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目的研究壳聚糖基因纳米粒子(CNP)、精氨酸化壳聚糖基因纳米粒子(ANP)和十六烷基化壳聚糖基因纳米粒子(HNP)对人正常肝细胞系L02细胞的作用。方法采用复凝聚方法制备CNP、ANP和HNP,粒度及zeta电位分析仪进行纳米粒子表征。将浓度分别为5、10、30、50μg/ml(以DNA含量计)的各种纳米粒子与L02细胞共育,采用MTT法进行细胞毒性评价,流式细胞分析技术进行细胞凋亡检测。结果CNP、ANP和HNP的zeta电位为12.10~14.63mV,粒径约为148.07~179.47nm。当各基因纳米粒子浓度为30μg/ml时,细胞存活率开始降低;达到50μg/ml时,存活率降至最低。当各基因纳米粒子浓度为30μg/ml时,可以诱导L02细胞发生凋亡,随纳米粒子浓度的升高,凋亡率升高。结论当达到一定浓度时,CNP、ANP和HNP对L02具有一定细胞毒性,可诱导细胞产生凋亡。 相似文献
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不锈钢血管支架蛋白涂层和携带质粒DNA的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨在不锈钢冠状动脉支架上携带质粒基因,为心血管再狭窄基因治疗的临床应用提供试验依据。方法:支架表面用交联蛋白涂层;采用双官能团偶联剂将抗DNA抗体以化学键结合在蛋白涂层上.再与表达绿色荧光蛋白的质粒DNA免疫偶联:用同位素标记的抗体评价抗体与支架结合的稳定性,用体外细胞培养试验验证支架携带基因的转染效果。结果:交联蛋白涂层上化学键结合抗DNA抗体的量比单纯物理吸附高约15倍,支架上通过抗DNA抗体免疫偶联质粒DNA的细胞转染效率明显高于单纯物理吸附携带基因的支架。结论:本研究成功地在金属冠状动脉支架上用化学和免疫偶联携带质粒基因,实现了细胞培养中局部高效的基因表达。 相似文献
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目的:由于碳纳米管的广泛应用,其对人类及环境造成的影响日益受到人们的关注.血管是碳纳米管进入人体的首要通道之一,因此探讨功能化与原始状态的多壁碳纳米管对血管内皮细胞的细胞毒性作用具有重要意义.方法:自人脐静脉分离血管内皮细胞,免疫组化进行细胞鉴定.选择0.5~1 μm经羧基修饰的功能化多壁碳纳米管(f-CNTs)与同等长度未经修饰的多壁碳纳米管(p-CNTs)制备颗粒悬液,与血管内皮细胞共育后,利用噻唑蓝实验(MTT比色法)检测细胞活力,透射电镜进行细胞形态学观察;制备碳纳米管透析液,通过MTT实验检测其对细胞的毒性作用.结果:①2种纳米管均对原代脐静脉内皮细胞(HUVEC)产生一定的毒性作用,而且其细胞毒性随剂量递增呈上升趋势.与细胞共育24 h后,p-CNTs的毒性大于f-CNTs;而共育48 h及72 h后,f-CNTs毒性大于p-CNTs.②透射电镜实验表明,f-CNTs共育细胞内空腔明显多于p-CNTs,而空腔内f-CNTs聚集体紧密程度明显小于p-CNTs.③对2种多壁碳纳米管透析后的细胞培养基对细胞活力无明显影响.结论:根据上述结果笔者推测.p-CNTs细胞毒性的主导因素是聚集程度,f-CNTs对细胞毒性的主导因素为表面效应.进入细胞的碳纳米管数目增多,造成细胞损伤或阻断细胞内代谢通路,可能是共育后期f-CNTs细胞毒性大于p-CNTs的原因. 相似文献
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组织因子途径抑制因子及其医学应用前景 总被引:1,自引:0,他引:1
外源凝血途径起始于组织因子 / F a活性复合物的形成。组织因子途径抑制因子是主要的凝血抑制因子之一 ,通过和 TF/ F a以及 FXa形成四聚体抑制这一过程。研究表明 ,组织因子途径抑制在诸如动脉粥样硬化 ,血管再狭窄 ,弥漫性血管内凝血等疾病可能有潜在的治疗功能 相似文献
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人类组织因子途径抑制因子属于库尼(Kunitz)型丝氨酸蛋白酶抑制剂家族蛋白,分为组织因子途径抑制因子-1(tissuefactorpathwayinhibitor-1,TFPI-1)和组织因子途径抑制因子-2(tissuefactorpathwayinhibitor-2,TFPI-2)。TFPI-1以抗凝血作用为主,而TFPI-2是广谱丝氨酸蛋白酶抑制剂。二者在结构上有部分同源性,均由3个重复的Kunitz结构域组成。但二者在基因序列、组织来源、分布和作用机理上的很大差异,导致二者在多种生理和病理过程中发挥的作用也大不相同。就有关研究进展做一综述。 相似文献
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用分子量为50kDa和400kDa的壳聚糖分别和[α-32P]dATP标记的质粒DNA,在不同的N/P比下,通过复凝聚方法形成基因纳米粒子。对形成的壳聚糖基因纳米粒子(Chitosan gene nanoparticle,CGN)进行表征,评价CGN体外细胞毒性,研究两种壳聚糖形成的基因纳米粒子被A10和K562细胞摄入的量和速度。结果表明:(1)随着壳聚糖分子量和N/P比的增大,形成的基因纳米粒子更易于进入细胞,同时显示纳米粒子的zeta电位与细胞摄入量之间存在关联性;(2)壳聚糖基因纳米粒子的毒性远远小于商品化的细胞转染试剂Lipofectamine2000。 相似文献
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组织因子途径抑制因子是机体凝血过程的主要抑制因子,在血栓形成性疾病的防治中具有广阔的应用前景。本研究采用pGEX—2T为表达载体、大肠杆菌细胞为表达宿主进行了人组织因子途径抑制因子重组蛋白的制备。制备的重组蛋白产量较高,纯化过程简单,且具有良好的抑制组织因子的功能。 相似文献
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基于PCR的体外诱变技术 总被引:6,自引:0,他引:6
定点突变技术是蛋白质工程中应用的重要技术之一,可以有目的改变DNA序列中的碱基。它不仅可以阐明基因表达的调控机理,还可用研究蛋白质结构与功能间的关系,改造天然蛋白质,使之更符合应用需求。自从PCR技术发明以来,便被用于进行定点突变。综述了各种基于PCR技术的定点突变方法,并与其他定点突变方法进行对比。 相似文献
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目的目前基因治疗方面存在的重要问题是缺乏有效的基因转运体系可以足量、安全地将治疗基因(无论病毒载体或非病毒载体)运送至体内靶细胞并提高其转染效率,以得到基因的高效表达。心血管内基因治疗的特殊性还在于很难把基因专一递送至血管组织的病灶处而不进入血液循环系统。实验研究提出了一种携带质粒DNA的烷基化壳聚糖纳米粒的血管内支架,可以有效地将质粒DNA递送至血管壁靶细胞并达到了高效转染的效果。 相似文献
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目的研究证实精氨酸修饰壳聚糖(ACS)制备的载基因纳米粒子显著地提高壳聚糖(CS)基因载体的转基因效率,该文进一步探索ACS摄人及跨膜机制对基因转染效率的影响。方法用荧光标记的CS或者ACS与荧光素酶质粒DNA复合制备CS载基因纳米粒子[壳聚糖载基因纳米粒子(CGN),精氨酸修饰壳聚糖载基因纳米粒子(ACGN)];与大鼠平滑肌细胞系A10细胞、不同跨膜通道的抑制剂(氯丙嗪、非律平和Dynasore)共孵育,以评价其基因递送的跨膜途径。通过与不同跨膜途径的抑制剂共转染,观察不同跨膜通道对转基因效率的影响。结果ACGN细胞摄入量是CGN的2倍[(1.534±0.016)μg/mg蛋白质US(0.755±0.007)μg/mg蛋白质1。与CGN相比,ACGN内吞通道有所改变,非律平(质量浓度5μg/mL,小窝蛋白内吞通道的特异抑制剂)能显著地抑制ACGN的细胞摄入(46.6%)和转基因效率(48.2%),而小窝蛋白内吞通道对CGN作用不明显。结论实验数据显示,ACS改变了基因载体的内吞通道,促进了基因纳米粒子的细胞摄入量,同时也大幅度地提高了转基因效率。 相似文献