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多药耐药基因RNAi重组腺病毒构建 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 构建抑制多药耐药基因(MDR1)表达的RNAi腺病毒载体,探讨基因治疗改善癫痫多重耐药现象的可行性.方法 根据大鼠MDR1基因序列,选择3个19nt的靶序列,设计并合成3对66nt含编码短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸,构建pSIREN-shuttle-MDR1重组质粒,测序分析正确后转染通过马桑内酯诱导的已表达多重耐药蛋白的大鼠星形胶质细胞,通过RT-PCR法测定多药耐药蛋白(P-gp)表达量,判断所设计的3条DNA序列对于P-gp表达的抑制作用.选择抑制效率最高的1个重组质粒,将其中的MDR1 shRNA表达结构酶切后插入腺病毒载体pAdeno-X,构建的pAdeno-MDR1经Pac1酶切后与脂质体共转染HEK293细胞进行病毒包装扩增纯化,所得病毒液作酶切电泳及测序分析正确后再转染大鼠星形胶质细胞模型.RT-PCR及免疫组织化学法分别测转染前后星形胶质细胞模型的MDR1及P-gp表达量.结果 重组质粒及pAdeno-MDR1病毒经PCR、酶切、测序分析证实构建正确.病毒滴度为6×109 pfu/mL.重组腺病毒转染星形胶质细胞后MDR1及P-gp表达量减少,干扰效率接近100%.结论 成功构建针对大鼠MDR1基因的RNAi腺病毒载体,并通过体外实验证实其对大鼠MDR1基因的高效抑制作用.为进一步探索难治性癫痫的多药耐药机制和基因治疗奠定了基础. 相似文献
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本文对明代医家张景岳对于便秘的学术思想做一归纳总结浅析,张氏认为秘结,即便秘,可以简单的分为阴结、阳结两种;肾司二便,对于便秘的病因,除了外感伤寒阳明腑实,多是由于肾的阴阳失衡所致,当然从整体观上讲,便秘与五脏失调均有关系。并在治疗上作出了指导:阳结者,邪有余,宜攻宜泻;阴结者,正不足,宜补宜滋,于临床大有裨益。 相似文献
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目的 本研究通过生物信息学技术分析Barrett食管(BE)患者与健康对照的基因芯片数据,筛选BE的差异表达基因,探寻BE的发病机制及生物标记物,预测BE治疗的潜在中药。方法 从基因表达数据库(GEO)提取GSE34619,GSE13083,GSE1420,GSE13898,GSE26886基因芯片原始数据,使用GEO2R筛选差异表达基因(DEGs)。利用DAVID数据库对DEGs进行功能和信号通路的富集分析,String数据库构建蛋白互作网络,Cytoscape软件及其插件筛选核心基因,并在TCGA数据库中检测核心基因的表达。使用Kaplan Meier-plotter算法分析关键基因对食管腺癌患者整体生存率的影响。将核心基因与中药预测工具相互映射,筛选治疗BE可能的靶向中药。结果 筛选出下调DEGs109个,上调DEGs24个。上调DEGs的KEGG通路主要富集在自噬和mTOR信号通路,下调DEGs主要富集在胰腺分泌,胃酸分泌,胆汁分泌,酪胺酸代谢等通路。RRAGD,APP,KRT20,EPCAM,CFTR和AGR2筛选为关键基因。AGR2和EPCAM的异常表达与食管腺癌患者整体生存率有关。筛选治疗BE的潜在中药有三七、丹参、牛膝、姜黄、人参、白果、黄芪、甘草等。结论 RRAGD,APP,KRT20,EPCAM,CFTR和AGR2可能与BE发生发展相关,APP、EPCAM、CFTR、ACR2可作为BE患者风险分级指标。以丹参、三七为代表的活血祛瘀药和以人参、黄芪为代表的补气药可能为BE治疗的潜在靶向中药。本研究将差异基因表达与中药治疗靶点相结合,以期阐明BE的发病机制,寻找BE高危预警标记物,为中药新药研发提供了理论依据和技术支持,为BE诊断治疗的中西医结合之路做出了初步探索。 相似文献
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丙戊酸钠注射液治疗成人难治性癫痫持续状态的临床效果分析 总被引:5,自引:0,他引:5
目的探讨丙戊酸钠注射液治疗地西泮不能控制的难治性癫痫持续状态(RSE)的疗效和安全性。方法1999年9月-2007年5月连续登记的25例经地西泮静滴、苯巴比妥肌注治疗未能控制的RSE患者,评估其使用丙戊酸钠注射液控制RSE的疗效及不良反应。患者中男性10例,女性15例,平均年龄为55岁。发作类型包括全面强直阵挛发作持续状态(GTCS)14例,复杂部分发作持续状态(CPS)7例,单纯部分发作持续状态(SPS)2例,肌阵挛持续状态(MS)2例。25例患者中病毒性脑炎13例,停药或不正规服用抗癫痫药物(AEDs)的癫痫患者5例,颅脑手术后3例,脑梗死后2例,中毒后1例,脑瘫1例,其中既往有癫痫病史者9例。结果丙戊酸钠治疗后,22例患者1h内癫痫持续状态(SE)得到控制,1h后意识基本恢复。治疗前后的血、尿常规,肝、肾功能,心电图及血压、心率、呼吸无明显变化,无脑病发生。3例未控制患者痫性发作频率降低,每次发作持续时间缩短。结论丙戊酸钠注射液作为非镇静性抗惊厥药物对地西泮未能控制的多种类型的RSE是安全有效的,患者意识恢复较快,没有明显的不良反应。 相似文献
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慢性乙型病毒性肝炎(慢乙肝)是临床常见的感染性疾病,其病程可长达20-30年。中医治疗慢乙肝有特定的优势。慢乙肝中医证候的蛋白质组学研究是了解慢乙肝不同证候及证候间的分子标签、发现生物标志物和中药作用靶点的有效途径。本文就目前蛋白质组学方法应用于慢乙肝中医证候的研究现状进行综述,介绍常见的蛋白质组学技术应用于慢乙肝不同证候,包括肝胆湿热证、肝郁脾虚证、虚证、脾胃湿热证型以及证候之间的差异蛋白质组学相关研究,旨在为慢乙肝中医证候客观化研究提供一定的生物学基础依据。 相似文献
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慢性乙型病毒性肝炎舌象研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
"辨舌质可辨五脏之虚实,察舌苔可观六淫之深浅."观察舌象是中医诊治疾病的重要方法与手段,本文就1989年至2004年5月乙型病毒性肝炎舌象研究文献进行综述,以显示目前的研究状况. 相似文献
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系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种自身免疫性疾病,表现为自身抗体形成和免疫复合物沉积,以多系统、多脏器损伤为特征。研究发现在SLE患者中,具有免疫促进作用的T辅助细胞17 (T helper 17 cell,Th17)比例较高,而具有免疫抑制功能的调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)含量降低,二者失衡是SLE的重要发病机制。常规药物治疗虽能短期获益,但高昂的治疗费用及严重的不良反应均限制其长期使用,迫使人们寻找新的治疗策略。中医药以副作用少、多成分、多途径、多靶点等优点得到广泛认可,十分符合SLE新型治疗方式的需求。近年来,中医药通过恢复Th17/Treg平衡治疗SLE已开展大量研究并取得一定成果。文中整理了中药单体、成分及复方干预SLE患者Th17/Treg平衡的研究。总结了中医药调节Th17/Treg平衡防治SLE的作用机制,进一步分析发现中医药干预Th17/Treg平衡主要是从减少SLE血清中相关抗体、控制炎症反应、减轻脏器病理损伤等方面发挥治疗作用。本研究有助于为临床运用中医药辅助或替代治疗SLE提供... 相似文献