人工血管表面内皮细胞种植研究的进展

材料植入机体诱导的血栓形成是人工血管临床应用最为主要的限制因素之一,在材料表面种植内皮细胞可能是目前解决这一问题最有效的方法,本文试就血管内皮细胞的促凝及抗凝功能,内皮细胞在材料表面生长分化的影响因素和人工血管内皮细胞种植的实验室研究与临床等方面的最新进展及其应用前景作了简要介绍。     

壳聚糖基因纳米粒子诱导L02细胞凋亡的机制研究

目的研究壳聚糖基因纳米粒子（CGNP）引起人正常肝细胞系L02细胞凋亡的分子机制。方法通过复凝聚方法制备CGNP,用原子力显微镜和粒度分析仪进行纳米粒子的表征;将浓度分别为5,10,30,50ug／mL（以DNA含量计）的CGNP与L02细胞共育,采用荧光分析技术检测活性氧自由基（ROS）的含量,运用Western-blot方法检测细胞色素C（Cyt C）的释放。结果CGNP平均粒径为115．6nm,粒径范围在74．14～136．28nm。当CGNP的浓度大于30ug／mL时,胞浆中有少量的Cyt C释放;当浓度大于50ug／mL时,ROS的量显著增加。结论当达到一定浓度时,CGNP可影响细胞线粒体的功能,从而引起细胞凋亡。     

功能化多壁碳纳米管对血管内皮细胞毒性的初步研究

目的:由于碳纳米管的广泛应用,其对人类及环境造成的影响日益受到人们的关注.血管是碳纳米管进入人体的首要通道之一,因此探讨功能化与原始状态的多壁碳纳米管对血管内皮细胞的细胞毒性作用具有重要意义.方法:自人脐静脉分离血管内皮细胞,免疫组化进行细胞鉴定.选择0.5～1 μm经羧基修饰的功能化多壁碳纳米管(f-CNTs)与同等长度未经修饰的多壁碳纳米管(p-CNTs)制备颗粒悬液,与血管内皮细胞共育后,利用噻唑蓝实验(MTT比色法)检测细胞活力,透射电镜进行细胞形态学观察;制备碳纳米管透析液,通过MTT实验检测其对细胞的毒性作用.结果:①2种纳米管均对原代脐静脉内皮细胞(HUVEC)产生一定的毒性作用,而且其细胞毒性随剂量递增呈上升趋势.与细胞共育24 h后,p-CNTs的毒性大于f-CNTs;而共育48 h及72 h后,f-CNTs毒性大于p-CNTs.②透射电镜实验表明,f-CNTs共育细胞内空腔明显多于p-CNTs,而空腔内f-CNTs聚集体紧密程度明显小于p-CNTs.③对2种多壁碳纳米管透析后的细胞培养基对细胞活力无明显影响.结论:根据上述结果笔者推测.p-CNTs细胞毒性的主导因素是聚集程度,f-CNTs对细胞毒性的主导因素为表面效应.进入细胞的碳纳米管数目增多,造成细胞损伤或阻断细胞内代谢通路,可能是共育后期f-CNTs细胞毒性大于p-CNTs的原因.     

壳聚糖及其修饰物载基因纳米粒子对人初始CD4+T细胞分化的影响

目的 考察壳聚糖及烷基化修饰壳聚糖载基因纳米粒子对人初始CD4+T细胞是否有促分化作用.方法 将壳聚糖或烷基化修饰壳聚糖与去除内毒素的质粒DNA按N/P比为4∶1的比例通过静电作用制备载基因纳米粒子,然后将纳米粒子与人初始CD4+T细胞共孵育,于12、24、48 h以后分别取上清,离心,检测上清中细胞因子IL-4和IF...     

组织因子途径抑制因子/绿色荧光蛋白双顺反子真核表达载体构建及其在NIH 3T3细胞中表达

目的构建含人组织因子途径抑制因子(TFPI)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子真核表达载体,并验证其在NIH 3T3细胞中的表达,为血管再狭窄的防治提供一个具有示踪和治疗双重作用的有效载体。方法以含有全长cDNA的pIRES-TFPI为模板,多聚酶链反应(PCR)扩增TFPI全长cDNA,经酶切后插入到pIRES2-AcGFP1-Nuc载体中,构建成双顺反子真核表达载体,重组质粒经酶切图谱分析、PCR扩增及测序鉴定后命名为pIRES2-AcGFP1-Nuc-TFPI。将其转染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达,以RT-PCR检测TFPI在细胞内的表达。结果经酶切图谱分析、PCR扩增及DNA测序证实双顺反子真核表达载体构建正确;荧光显微镜可观察到细胞内GFP的表达;RT-PCR证实经TFPI基因转染的细胞内TFPI mRNA表达增高。结论成功构建了包括TFPI和GFP的真核双表达载体,并使其在NIH3T3细胞中顺利表达。     

聚氯乙烯动脉导管对血液组织因子活性影响的研究

本文钭实验犬分成３组，即普通聚氯乙烯导管组、医用聚氯乙烯导管组和对照组，探讨了生物材料对血液组织因子活性的影响作用，结果发现：在植入股动脉后２－８ｈ，两各聚氯乙烯导管均使血液组织因子活性显著升高，与对照组相比，Ｐ〈０．０１；两种导管之间比较差别也非常显著，术后２ｈ，Ｐ〈０．０５；术后８ｈ，Ｐ〈０．０１；按血液组织因子活性升高程度从高到低的顺序排列依次是：普通聚氯乙烯导管组〉医用聚氯乙导管组〉对照组     

人工血管表面内皮细胞种植研究的进展

材料植入机体诱导的血栓形成是人工血管临床应用最为主要的限制因素之一 ,在材料表面种植内皮细胞可能是目前解决这一问题最有效的方法 ,本文试就血管内皮细胞的促凝及抗凝功能、内皮细胞在材料表面生长分化的影响因素和人工血管内皮细胞种植的实验室研究与临床等方面的最新进展及其应用前景作了简要介绍。     

胚胎干细胞的定向心肌分化及其调控机制

胚胎干细胞是具有分化为各种类型组织细胞潜能的全能干细胞,可在体外大量扩增,细胞因子、激素、诱导剂和细胞内转录因子等可诱导和调控胚胎干细胞进行心肌细胞定向分化,这将使干细胞移植治疗心肌损伤性疾病成为可能。探讨胚胎干细胞向心肌细胞的定向分化及其调控机制,进而可在体内外调控干细胞向心肌细胞的定向分化,这将为临床应用干细胞分化新生心肌细胞以治疗心肌损伤性疾病提供理想的细胞来源和可靠的理论依据。     

多微孔长效缓释药物胶囊——I.聚己内酯微孔管的制备和体外药物释放评价

本文报道了用生物降解性材料制成的可吸收性多微孔缓释胶囊,药物用尽后空囊在体内逐渐降解吸收,不需要再动手术取出;胶囊本身具有多微孔结构,增加了药物透过性,只需植入一根与Norplant同样大小的胶囊即可达到有效的药物浓度。     

包载治疗基因的聚合物纳米粒子:Ⅰ.纳米粒子制备及动物模型基因治疗实验研究

以可生物降解材料聚乳酸聚乙醇酸共聚物（Poly—dl—lactic—cp—glycolic，PLGA）为原料，采用多相乳化技术制备载VEGP纳米粒子。并对纳米粒子的粒径，VEGF含量，体外释放等进行了测定。VEGF纳米粒子和VEGF裸质粒被注射到兔下肢缺血模型的缺血部位，通过RT—PCR，免疫组化和血管造影等技术来验证基因治疗的效果，评价VEGF纳米粒子作为基因载体在动物模型基因治疗中的效率。制备的VEGF纳米粒子的平均粒径约为300nm，包埋效率在96％以上，纳米粒子中VEGF含量约4％。可在体外维持恒定释放约两周。两周基因注射结果表明VEGF-NP治疗组与裸质粒VEGF治疗组的毛细血管密度明显高于对照组，VEGF纳米粒子组（81．22per mm^2），对照组（29．54mm^2），两者有显著性差异（P〈0．05）。RT—PCR结果显示VEGF纳米粒子组表达（31．79au＊mm）明显高于VEGF裸质粒组（9．15au＊mm）。在动物模型中VEGF纳米粒子是比裸质粒DNA更好的基因载体系统，结果显示了纳米粒子可望在人类基因治疗中得到很好的应用。