抗独特型卵巢癌疫苗的研究

根据免疫网络学说,抗独特型抗体中的Ab2β具有模拟原始抗原的作用,同时也是重要的免疫调节因子.抗独特型抗体能打破免疫耐受,作为肿瘤疫苗具有良好的应用前景.卵巢癌相关抗原OC166-9在大多数上皮性卵巢癌有表达,我中心经过系列研究陆续制备了鼠源的模拟OC166-9的抗独特型抗体6B11、6B11单链抗体(6B11scFv)、6B11scFv和人粒细胞集落刺激因子(hGM-CSF)的融合蛋白(6B11GM).鼠源抗体反复应用于人体可产生人抗鼠抗体,为了实现人源化、增加6B11scFv的免疫原性、提高分子质量、降低鼠源性,我中心又制备了抗独特型微抗体(6B11VLVHhc).同时为了验证上述抗体的免疫作用,我们构建了人淋巴细胞免疫重建的荷人卵巢癌的严重联合免疫缺陷小鼠模型.上述系列研究为6B11卵巢癌抗独特型疫苗用于临床积累了大量实验依据.     

人卵巢上皮癌细胞原代培养及细胞系BUPH:OVSC-1的建立

目的:为人卵巢上皮癌的研究提供更多体外研究模型,确立卵巢上皮癌原代培养的条件,建立细胞系.方法: 将25例卵巢上皮癌手术切除的肿瘤组织或腹水标本进行体外培养,比较不同组织培养方法的效果.对所建卵巢癌细胞系的形态学、染色体核型、生长增殖及裸鼠种植情况进行观察.结果: 建立一套人卵巢上皮癌原代培养方法,使其体外培养传代数扩展至10～15代.经原代培养得到一株人卵巢癌细胞系BUPH:OVSC-1,其形态学、染色体核型分析、接种致瘤性的观察结果表明,该细胞系符合人体恶性细胞特征.裸鼠种植瘤病理切片该细胞呈肉瘤样细胞形态,电镜及角蛋白免疫组化证实其为上皮起源.结论:应用改良的卵巢上皮癌原代培养方法能改善细胞的体外生存期.BUPH:OVSC-1是一株特殊的人卵巢癌细胞系,符合人卵巢肉瘤样癌细胞系的特征,可作为卵巢肉瘤样癌研究的实验模型.     

转染反义Fas阻断T细胞凋亡及对肿瘤的治疗意义

目的 通过阻断Ｔ细胞的Ｆａｓ信号传递途径,探讨消除肿瘤对Ｔ细胞的攻击及其对肿瘤的治疗意义。方法 流式细胞术、ＲＴ－ＰＣＲ方法检测卵巢癌细胞表达Ｆａｓ和ＦａｓＬ。构建ｐｃＤＮＡ３－反义Ｆａｓ真核表达载体,经脂质体转染Ｊｕｒｋａｔ细胞,流式细胞仪检测Ｆａｓ表达变化。以Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ和ＭＴＴ法检测转染反义Ｆａｓ基因对Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡的影响。采用ＭＴＴ体外杀伤实验观察３ＡＯ对Ｊｕｒｋａｔ细胞杀伤变化。结果 ６种卵巢癌细胞均表达Ｆａｓ和ＦａｓＬ。ｐｃＤＮＡ３－反义Ｆａｓ基因可以使Ｊｕｒｋａｔ细胞表达Ｆａｓ量下降并部分阻断Ｆａｓ单抗诱导的Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡,３ＡＯ对其杀伤减弱。结论 卵巢癌细胞表达ＦａｓＬ可能是其逃逸免疫监视并产生对淋巴细胞攻击的原因之一;应用反义技术阻断Ｆａｓ表达,可部分阻断Ｆａｓ单抗诱导Ｊｕｒ     

卵巢癌相关基因的克隆

目的：筛选和克隆卵巢上皮癌相关基因。方法：用3种锚定引种和8种随机引物,共24种组合进行PCR扩增,通过DD－RTPCR分析正常卵巢上皮和卵巢上皮癌mRNA的基因表达差异,将差异片段分离出来,并回收,克隆和进行斑点杂交鉴定、DNA序列测定,并通过国际互联网张检索GenBank进行同源性分析。结果：获得30个差异表达的片段,经斑点杂交初步筛选,克隆11个差显示的阳性片段。选取其中的5个进行序列分析。结论计算机同源性分析表明,5个均为新基因片段,已收录GenBank。     

~(99m)Tc标记抗卵巢癌单克隆抗体放射免疫导向手术的实验研究

目的：进行99mTc标记卵巢癌单抗放射免疫导向手术研究,为临床应用提供基础。方法：采用改进预锡法标记COC183B2-F(ab′)2和正常鼠IgG(NMIgG),并分别向荷人卵巢癌裸鼠体内注入99mTc-COC183B２-F(ab′)2(单抗组)和99mTc-NMIgG(对照组)。首先在体外进行放射免疫显像(RII)初步决定探测时机,然后采用肿瘤探测仪(GDP)进行体内肿瘤及临近正常组织放射性测量,并计算肿瘤与非肿瘤放射性比值(T/NT)。结果：1改进预锡法单抗99mTc标记率达95%以上,标记后免疫组化染色显示标记物保留较好免疫活性;2GDP体内探测肿瘤最小为0.3cm×0.1cm,分辨瘤与正常组织间最小距离为0.2cm;T/NT(肝)为3.27±0.64、T/NT(脾)为2.23±0.47、T/NT(小肠)为3.33±0.84、T/NT(肌肉)为4.68±0.81,术中可以T/NT比值大于2为肿瘤阳性诊断标准;3RII和GDP体内探测显示,18h后可进行99mTc标记单抗片段放射免疫导向手术。结论：99mTc标记单抗进行卵巢癌放射免疫导向手术可行,有望用于临床。     

卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv/mGM-CSF融合蛋白的构建、表达及活性测定

目的　构建卵巢癌抗独特型单链抗体 6 B11Sc Fv和鼠 GM- CSF融合蛋白 (6 B11m GM) ,以观察其在动物体内诱导的特异性免疫反应 ,为卵巢癌抗独特型疫苗应用于临床提供依据。　方法　用 DNA重组技术 ,将m GM- CSF连于单链抗体 6 B11Sc Fv羧基末端 ,构建重组质粒 p ET30 - 6 B11m GM,转化大肠杆菌 BL2 1(DE3) ,IPTG诱导 ,以包涵体形式获高效表达 ,超声破碎细菌细胞获得包涵体 ,用 8mol.L- 1尿素溶解包涵体后直接稀释复性 ,SDS- PAGE分析蛋白纯度 ,EL ISA分析技术和细胞增殖实验测定融合蛋白的抗体和细胞因子活性。　结果　复性蛋白纯度达 90 %以上。采用氧化型谷胱甘肽 (GSSG)浓度为 1mm ol.L- 1 ,还原型谷胱甘肽 (GSH)浓度为 5 m mol.L- 1 ,10℃复性 48h,复性率达 36 %。表达的融合蛋白分别能与 COC16 6 - 9单抗和大鼠抗小鼠 GM- CSF单抗特异结合 ,并能刺激 m GM- CSF依赖株 NFS- 6 0细胞增殖。　结论　以包涵体表达的融合蛋白 6 B11m GM保留了两种蛋白的活性 ,为研究融合蛋白在体内的免疫功能提供了基础     

硝酸咪康唑霜与联苯苄唑霜治疗浅部真菌病的临床观察

硝酸咪康唑(商品名达克宁霜)和联苯苄唑霜都是广谱抗真菌剂。我们对其治疗浅部真菌病作了疗效观察,现将结果报道如下。     

系统性红斑狼疮SLEDAI评分和泼尼松用量的分析

目的探讨泼尼松在SLE治疗中的规范化用量。方法随机选择97份SLE患者的病例资料,进行SLEDAI评分,并将其按不同分值分为四组。分别统计各组中泼尼松用量(或转换后等同的泼尼松用量)的均值、95%的用药可信区间,并比较各组用药量间差异是否有统计学意义。结果泼尼松用量随着SLEDAI评分的增加而增加。Ⅰ组泼尼松用量均值及95%的用药可信区间为:0.51mg/(kg·d),0.43～0.59 mg/(kg·d);Ⅱ组为0.89mg/(kg·d),0.79～0.99 mg/(kg·d);Ⅲ组为1.13 mg/(k·d),1.02～1.25mg/(kg·d);Ⅳ组为1.63mg/(kg·d),1.47～1.80mg/(kg·d)。各组用药范围不同,差异有显著性意义(P<0.01)。结论不同的SLEDAI评分可以为临床医师合理选择激素用量提供参考。     

人卵巢癌细胞系BUPH:OVSC-1的建立及化疗药物对其生长的影响

目的 :介绍人卵巢肉瘤样癌细胞系BUPH :OVSC 1的建立 ,筛选卵巢肉瘤样癌敏感的化疗药物。方法 :以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料 ,进行体外培养 ,建立人卵巢肉瘤样癌细胞系。通过MTT的方法在相同条件下检测该细胞系对顺铂、阿霉素、足叶乙甙、拓扑替康四种化疗药物的敏感性。结果 :建立卵巢肉瘤样癌细胞系BUPH :OVSC 1,该细胞在体外对阿霉素非常敏感 ,对顺铂较敏感 ,对足叶乙甙和拓扑替康的敏感性较差。结论 :阿霉素与顺铂联合治疗可能是卵巢肉瘤样癌较敏感的化疗方案     

复方中药对黑素细胞迁移和黏附的影响

目的:确定复方中药乙醇提取物对体外培养黑素细胞黏附、迁移的影响.方法:复方中药用70%乙醇提取,正常人黑素细胞来自包皮环切术切取的包皮组织.用包被纤维黏连蛋白的培养板检测黑素细胞黏附,用微孔膜研究黑素细胞迁移.结果:复方中药1号和3号乙醇提取物可促进黑素细胞黏附和迁移(P<0.05),而1、2和3号可以促进黑素细胞迁移(P<0.05).结论:部分复方中药可能通过促进黑素细胞黏附和迁移途径对白癜风起治疗作用.