低温冻存基质细胞特性的研究

目的：探讨骨髓细胞低温冻存后贴壁基质细胞培养生长的基本特性，为低温冻存基质细胞的应用提供实验依据。方法：取新鲜骨髓和经Dexter长期培养法培养14d的骨髓贴壁基质细胞（称“新鲜基质细胞”），用5％二甲基亚砜－6％羟乙基淀粉为保护剂，－80℃冰箱降温，－196℃液氮冻存（前者称“冰存骨髓”，后者称“冻存基质细胞”）2周，复温后，再用Dexter法培养这些细胞，检测细胞增殖、细胞形态、细胞化学染色、细胞表面及基质细胞支持另一骨髓造血细胞形成的鹅卵石造血区、长期培养起始细胞等为指标，比较它们的生长特性、成分及功能。结果：生长特性：冻存骨髓比新鲜骨髓出现贴壁细胞、细胞丛和细胞融合成片迟1－2d，冻存基质细胞融合成片比新鲜基质细胞迟12－18h；冻存骨髓与新鲜骨髓，冻存基质细胞与新鲜基质细胞增殖数比明显低。细胞成分；冻存骨髓比新鲜骨髓形成的成纤维细胞、内皮细胞比率下降，而巨噬细胞和脂肪细胞比率升高，冻存基质细胞上述现象更明显；内含凋亡小体的细胞冻存基质细胞多于新鲜基质细胞，冻存骨髓细胞多于新鲜骨髓；冻存骨髓和冻存基质细胞台盼蓝拒染率分别为95．2％、89．5％；冻存骨髓、冻存基质细胞CD14、人白细胞DR抗原表达百分率比新鲜骨髓、新鲜基质细胞高，CD45、CD33反之。细胞功能；新鲜骨髓、新鲜基质细胞、冻存骨髓和冻存基质细胞形成的鹅卵石造血区和长期培养起始细胞，生长良好，无显著差异。结论：不管是骨髓细胞还是经培养生成的贴壁基质细胞，经5％二甲基亚砜－6％羟乙基淀粉冷冻冻存、复温后培养，生物特性有一定损伤，但仍有较好的支持造血功能。     

人Bcl-2蛋白的基因克隆、表达及初步活性分析

目的：以特定形式对高度疏水性的人Bcl-2(hBcl-2)蛋白进行可溶性表达，获得非疏水性hBcl-2蛋白并具备生物学结合活性，为进一步研究hBcl-2三维结构并在此基础上研发特异性小分子药物提供充足的蛋白样品。方法：用PCR方法对hBcl-2基因进行克隆重组，插入原核表达载体pET28a( )中。用Western Blot和MALDI-TOF生物质谱鉴定，采用荧光极化方法进行活性测定。结果：重组hBcl-2在E．Coli中实现了高效、可溶性的融合表达，重组蛋白经纯化至电泳纯，具备了与Bcl-2家族Bak蛋白BH3功能域特异结合的能力，表明原核表达的重组hBcl-2具有较好的结合活性。结论：成功地对重组hBcl-2蛋白进行了可溶性表达和活性测定。     

蛋白酶体抑制剂对正常骨髓单个核细胞的影响

泛素 蛋白酶体通路是降解真核细胞内细胞因子等短寿蛋白的主要机制。蛋白酶体抑制剂可诱导人多种肿瘤细胞凋亡 ,被认为可发展为很有前途的抗肿瘤药物[1 ] ,但其对正常骨髓造血功能有无影响尚未见报道。我们首次研究蛋白酶体抑制剂Ｚ ＬＬＬ ＣＨＯ对正常骨髓单个核细胞 (ＭＮＣ)的影响 ,发现与白血病细胞的巨大差异 ,并初步探讨了其可能的分子机制。材料和方法1　药物及试剂　Ｚ ＬＬＬ ＣＨＯ由美国底特律医学中心Ｂｅｎ博士提供 ,二甲基亚砜配成 10 0ｍｍｏｌ Ｌ的贮存液 ,- 2 0℃保存 ,用时稀释。鼠抗人ｂｃｌ 2单抗 (ＳＣ 5 0 9)购于Ｓ…     

超声造影对甲状腺乳头状癌甲状腺外侵犯的诊断价值

目的 探讨超声造影(CEUS)对甲状腺乳头状癌(PTC)甲状腺外侵犯(ETE)的诊断价值。方法 选取2017年4月至2019年4月于中国人民解放军总医院第一医学中心超声诊断科行术前常规超声(US)和CEUS检查且经手术病理证实为PTC的患者172例(184个癌结节),回顾性分析结节的声像图特征,评估结节与甲状腺被膜的关系,比较两种手段诊断ETE的效能,分析结节增强水平对ETE诊断效能的影响。结果 CEUS诊断ETE的灵敏度、特异度和准确度分别为78.9%、89.4%和84.2%,US分别为60.0%、86.2%和73.4%,其中,CEUS诊断ETE的灵敏度(P=0.000)和准确度(P=0.009)均明显高于US,但在特异度间差异无统计学意义(P=0.375)。CEUS诊断癌结节ETE的受试者工作特征曲线下面积为0.84,明显高于US的0.73(Z=2.24,P=0.01)。CEUS对ETE的诊断价值与结节增强水平相关,CEUS诊断ETE的灵敏度,特异度及准确度在低增强结节中最高,高增强者次之,等增强者最差。结论 CEUS对PTC ETE的诊断效能高于US,通过CEUS检查可为临床制定治疗决策提供更准确的参考依据。     

超声引导下射频消融治疗T1bN0M0期甲状腺乳头状癌的短期疗效分析

目的 探讨超声引导下射频消融(RFA)治疗T1bN0M0期甲状腺乳头状癌的短期疗效。方法 回顾性分析2014年4月至2019年1月经超声引导下RFA治疗的89例T1bN0M0甲状腺乳头状癌患者。超声引导下RFA采用经峡部入路和移动消融法。消融前及消融后即刻、1、3、6、12个月及其后每6个月进行常规超声和超声造影检查。结果 89枚甲状腺乳头状癌均成功消融,术中未见严重并发症。平均随访时间为(18.8±7.3)个月。随访过程中消融灶体积不断缩小,38个(42.7%)消融灶消失,消融后30个月时的体积缩小率为(99.2±2.3)%。随访过程中2例(2.2%)患者出现复发,1例(1.1%)患者出现颈部淋巴结转移。结论 超声引导下RFA可安全、有效地治疗T1bN0M0期甲状腺乳头状癌患者。     

RNA结合蛋白Rbm38在小鼠胚胎造血发育中的功能研究

目的：探究RNA结合蛋白Rbm38在小鼠造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)发育中的作用。方法：分析造血干细胞发育过程中连续群体的单细胞转录组数据,筛选生血内皮细胞(hemogenic endothelial cell,HEC)和/或造血干细胞前体(hematopoietic stem cell precursor,pre-HSC)阶段表达上调的RNA结合蛋白分子(RNA binding protein,RBP);利用CRISPR/Cas9技术构建基因敲除小鼠模型,将杂合型小鼠交配获得实验用胚胎,按照小鼠胚胎基因型不同将实验分为实验组和对照组,实验组为Rbm38^-/-基因型胚胎,对照组为Rbm38^+/+和Rbm38^+/-基因型胚胎;取材胚胎期11.5 d(embryonic day 11.5,E11.5)孕鼠胚胎的卵黄囊(yolk sac,YS),行体外造血细胞集落形成实验(colony forming unit-culture,CFU-C)检测主动脉-性腺-中肾(aorta-gonad-...     

剔除成骨细胞特异性基因Smad4不影响小鼠造血稳态的维持

体内证实,成骨细胞作为造血干细胞（HSC）niche的组成部分是随着基因修饰小鼠模型的建立而实现的,成骨细胞构成了HSC自我更新和多向分化的重要微环境。Smad4基因在成骨细胞的特异性剔除可导致小鼠成骨细胞数量的下降和骨内膜面积的减少。为了阐明体内成骨细胞的减少是否影响小鼠骨髓的造血活性,本研究对成骨细胞特异性Smad4基因剔除小鼠的骨髓和髓外造血进行了系统分析,采用流式细胞技术检测骨髓和肝脏、脾脏成熟血细胞的比例;用集落培养技术、脾结节形成实验和LSK细胞分析检测不同阶段造血前体细胞的数量。结果显示,条件剔除小鼠的骨髓造血稳态维持正常,没有髓外造血的表现,特别是其不同阶段的造血前体细胞比例正常,而单位体重的细胞数量反而增加。结论：体内成骨细胞数量的减少不是导致骨髓造血活性下降的决定性因素。     

白细胞减少症33例

白细胞减少症 (ｌｅｕｋｏｐｅｎｉａ)十分常见 ,一般人群患病率为 1 1% ,高危人群为 5 3% [1] 。白细胞减少症的病因多种多样 ,发病机制各不相同 ,若不明确病因诊断 ,治疗就有盲目之嫌。笔者对 1993年以来住院的白细胞减少症 33例 (不包括全血细胞减少症病例 )的病历资料进行了分析 ,以期为诊断和治疗本症提供参考。1　临床资料1 1　一般情况　非高危职业 (油漆、化工、放射、制药等职业 )人员 33例 ,经 2次以上外周血白细胞计数 (间隔时间 >2 4ｈ)证实低于 4 0× 10 9/Ｌ。全血细胞减少者不入选在内。男 19例 ,女 14例 ;年龄 14～ 75岁 …     

超声引导下髋关节穿刺注药路径的临床应用价值：一项前瞻性随机对照研究

目的探讨超声引导下髋关节穿刺注药新路径（前上路径）的临床应用价值,并与经典路径（前下路径）进行比较。 方法自2020年10月至2021年5月在解放军总医院第一医学中心超声诊断科就诊、接受超声引导下髋关节穿刺注药治疗的108例患者,共118例髋关节纳入此前瞻性对照研究,将所有患者随机分为前上路径（穿刺针方向为髋关节前方沿股骨头长轴方向从近心端向远心端）和前下路径（穿刺针方向为髋关节前方沿股骨头长轴方向从远心端向近心端）2组,每组各59例髋关节。记录所有超声引导下髋关节穿刺注药病例的穿刺进针深度、穿刺时间、穿刺次数、调针次数、穿刺即刻疼痛视觉模拟评分量表（VAS）等相关资料,并对2组的穿刺进针深度、穿刺时间、一次穿刺成功率及穿刺即刻VAS评分等资料进行比较分析。 结果2组的一次穿刺成功率、穿刺即刻VAS评分比较,差异均无统计学意义（P=1.000、0.793）。而穿刺进针深度前上路径组［（54.2±7.8）mm］＜前下路径组［（58.8±8.3）mm］,差异有统计学意义（P=0.002）。穿刺时间前上路径组［（47.3±26.6）s］较前下路径组［（57.5±19.8）s］更短,差异有统计学意义（P=0.019）。 结论在超声引导下髋关节穿刺术的穿刺进针深度和穿刺时间方面,新路径（前上路径）优于经典路径（前下路径）。临床应根据患者的个体差异选择合适的穿刺路径,未来髋关节穿刺注药前上路径有望成为一种新的更加安全有效的超声引导下髋关节穿刺优势路径。     

常规超声联合超声造影诊断部分囊性甲状腺结节的Logistic回归分析

目的应用Logistic回归模型评价超声及超声造影特征对甲状腺部分囊性结节（PCTN）良恶性的鉴别诊断价值。 方法选取2016年1月至2018年12月在解放军总医院第一医学中心就诊的135例PCTN患者的临床资料和超声图像进行回顾性分析，共159个结节，良性结节109个，其中结节性甲状腺肿94个，腺瘤15个；恶性结节50个，其中乳头状癌47个，髓样癌2个，未分化癌1个。以病理结果作为因变量，各超声特征作为自变量，建立二分类Logistic回归模型，并评价其预测结节良恶性能力。 结果共4个特征进入Logistic回归模型，分别是钙化、边界、实性部分的形态和增强均匀度。Logistic回归模型对甲状腺部分囊性结节良恶性预测的敏感度、特异度、准确性分别为86.0%、94.5%、80.5 %，受试者工作特征曲线下面积为0.902（95%可信区间为0.845~0.944）。 结论常规超声联合超声造影特征的Logistic回归模型有助于PCTN良恶性鉴别诊断。