siRNA抑制SOM基因表达的有效序列筛选

目的 研究siRNA对胃癌细胞BGC-823生长抑素（SOM）分泌的抑制效应。方法 设计2条针对SOM基因不同位点的寡核苷酸序列,应用RiboMAXT7体外转录合成siRNA并转染胃癌细胞系BGC-823,经RT—PCR,免疫细胞化学法检测SOMmRNA和蛋白的表达水平,筛选抑制效果最佳的序列。结果 转染后24h、48h及72h,SOM基因的表达被抑制,抑制效率有差异。结论 体外合成siRNA可以抑制SOM基因的表达,抑制效率呈现浓度及时间依赖性。     

成人和成体羊心脏组织动力学比较

目的:比较正常成人和成体羊心脏的组织动力学过程,探讨心脏组织演化的规律.方法:取12只山羊和6例人尸检心脏组织标本及羊心脏传导系统标本,常规石蜡切片,HE染色,光学显微镜观察.结果:正常成人与成体羊心脏组织演化均包括心内膜-心肌演化体系、房室间区-心肌演化体系和肌层内心肌演化体系,但在羊心内膜-心肌演化体系中的优势演化途径是心内膜细胞-心肌生成单位-心肌细胞演化系,人的优势演化途径是心内膜细胞-非心肌生成单位-心肌细胞演化系;在肌层内心肌演化体系中有细胞重建的重要演化方式.结论:正常成人和成体羊心肌演化总体模式基本相似,但各自具有不同优势演化途径.     

雷帕霉素对食管鳞癌细胞裸鼠移植瘤生长及mTOR/4EBP1信号通路的影响

 目的 体内观察雷帕霉素对食管鳞癌细胞生长及mTOR/4EBP1信号通路的影响。方法 给BALB/c-nude小鼠皮下注射食管鳞癌细胞株（EC9706）,建立移植瘤模型,用雷帕霉素及顺铂对肿瘤进行治疗;用RT-PCR及Western blot等观察细胞形态及信号通路中各因子的变化。结果 与对照组相比,雷帕霉素对肿瘤生长具有显著抑制作用（P<0.05）,联合顺铂处理组的抑瘤作用更明显;雷帕霉素在体内降低了mTOR和p-4EBP1的表达,并使4EBP1的表达水平升高。结论 雷帕霉素在体内能明显抑制食管鳞癌细胞EC9706裸鼠移植瘤的生长并抑制mTOR/4EBP1信号通路的活性。     

MCF-7细胞中组织型纤溶酶原激活剂乳腺特异性表达载体的瞬时表达

目的：验证所构建的组织型纤溶酶原激活剂(tPA)乳腺特异性表达载体pWTA在乳癌细胞系MCF-7中的瞬时表达。方法：用脂质转染胺试剂Lipofectamine^TM2000将pWTA DNA转染人乳癌细胞系MCF-7和食管癌细胞系Eca-109。应用原位杂交技术,以地高辛标记的tPA cDNA为探针,观察PWTA的瞬时表达。结果：不同浓度Lipofectamine^TM2000 MCF-7细胞原位杂交均为阳性;Eca-109细胞及未加转染液者未见阳性信号。结论：载体pWTA为tPA乳腺特异性表达载体。     

小分子干扰RNA逆转胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药

目的研究小分子干扰RNA（siRNA）逆转胃癌多药耐药细胞亚系SGC7901／VCR mdr1介导的多药耐药效应。方法根据mdr1cDNA已知序列,设计并体外转录2条含21个核苷酸的siRNA（mdr1si2631和mdr1si3071）,转染SGC7901／VCR细胞,用RT-PCR检测mdr1基因mRNA的表达,免疫组织化学检测P-gp的表达,流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积,MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果siRNA转染SGC7901／VCR细胞48h后,mdr1基因mRNA和P-gp的表达水平下降,细胞内阿霉素积累量增加,对阿霉素敏感性的相对逆转率各达79．59％及59．98％。结论siRNA可逆转SGC7901／VCR细胞mdr1介导的多药耐药。     

食管鳞状细胞癌组织中B7-H1蛋白和mRNA的表达

目的:探讨食管鳞状细胞癌组织中B7-H1蛋白和mRNA的表达及其与肿瘤转移的关系.方法:应用免疫组织化学技术和RT-PCR技术检测54例食管鳞状细胞癌组织以及8例癌旁正常食管黏膜组织中B7-H1蛋白和mRNA的表达,分析B7-H1的表达与食管鳞状细胞癌患者临床病理特征的关系.结果:食管鳞状细胞癌组织中B7-H1蛋白和mRNA的阳性表达率分别为48.2%和31.5%,而癌旁正常食管黏膜组织中无B7-H1蛋白和mRNA的表达.B7-H1蛋白和mRNA的阳性表达率与食管鳞状细胞癌的浸润深度、淋巴结转移、远处转移及pTNM分期有关(P<0.05).结论:检测食管鳞状细胞癌组织中B7-H1的表达对判断其浸润、转移及病情进展有一定的价值.     

胃腺癌蛋白质组双向电泳技术的建立

0 引言 随着蛋白质组概念的提出及其相关技术的迅猛发展,使人们从蛋白质组整体水平研究胃癌成为可能.而双向电泳技术是蛋白质组学研究的首要条件和关键技术.本实验以胃腺癌组织为研究对象,对双向电泳的程序及有关环节,进行一系列改进和优化,目的是提高分辨率和重复性,获得理想的电泳图谱,为后续研究奠定基础.