用机制。　方法　 2 0 0只 SD大鼠随机分为次声作用组和 DCG- 干预组 ,两组再分为对照组和次声作用 1次、3次、7次及 14次组 ,每组 10只。用8Hz、130 d B的次声按规定次数 ,每次作用 2 h。用原位杂交的方法检测第 类代谢型谷氨酸受体(m Glu Rs)的变化。病理学检测分组方法同上 ,每组 10只 ,光镜下测计 DCG- 干预前后损伤神经元数目 ,对实验结果进行统计分析。　结果　次声作用 1次后第 类 m Glu Rs阳性细胞数和光密度即出现改变 (P<0 .0 5 ) ;在 3次组改变最显著 (P<0 .0 1) ;7、14次组恢复至正常水平。形态学研究证实 ,DCG- 干预能明显减轻 CA1 区神经元的损伤程度。　结论　次声作用后可导致第 类 m Glu Rs合成及活性减少 ,DCG- 能有效降低次声对脑损伤的程度 ,提示第 类 m Glu Rs在次声脑损害过程中可能起保护作用     

二次脑损伤神经细胞内游离Ca2+、脑组织丙二醛与血液流变性的改变

目的 :探讨脑弥漫性轴索损伤 (DAI)及合并二次脑损伤 (SBI)的发生机制。方法 :12 0只大鼠随机分为正常对照、单纯 DAI及合并 SBI(低血压与高热 )组 ,于伤后 0 .5、3、12、2 4和 72小时检测神经细胞内游离 Ca2 、自由基和血液流变学指标。结果 :DAI后神经细胞内游离 Ca2 超载明显 ,0 .5小时即有表达 ,12小时达高峰 ,持续至 2 4小时 ;在伤后同一时间点 ,与单纯 DAI组比较 ,DAI合并 SBI组 Ca2 含量明显增加 (P<0 .0 5 )。 DAI后自由基与血液粘滞性指标在伤后 3小时开始增高 ,2 4小时达高峰 ,72小时开始下降 ;与单纯 DAI组比较 ,DAI合并 SBI组丙二醛 (MDA)和血液粘滞性指标均明显高于相应时间点单纯 DAI组 ;脑组织中 MDA含量与全血粘度、血细胞比容、红细胞聚集指数呈正相关 ,组织病理学改变 SBI较单纯 DAI重。结论 :神经细胞 Ca2 超载是DAI及 SBI发生机制的关键 ,自由基和血液流变学特性改变也起重要作用。     

次声作用后脑皮层组织热休克蛋白70的表达及其意义

次声是频率低于 2 0Ｈｚ的声波。近年来 ,次声作为工业、交通及住宅环境等污染因素已逐渐引起人们的关注[1] 。次声作用于机体最为首要的是引起脑的损害。次声作用后中枢神经系统的功能紊乱 ,尤其是思维及记忆功能障碍[2 ] 是否与次声影响了额、颞叶脑皮层功能与结构有关 ?这是我们拟探讨的问题。一、材料与方法1.分组与模型制作 :上海产雄性成年ＳＤ大鼠 40只 ,体重 (2 0 0± 15 ) ｇ。随机分为正常对照、次声作用 1次、7次及14次组 ,每组各 10只。采用本校次声压力仓。实验用 8Ｈｚ 12 0ｄＢ的次声 ,除对照组每日按规定次数在次声压力仓内…     

次声作用后脑组织环核苷酸与TXA2,PGI2代谢改变及意义

本研究探讨次声作用后脑皮层组织环甘酸与花生四烯酸代谢产物血栓素Ａ２（ＴＸＡ２）和前列环素（ＰＧＩ２）代谢改变及意义。将４０只ＳＤ大鼠随机正常对照,次声作用１次、７次、１４次及代谢性谷酸受体拮剂α－甲基－４－羧基苯氨基惭酸（ＭＣＰＧ）治疗５组。彩本校研制的次声压力仓。次声作用组用８Ｈｚ、１２０ｄＢ的次声按规定次为九,每次作用２ｈ各组到预定时间后,取脑组织匀浆,用放免进行环磷酸腺 苷、环磷苷与ＴＸＢ２     

弥漫性脑损伤大鼠脑皮质Ⅰ、Ⅱ组代谢型谷氨酸受体表达及意义

目的：研究弥漫性脑损伤（DBI）后大鼠脑皮质代谢型谷氨酸受体（mGluRs）的变化及其意义。方法：SD大鼠随机分为对照与DBI组，采用Marmarou 加速性DBI模型，在伤后不同时间取样行原位杂交和病理学研究。结果：与对照组相比，DBI组脑皮质I组mGluRs阳性神经元表达在伤后12h开始增加，24h达峰值（P＜0．01）；Ⅱ组mGluRs阳性神经元表达在伤后24h开始减少，48h显减少（P＜0．01）。病理学研究提示，DBI后24h脑皮质神经元损伤严重（P＜0．01），与mGluRs表达变化的时间吻合.结论：Ⅰ、Ⅱ组mGluRs作用不同，分别具有神经元损害和保护作用；脑损伤后，I组mGluRs表达增加，参与DBI引起的神经元损伤， Ⅱ组mGluRs表达减少，其神经元保护作用减弱。这为阐明DBI的损伤机制及应用mGluRs激动剂和／或拮抗剂治疗提供了理论依据。     

次声作用后脑组织环核苷酸与TXA_2、PGI_2代谢改变及意义

本研究探讨次声作用后脑皮层组织环核甘酸与花生四烯酸代谢产物血栓素A2 (TXA2 )和前列环素(PGI2 )代谢改变及意义。将 40只SD大鼠随机分为正常对照、次声作用 1次、7次、1 4次及代谢性谷氨酸受体拮抗剂α 甲基 4 羧基苯氨基乙酸 (MCPG)治疗 5组。采用本校研制的次声压力仓。次声作用组用 8Hz、1 2 0dB的次声按规定次数 ,每次作用 2h。各组到预定时间后 ,取脑组织匀浆 ,用放免进行环磷酸腺苷 (cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)与TXB2 及 6 酮 (TXA2 、PGI2 稳定代谢产物 )含量测定 ,并对脑组织匀浆进行蛋白定量。结果 :cAMP、cGMP与TXB2 及 6 酮含量 ,在次声作用 1次组 ,无显著改变 ;在 7次与 1 4次组 ,cAMP与TXB2 含量显著升高 (P<0 .0 1 ) ,6 酮含量明显降低 (P <0 .0 1 )。TXB2 /6 酮比值呈递增趋势 ;治疗组 :cAMP、TXB2 及 6 酮含量与TXA2 /PGI2 比值有明显恢复。提示次声可以通过引起脑cAMP、cGMP与TXA2 、PGI2 代谢改变造成脑损害 ,这是次声导致脑损害的重要因素之一。在相同强度的次声的作用下 ,作用次数的多少与脑cAMP、cGMP与TXA2 、PGI2 代谢改变程度呈直接相关关系。MCPG可能通过影响脑cAMP与TXA2 、PGI2 代谢改变而起脑保护作用。     

弥漫性脑创伤并二次脑损伤后脑组织MDA和SOD变化

目的 探讨弥漫性脑创伤及合并二次脑损伤后大鼠不同区域脑组织内自由基和超氧化物歧化酶（SOD）变化规律及其与创伤后脑水肿的关系。方法 在自由落体致弥漫性脑创伤及其合并双侧颈总动脉结扎造成二次脑损伤模型的基础上,对大鼠大脑皮层、纹状体和脑干区脑组织匀浆的丙二醛（MDA）和SOD含量进行测定,并对其与该区域脑组织的含水量的关系进行分析。结果 原发性脑创伤和二次脑损伤后各区域脑组织MDA含量增高、SOD含量下降,并与脑组织含水量呈一定的平行性;二次脑损伤后各区域脑组织MDA和SOD变化幅度明显较单纯原发性脑创伤后为高并且其高峰持续时间延长;不同部位脑组织对原发性创伤和二次损伤反应具有一定的差异。结论 弥漫性脑创伤后各区域脑组织自由基水平较高、自由基清除能力下降并与脑水肿的发生、发展具有一定的相关性,在伴随二次损伤因素情况下变化更为严重,并且在不同部位二对脑水肿程度的影响存在一定的差异。     

Simian virus 40 large tumor antigen forms specific complexes with p53 and pRb in human brain tumors

Objective　To study the role of simian virus 40 (SV40) early region gene coding product large tumor antigen (Tag) expression and the interaction between Tag and tumor suppressors p53 and pRb in human brain tumorigenesis. Methods　Tag was investigated by immunoprecipitation followed by silver staining and Western blot in 65 cases of human brain tumors and 8 cases of normal brain tissues. Tag-p53 and Tag-pRb complexes were screened in 18 and 15 Tag positive tumor tissues, respectively. Results　Tag was found in all 8 ependymomas and 2 choroid plexus papillomas, 90% of pituitary adenomas (9/10), 73% of astrocytomas (11/15), 70% of meningiomas (7/10), 50% of glioblastomas multiforme (4/8), 33% of medulloblastomas (2/6). 5 oligodendrogliomas, 1 pineocytoma, and 8 normal brain tissues were negative for Tag. Tag-p53 complex was detected in all 18 Tag positive tumors. Tag-pRb complex was found in all 15 Tag positive tumors. Conclusion　SV40 Tag is expressed in human brain tumors and can form specific complexes with tumor suppressors p53 and pRb. The inactivation of p53 and pRb due to the formation of Tag-p53 and Tag-pRb complexes may be an important mechanism in the etiopathogenesis of human brain tumors.     

基于RT-PCR基础上的体内重组法构建人源性胶质瘤单链抗体库

目的　构建人源性胶质瘤噬菌体抗体库 .方法　经逆转录、套式PCR从脑胶质瘤患者血淋巴细胞中扩增出抗体轻链Vκ 和重链VH 基因 .先构建Vκ 基因库 ,并使连接Vκ 和VH基因的Linker与Vκ 基因连接 ,再将VH 基因克隆入Vκ 基因库 ,即构建成约为 3.5× 10 6 的单链抗体 (ScFv)基因库 .以Loxp5 11序列替代Linker序列 ,并将ScFv克隆入pDNA5内进行重组、鉴定 ,得到新的ScFv噬菌体抗体库 .结果　表明原初级噬菌体抗体库经Cre Loxp5 11系统重组后库容量达到 8.5× 10 8,部分测序证实抗体基因与人源性抗体基因数据库同源 .结论　利用体内重组系统明显提高了所建的抗体库容量 ,为进一步筛选特异性人源性抗脑胶质瘤ScFv奠定了基础     

绿色荧光蛋白转染胶质瘤细胞的体内实验研究

 目的　利用体外转染绿色荧光蛋白 (Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)基因的胶质瘤细胞建立大鼠移植模型 ,并探索利用该模型研究肿瘤体内侵袭的可行性。方法　携有EGFP基因的 p EGFP- N3质粒体外转染 C6胶质瘤细胞 ,筛选稳定表达 GFP的细胞克隆并以立体定向法植入 SD大鼠脑实质内建立肿瘤移植模型。 4周后处死大鼠并制作连续石蜡切片 ,相邻切片分别作 HE、免疫组化染色和荧光显微镜检测。结果　GFP于体内稳定表达 ,在荧光显微镜下可较容易区分肿瘤细胞和非肿瘤细胞 ,并能检测到侵袭至远端的单个肿瘤细胞 ,其检测效率明显高于HE和免疫组化染色。结论　EGFP基因体外转染 C6胶质瘤细胞并建立大鼠脑内肿瘤移植模型 ,是研究胶质瘤体内侵袭的有效模型和方法。