可溶性HLA-I检测技术和贮存血中可溶性HLA-I的浓度变化观察

本研究建立可溶性人类白细胞抗原 I类 (sHLA I)检测方法 ,并探讨贮存血中sHLA I浓度变化的意义。采用ELISA双抗夹心法定量检测 6 0例正常广东人血清中sHLA I水平和 2 0例献血员成分血中sHLA I含量。结果表明 :采用本技术时 ,可溶性HLA I最低检测限为 2 .84ng ml,批内变异系数为 5 .80 % ,批间变异系数为 9.0 0 % ,回收率≥ 98 5 7% ,广东人sHLA I平均值为 (6 99.5 4± 36 0 .10 )ng ml。贮存 2 8天的RBC和随机供者血小板的sHLA I的浓度明显高于其它成分血 ,并且与成分血中残存的白细胞数和贮存时间有关。结论 :用ELISA法检测可溶性HLA I灵敏、特异、稳定 ,在临床输血过程中可考虑选择性输注含有不同浓度可溶性HLA I的成分血。     

胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症的处理

围产期同种免疫性血小板减少症(PAIT)类似于母婴红细胞不合引起的胎儿或婴儿溶血病。当母亲被胎儿的血小板抗原致敏后,便会产生血小板特异性抗体。如果这种抗体为IgG,便能通过胎盘进入胎儿血循环,破坏胎儿血小板。有人报告1/1000新生儿患同种免疫性血小板减少症,其中9％为PAIT。     

人RHD基因Rhesus盒的检测及其意义

为了解人RHD基因的组合情况，进一步研究RHD基因遗传结构和预测新生儿溶血病．采用PCR—SSP方法，设计4条引物，用同一PCR反应条件同时检测人RHD基因的上游、下游和杂交的Rhesus盒。结果显示：RHD^-／RHD^-纯合子个体只检出杂交Rhesus盒，无上、下游Rhesus盒，RHD^ ／RHD^-杂合子个体能同时检出上、下游和杂交Rhesus盒，RHD^ ／RHD^ 纯合子个体只检出上、下游Rhesus盒，无杂交Rhesus盒。50例RhD阳性样本中5例(10％)为RHD^ ／RHD^-型，其余(90％)均为RHD^ ／RHD^ 型。98例无血缘关系RhD阴性汉族人样本中，54例(55．1％)为RHD^-／RHD^-纯合子，36例(36．7％)为RHD^ ／RHD^-杂合子即RHD基因单体型(可用于对RHD基因单体型进一步分析)，8例(8．2％)为RHD^ ／RHD^ 纯合子。2例弱D型样本同时检出上、下游和杂交Rhesus盒．为RHD^ ／RHD^-型。16例Dd型中10例(62．5％)同时检出上、下游和杂交Rhesus盒，为RHD^ ／RHD^-型．6例(37．5％)只检出上、下游Rhesus盒，无杂交Rhesus盒，为RHD^ ／RHD^ 型。这些样本RHD基因10个外显子的检测结果验证了本方法的正确性。结论：本方法所需引物少，操作简便，结果判断直观，适合临床应用。在RhD阴性中国汉族人中存在为数不少的RHD无效基因(非缺失型和部分缺失型占44.9％)。     

sHLA-G1重链分子、β_2m的体外表达及纯化研究

目的获得sHLA-G1重链分子及轻链β2微球蛋白(β2m)基因体外表达并纯化的相关蛋白质。方法RT-PCR扩增可溶性HLA-G1重链分子及人β2m轻链的cDNA序列,构建表达载体pET28a(+)/sHLA-G1及pET28a(+)/β2m,导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导sHLA-G1及β2m蛋白表达,并以Ni-NTA亲和层析和CM-FF弱阳离子柱分别纯化,透析后浓缩保存。SDS-PAGE,Western-Blot鉴定目的蛋白的表达和纯化。结果成功克隆了sHLA-G1及2βm基因并构建了pET28a(+)-sHLA-G1、pET28a(+)-β2m原核高效表达载体;表达产物以可溶性形式存在,表达量>30%,纯化后产物纯度达到95%。结论成功表达并纯化出的sHLA-G1重链分子及轻链β2m有助于阐明可溶性HLA-G1的功能。     

RHD等位基因37bp和RHC等位基因109bp插入序列检测

目的研究RHD等位基因37bp插入序列和RHC等位基因109bp插入序列是否存在多态性。方法应用PCR—SSP技术检测82例汉族RhD阳性样本,206例汉族和70例维族RhD阴性样本RHD等位基因37bp插入序列和RHC等位基因109bp插入序列。结果上述样本均检测不到RHD基因37bp插入序列,即无RHD山假基因。82例汉族RhD阳性样本中有76例样本有RhC抗原,其中3例（3．95％）检测不到109bp插入片段;206例RhD阴性汉族样本中有75例样本有RhC抗原,其中4例（5．33％）检测不到109bp插入片段;70例RhD阴性维族样本中,无RhCC表型,3例RhCc样本均检测到109bp插入片段;其余204例Rhcc表型样本均未检测到109bp插入序列。结论中国人RHC等位基因109bp插入序列存在多态性,尚不能肯定中国人是否不存在RHDψ假基因。     

RHD等位基因37bp和RHC等位基因109bp插入序列检测

目的研究RHD等位基因37bp插入序列和RHC等位基因109bp插入序列是否存在多态性。方法应用PCR—SSP技术检测82例汉族RhD阳性样本,206例汉族和70例维族RhD阴性样本RHD等位基因37bp插入序列和RHC等位基因109bp插入序列。结果上述样本均检测不到RHD基因37bp插入序列,即无RHDψ假基因。82例汉族RhD阳性样本中有76例样本有RhC抗原,其中3例（3．95％）检测不到109bp插入片段;206例RhD阴性汉族样本中有75例样本有RhC抗原,其中4例（5-33％）检测不到109bp插入片段;70例RhD阴性维族样本中,无RhCC表型,3例RhCc样本均检测到109bp插入片段;其余204例Rhcc表型样本均未检测到109bp插入序列。结论中国人RHC等位基因109bp插入序列存在多态性,尚不能肯定中国人是否不存存RHDψ假基因。     

洗涤回收式自体输血对膝关节、髋关节置换术患者血栓弹力图及免疫功能的影响

目的探讨洗涤回收式自体输血对膝关节、髋关节置换术患者血栓弹力图及免疫功能的影响。 方法选取2019年1月至12月甘肃省中医院骨科收治的膝关节、髋关节置换术中出血400~1 000 ml,回收输血量400~600 ml的患者186例为观察组,并选择同期只接受异体输血的患者162例为对照组。对两组患者输血前与输血后1 d、5 d的血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、红细胞比容(HCT)、血小板(PLT)、血栓弹力图[包括凝血反应时间(R)、最大振幅(MA)、血凝块形成时间(K)、凝固角度(α)]及细胞免疫功能(包括CD3⁺CD4⁺T细胞、CD3⁺CD8⁺T细胞、CD16⁺CD56⁺NK细胞)水平进行检测并比较。 结果输血后1 d,观察组Hb(112.57±14.32)g/L、HCT(34.10±3.32)%、RBC(3.12±0.53)×10¹²/L、PLT(125±31)×10⁹/L与对照组Hb(108.35±12.84)g/L、HCT(33.52±3.04)%、RBC(2.91±0.42)×10¹²/L、PLT(123±40)×10⁹/L比较,均差异无统计学意义(t＝0.36,1.21,1.37,1.94;均P>0.05);输血后5 d,观察组Hb(122.52±13.70)g/L、HCT(40.12±3.80)%、RBC(3.91±0.45)×10¹²/L、PLT(135±39)×10⁹/L与对照组Hb(118.31±13.91)g/L、HCT(35.50±3.70)%、RBC(3.14±0.61)×10¹²/L、PLT(127±31)×10⁹/L比较,均差异有统计学意义(t＝7.01,5.58,5.72,7.61;均P<0.05)。输血后1 d,观察组R(5.97±0.31)min、MA(56.73±2.24)mm、K(2.57±0.10)min、α(59.88±1.73)°与对照组R(6.07±0.30)min、MA(57.68±1.78)mm、K(2.70±0.52)min、α(61.12±3.09)°比较,均差异无统计学意义(t＝2.02,0.90,0.66,0.99;均P>0.05)。输血后5 d,观察组R(6.62±0.59)min、MA(63.81±0.86)mm、K(2.95±0.19)min、α(61.12±2.36)°与对照组R(6.82±1.21)min、MA(62.99±1.88)mm、K(2.82±0.18)min、α(60.50±2.07)°比较,均差异无统计学意义(t＝1.70,1.04,1.33,0.56;均P>0.05)。流式细胞分析表明,输血后1 d,观察组患者CD3⁺CD4⁺T细胞的水平(33.66±2.10)高于对照组(29.88±1.97),差异有统计学意义(t＝3.72,P<0.01);输血后5 d,观察组CD3⁺CD4⁺T细胞(35.92±0.79)、CD3⁺CD8⁺T细胞(21.82±1.61)、CD16⁺CD56⁺NK细胞(1.68±0.14)水平均高于对照组(29.83±2.11、20.53±2.71、1.03±0.13),均差异有统计学意义(t＝7.66,6.57,9.58;均P<0.01)。 结论与异体输血比较,洗涤回收式自体输血不影响膝关节置换、髋关节置换患者血栓弹力图R、MA、K、α,可以提高患者的细胞免疫功能。     

加强质量管理 提高输血水平

输血医学已发展为独立的专业学科，输血科作为采供血的专业机构，必须保证供血的安全性壬口有效性。本科坚持“质量就是生命，质量就是效益”的服务宗旨，全方位的加强质量管理，保证了血液的安全使用，提高了输血水平，现将体会报告如下。     

HLA-B27基因检定技术

用聚合酶链反应和血清学方法检测ＨＬＡ－Ｂ２７，并进行比较。方法：采用ＰＣＲ技术７８例可疑为强直性脊椎炎患者样本的ＨＬＡ－Ｂ２７基因，并与血清学比较。结果：３６例具有Ｂ２７基因者中２４例同时作血清学试验，５例血清学难以判定结果，并与ＰＣＲ结果不一致。     

B型人血清中缺乏抗-A家系分析1例

<正> 1名硬脑膜下积液致昏迷患者,入住某医院治疗,术前血型鉴定困难,标本送至本院检验科鉴定:血型为B型,但血清中缺乏抗-A、存在自身冷抗体。与B型血交叉配血相合,家系调查发现,抗-A缺乏,有遗传倾向,现报告如下。