二氧化硅对人肺泡Ⅱ型上皮细胞纤溶酶原激活物抑制因子-1和激活蛋白-1表达的影响

目的研究SiO2对人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)中纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)及激活蛋白1(AP1)表达的影响,探讨SiO2致肺纤维化的发病机制。方法按SiO2(200μg/ml)与A549细胞共育时间的不同,实验分SiO2刺激0、4、8、16、24h组。利用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、Westernblot及免疫细胞化学SP法检测细胞PAI1mRNA和蛋白的表达;AP1(cjun/cfos)总蛋白及核蛋白表达的检测采用Westernblotting。结果SiO2刺激后,实验组PAI1mRNA及蛋白表达强度随时间延长依次增强,呈直线正相关(rmRNA=0.911,r蛋白=0.902,P<0.05),且实验组PAI1蛋白表达均高于对照组(0.36±0.03),其中24h组(0.73±0.01)表达最强;cjun和cfos核蛋白的表达亦明显高于对照组(0.52±0.02、0.15±0.01),cjun核蛋白的表达4h组(1.54±0.02)最强;cfos核蛋白表达8h组(0.36±0.01)最强;cjun和cfos核蛋白的表达均从孵育16h开始逐渐下降。AP1(cjun/cfos)总蛋白的表达各组间差异无统计学意义(P>0.05);PAI1阳性信号定位于胞浆和胞核。结论SiO2能够诱导A549细胞PAI1的表达,呈现出明显的时间-效应关系,核转录因子AP1在SiO2刺激的早期被激活。     

表达HCV NS3蛋白肝细胞中ERK与NF-κB信号转导通路间的cross-talk研究

目的:研究表达丙型肝炎病毒非结构蛋白3(hepatitis C virus non-structural protein 3, HCV NS3)的肝细胞中细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)与核因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)信号转导通路间的cross-talk.方法:真核表达质粒pcDNA3.1-NS3转染人源永生化肝细胞系QSG7701,建立稳定表达HCV NS3蛋白的细胞株QSG7701/NS3.在丝裂原活化蛋白激酶的激酶(MAP kinase kinase, MEK)抑制剂PD98059(0,30,50,100μmol/L)处理细胞QSG7701/NS3前后,利用Western免疫印迹检测ERK的磷酸化水平及细胞周期素D1(cyclin D1)蛋白的表达;凝胶电泳阻滞迁移试验检测转录激活因子1(activator protrin 1, AP-1)、NF-κB等转录因子活性的改变;流式细胞术检测细胞周期各期百分数的改变;MTT比色法观察其对细胞增殖的影响.结果:HCV NS3蛋白能上调QSG7701细胞的ERK磷酸化水平及cyclin D1的表达水平;PD98059抑制HCV NS3蛋白介导的细胞增殖,下调AP-1和NF-κB的活性及cyclin D1的表达.结论:在表达HCV NS3蛋白的肝细胞中,ERK抑制剂能抑制肝细胞增殖,并呈明显的剂量依赖关系.ERK与NF-κB信号转导通路间可能存在cross-talk,并在肝细胞的增殖和恶性转化中发挥协同作用.     

肝细胞癌组织中PTEN和p27蛋白的表达

目的　研究肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma,HCC)组织中 PTEN和 p2 7蛋白的表达。　方法　利用免疫组织化学技术检测 65例 HCC中 PTEN和 p2 7蛋白的表达。　结果　在 HCC中 ,PTEN和 p2 7蛋白的阳性率分别为 60 %(3 9/ 65 )和 5 3 .85 % (3 5 / 65 ) ,PTEN蛋白阴性表达率 40 % (2 6/ 65 ) ;PTEN和 p2 7蛋白的阳性表达强度之间呈明显正相关(r=0 .7461) ;PTEN和 p2 7蛋白的阳性表达强度与 HCC的分化程度明显相关 ,分化愈差 ,表达愈强 (p<0 .0 1) ,但与患者年龄、性别及肿瘤大小无关。　结论　在 HCC的发生及进展过程中 ,PTEN蛋白表达的缺失和降低可能导致 p2 7蛋白表达减少 ,使其不能有效发挥细胞周期负调控因子的抑瘤作用 ,使得瘤细胞具有更高的恶性程度     

肝硬变和肝癌中细胞凋亡与增殖的关系

利用原位ＤＮＡ末端转移酶标记技术和ＳＰ免疫组化方法检测肝硬变和肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中凋亡细胞和增殖细胞核抗原。结果显示：ＨＣＣ中凋亡细胞密度显著低于肝硬变，而增殖细胞密度明显高于肝硬变。肝硬变中凋亡细胞主要分布于假小叶周边形成“凋亡细胞带”；在癌组织中呈散在分布。提示：肝硬变“凋亡细胞带”的形成可能与肝血流改变有关；肝硬变癌变过程中可能存在细胞选择性增殖。     

p53蛋白在口腔疣状癌组织中的表达及意义

目的 :研究口腔疣状癌中p5 3蛋白的表达状况及与口腔粘膜鳞状细胞癌的表达对比 ,探讨p5 3蛋白在口腔疣状癌发生过程中的生物学意义。方法 :采用SP免疫组化方法分别检测 8例正常口腔粘膜、1 3例疣状癌、1 0例高分化鳞癌、1 0例低分化鳞癌组织中p5 3蛋白的表达。结果 :疣状癌p5 3蛋白阳性表达率为 6 9.2 % (9/ 1 3) ,高分化鳞癌组和低分化鳞癌组阳性表达率均为 80 % (8/ 1 0 ) ,而正常口腔粘膜上皮均呈阴性表达 ,疣状癌p5 3蛋白平均染色强度低于高分化鳞癌和低分化鳞癌组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;高分化鳞癌的平均染色强度低于低分化鳞癌组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :口腔疣状癌的发生过程中可能存在p5 3基因突变 ,疣状癌与高分化鳞癌、低分化鳞癌组织中p5 3蛋白的表达差异可作为其鉴别诊断的有用指标之一     

丙型肝炎病毒蛋白对细胞信号转导通路的影响及其与肝癌发生的关系

丙型肝炎病毒(HCV)可能通过其表达的蛋白质作用于宿主细胞,导致肝炎、肝硬化和肝细胞癌的发生,其中HCV核心蛋白、NS3和NS3蛋白与细胞转化的关系密切,上述三种HCV蛋白对细胞信号转导通路影响的研究已取得了一定的进展.     

实验性变态反应性神经炎周围神经浸润CD4(+)T细胞的凋亡

为探讨实验性变态反应性神经炎(EAN) 中周围神经浸润CD4( + ) T细胞的凋亡,应用免疫组织化学和原位末端标记法动态检测不同发病阶段EAN 大鼠坐骨神经浸润CD4( + ) T 细胞的形态学改变及断裂的DNA 片段。结果发现具有凋亡形态学特征的浸润CD4( + ) T 细胞于免疫后第18 d 出现,在第22 d 达高峰后下降,第30 d 基本消失。原位末端标记法证实凋亡CD4( + ) T 细胞中存在断裂的DNA 片段。提示CD4( + ) T细胞凋亡是EAN 浸润CD4( + ) T细胞的重要清除机制     

鼻咽癌细胞凋亡与细胞增殖的原位观察

应用原位末端标记（ＩＳＥＬ）ＤＮＡ 片断技术和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ） 免疫组化染色方法,观察鼻咽癌（ＮＰＣ） 及其癌旁粘膜上皮的细胞凋亡和细胞增殖。结果显示：①ＮＰＣ 中可见片状分布的ＩＳＥＬ 阳性细胞,其形态不表现凋亡特征,以泡状核细胞癌更常见。②ＮＰＣ 的ＩＳＥＬ 阳性率及ＩＳＥＬ 染色强度指数（ＳＩＩ） 高于癌旁粘膜（ Ｐ ＜ ０ ．０５） ;ＮＰＣ 的ＩＳＥＬ ＳＩＩ 与ＰＣＮＡ ＳＩＩ 呈正相关（ ｒ ＝ ０ ．３４１ , Ｐ ＜ ０ ．０５） ,但其ＩＳＥＬ 阳性率及ＳＩＩ均低于ＰＣＮＡ（ Ｐ ＜ ０ ．０１） 。③泡状核细胞癌ＩＳＥＬＳＩＩ和ＰＣＮＡＳＩＩ均高于低分化鳞癌（ 分别为Ｐ ＜ ０ ．０１ , Ｐ ＜ ０ ．０５） ,前者５ 年生存率相对较高。提示ＮＰＣ 细胞增殖与细胞凋亡有关。     

TGFβ1及其受体TGFβ RI在唾液腺腺样囊腺癌组织中的表达

目的 :研究TGFβ1 及其TGFβRI在唾液腺腺样囊腺癌中的作用。方法 :应用免疫组化SP法检测唾液腺腺样囊腺癌中TGFβ1 和TGFβRI的蛋白表达 ,并与正常唾液腺及唾液腺多形性腺瘤作定量比较。结果 :①TGFβ1 和TGFβRI蛋白在正常唾液腺组织中主要表达于各级导管上皮细胞和肌上皮细胞中 ,腺泡细胞无表达 ;②TGFβ1和TGFβRI蛋白在唾液腺多形性腺瘤组织中主要表达于呈腺管状、条索状及团块状排列的肿瘤上皮细胞中 ,其表达水平与正常唾液腺差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;③唾液腺腺样囊腺癌组织中TGFβ1 蛋白表达水平显著增高 (P <0 .0 1) ;TGFβRI蛋白表达水平显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :TGFβRI蛋白的低表达在唾液腺腺样囊腺癌的发生发展中起重要作用 ,腺样囊腺癌独特的不良生物学行为可能与TGFβ1 蛋白的过度表达以及TGFβRI蛋白的低表达有关。     

鼻咽癌组织中nm23-H1和survivin蛋白表达及其临床意义

目的探讨nm23H1和survivin基因蛋白表达与鼻咽癌（NPC）预后的相关性，方法对115例NPC放疗前活检标本，应用免疫组织化学技术检测nm23-H1和surivin基因蛋白在NPC组织中的表达情况，并分析两基因的表达与NPC分期、放疗敏感性、生存率、转移及复发之间的关系。结果NPC组织中nm23-H1和survivin蛋白阳性表达率分别为47．8％和68．7％。NPC分期、淋巴结转移、生存率及远处转移与nm23-H1蛋白低表达有密切关系，而survivin的高表达则与鼻咽癌的颈淋巴结转移、放疗敏感性、生仔率及复发有密切关系。nm23-H1蛋白表达与survivin表达呈负相关（P〈0．05）。结论nm23-H1蛋白低表达和survivin高表达对判断病变进展、预测放疗敏感性、生存率及转移和复发有重要参考价值。