铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因突变与喹诺酮类药物耐药关系研究

目的:研究铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因突变与喹诺酮类药物耐药关系,并对聚合酶联反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)-DNA单链构象多态性(SSCP)分析铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因突变的可行性进行评估。方法:以铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因序列为靶序列,用PCR、PCR-RFLP、PCR-SSCP、DNA测序等方法对铜绿假单胞菌ATCC27853及16株临床分离株gyrA基因突变进行对比研究。结果:在8株耐环丙沙星铜绿假单胞菌中,有6株gyrA基因的83位表现出单点突变,其突变方式全为ACC→ATC,导致氨基酸苏氨酸→异亮氨酸的改变;gyrA基因的PCR扩增产物SacⅡ酶切片段与测序结果一致;SSCP分析结果显示,16株细菌中仅2株gyrA带型与ATCC27853相同,其它菌株gyrA带型与ATCC27853均不同。结论:临床分离的铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药的分子机制主要表现为gyrA基因83位氨基酸密码子突变,应用PCR-RFLP-SSCP系统可快速、准确地检测耐喹诺酮类药物的铜绿假单胞菌gyrA中碱基的变异。     

同时产CTX-M-22及TEM-1型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌耐药性分析

目的 了解临床分离阴沟肠杆菌株EC003产β-内酰胺酶的耐药特征和基因型。方法采用琼脂二倍稀释法对阴沟肠杆菌EC003进行MIC检测，酶提取物三维实验检测AmpC酶，双纸片法筛选及确证实验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs），等电聚焦（IEF）电泳测定其等电点。以耐药质粒为模板进行PCR扩增，将β-内酰胺酶全编码基因克隆、表达，并对其扩增产物进行DNA序列测定和同源性分析。结果阴沟肠杆菌株EC003对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药，表型检测AmpC酶为阴性。ESBLs阳性，IEF显示该菌产两种p1分别为8．7及5．4的β-内酰胺酶。PCR扩增产物DNA测序证实为CTX-M-22、TEM-1型β-内酰胺酶全编码基因，产TEM-1的克隆菌株仅对青霉素类耐药，产CTX—M-22的克隆菌株对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药。对头孢噻肟的水解程度明显强于头孢他啶。结论临床分离阴沟肠杆菌株EC003同时产CTX—M-22和TEM-1型两种β-内酰胺酶，可导致对多数β-内酰胺类抗生素耐药。     

硫酸铵反抽提法在纯化β内酰胺酶中的应用

硫酸铵价廉，不易导致蛋白质变性，常用于蛋白的分离和纯化。但硫酸铵抽提的分离纯化作用较弱，主要用于蛋白的浓缩。硫酸铵反抽提是根据在硫酸铵溶液中析出的蛋白质再次溶解有较高的选择性原理而建立的纯化方法。本研究采用配对设计对硫酸铵反抽提和抽提两法在纯化超广谱β内酰胺酶（ESBL）中的作用进行了比较，旨在为临床检验科室纯化ESBL提供简便易行的方法。     

鲍曼不动杆菌生物膜相关基因研究

目的 探讨临床分离鲍曼不动杆菌生物膜相关基因的不同生物膜形成能力.方法 收集成都医学院第一附属医院2014年1月至2015年1月住院患者临床分离的鲍曼不动杆菌47株,采用结晶紫染色法测定鲍曼不动杆菌的生物膜形成能力.PCR检测abaI、bap、pgaA、pgaB、pgaC、pgaD、csuA/B、csuA、csuB、c...     

氧氟沙星短疗程治疗儿童多重耐药菌所致伤寒

过去几十年问，南美洲、印第安次太陆及非洲等地均已报告伤寒沙门菌对3种一线抗菌药(氯霉素、氨苄西林、SMZCo)的耐药性。最近，东南亚国家也有类似报告。目前，在越南南部地区，这种耐药菌已占临床分离菌株的多数，而治疗药物的选择只限于广谱头孢     

洋葱伯克霍尔德菌及其耐药现状

洋葱伯克霍尔德菌属非发酵革兰阴性杆菌,至少由7个基因型组成.近年来已成为临床上较重要的条件致病菌之一,主要通过水、体温表、喷雾器、静脉导管、导尿管、输液管等在医院内流行播散,在痰标本和重症监护病房分离率高.该菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类和多黏菌素等多种抗菌药物耐药,尤其对亚胺培南的耐药率高达90%.现从分子生物学特征、临床分布和耐药现状等方面对该菌作一综述.     

细菌对头孢菌素“牵制”耐药机制的实验研究

应用分光光度计,检测了体外培养基中细菌在头孢噻吩、Ceftazidime、β-内酰胺酶及酶抑制剂邻氯青霉素单独和相互作用下的浊度变化。分别单用头孢噻吩(10MIC)和Ceftazidime(15MIC)均可溶解细菌;当加入微量酶液则可明显拮抗。上述实验系统中同时加用邻氯青霉素(1/16MIC)则可翻转酶对头孢噻吩和Ceftazidime溶菌作用的拮抗而出现溶菌作用。但当头孢噻吩、Ceftazidime分别与酶在菌液中培养10分钟或30分钟后,再加等量邻氯青霉素时,仅能翻转酶对Ceftazidime的拮抗,重新再现溶菌作用,而此时头孢噻吩的溶菌作用则不能再现。结果表明,细菌β—内酰胺酶对第一代和第三代头孢菌素导致耐药的机制不同。该实验为第三代头孢菌素的非水解耐药机制提供了重要依据。     

利福喷丁对小鼠和大鼠肝微粒体酶的影响

<正> 利福喷丁(rifapentine,R773)是我国近年研制的新型长效利福霉素。国内外曾报道利福平在人体内能加速自身及其他若干种药物的代谢。作为同类衍生物,利福喷丁可能也具有肝微粒体酶诱导作用,本文报道了这方面的动物实验结果。 利福喷丁处理对小鼠肝重的影响 昆明小鼠?,体重18±SD2g,随机分为4组,每组10只,对照组每两天ig一次1％甲基纤维素溶液(R773的溶剂)0.2ml/只;其余3组分别igR773 10,20和40mg/kg,隔日一次,共给药15d。结果各组小鼠的相对肝脏重量(肝重占体重的百分比)依次为:对照组4.8±SD0.4％;R77310mg/kg组5.5±0.4％;     

CEFTAZIDIME耐药细菌的β-内酰胺酶研究

应用药物梯度琼脂筛选法获得绿脓杆菌和阴沟杆菌的Ceftazidime耐药菌株(MIC≥64μg/ml)。采用紫外分光光度法检测了耐药菌的β-内酰胺酶活性,酶对12种β-内酰胺抗生素水解的“底物轮廓”以及抑酶活性;应用超薄层分析等电聚焦电泳技术检测了β-内酰胺酶的等电点(pI),并与标准产酶菌株的β-内酰胺酶进行了比较。结果提示:细菌对Ceftazidime耐药后,β-内酰胺酶活性增加13～107倍;这类β-内酰胺酶具有如下特点:(1)水解头孢菌素类强于水解青霉素类;(2)舒巴克坦(5μg/ml)对这类酶无抑制作用,而同等剂量的邻氯青霉素却能明显抑制,(3)pI均≥8.0,与标准质粒介导的β-内酰胺酶的性质不同,符合染色体介导的头孢菌素酶的性质。此外,作者发现pI为8.2或8.4的4株耐药菌的β-内酰胺酶尚未见文献报道。     

头孢菌素类抗生素的耐药性比较研究

实验应用分光光度计观察了体外培养基中细菌在CPT,CTZ,β—内酰胺酶以及酶抑制剂MCIPC单独和相互作用下的生长浊度变化。①分别单用CPT(10MIC)和CTZ(15MIC)均可溶解细菌;而当加入微量酶液则可明显拮抗。②上述实验系统中同时加用MCIPC(1/16MIC)则能翻转酶对CPT和CTZ溶菌作用的拮抗而出现溶菌。③但当CPT或CTZ分别与酶在菌液中孵育10分或30分钟后,再加用等量MCIPC时仅能翻转酶对第三代头孢菌素-CTZ的拮抗,重新再现溶菌作用,而此时对第一代头孢菌素—CPT的溶菌作用则不能再现。该实验为第三代头孢菌素的非水解屏障耐药机制提供了重要依据。