川芎嗪与尼群地平配伍对慢性阻塞性肺病患者血流动力学的影响

对15例慢性阻塞性肺病(COPD)患者应用右心漂浮导管检测技术,观察了川芎嚎与尼群地平配伍对血流动力学的影响。同时,用放射免疫法测定了治疗前后肺动脉混合静脉血浆内皮素-1(ET-1)、血栓素B_2(TXB_2)、6-酮-前列腺素F_(1a)(6-Keto-PGF_(1a))浓度。结果发现:用药即刻和15、30、60min时肺动脉平均压(mPAP)分别下降了1.4％、17.0％、20.0％、18.0％;肺循环阻力(PVR)分别下降了15.2％、36.2％、43.0％、34.6％,体循环阻力(SVR)分别下降了7.9％、19.2％、17.9％、20.8％;心输出量(CO)上升15.8％、22.6％、22.2％、33.8％,体循环血压(mSAP)及心率(HR)的变化无统计学意义。血浆ET-1水平从(78.47±20.27)ng/L降至(61.37±25.20)ng/L(P<0.05);TKB_2从(397.92±190.25)ng/L降至(179.28±88.87)ng/L(P<0.05);6-Keto-PGF_(1a)无变化;TXB_2/6-Keto-PGF_(1a)比值从8.40±2.28降至5.48±2.19(P<0.05)。结果表明:二药配伍能有效降低肺血管阻力及肺动脉压,且对肺循环有一定的选择性。其作用可能是通过降低血浆ET-1水平及调节TXB_2/6-Keto-PGF_(1a)比值来实现的。     

基质金属蛋白酶组织抑制物-2基因多态性与蛋白质活性的关系

蛋白酶／抗胰蛋白酶的失衡与许多疾病的发生、发展有关，基质金属蛋白酶（NMPs）、基质金属蛋白酶组织抑制物（TIMPs）在肺部疾病如慢性阻塞性肺疾病（COPD）、肺损伤及在肺癌转多中均起着较为重要的作用。最新研究发现，MMPs在COPD患者中存在高表达，而MMPs的抑制物在肺组织中主要是TIMP-2，当TIMP-2基因发生突变，导致TIMP-2活性降低，MMPs/TIMP-2处于不平衡状态，可导致COPD的发生。     

蛋白激酶C在支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的信号转导机制研究

目的　探讨蛋白激酶C(PKC)信号转导途径在支气管哮喘 (简称哮喘 )大鼠气道平滑肌细胞 (ASMC)增殖中的作用。方法　 (1) 4 8只Wistar大鼠分为哮喘组 (A组 )及对照组 (B组 ) ,根据激发时间 (2、4、8周 )又分别分为A1、A2 、A3 组和B1、B2 、B3 组 ,其中A、B组大鼠各 12只 ,A2 、A3 、B2 及B3 组各 6只。用流式细胞术、四甲基偶氮唑盐 (MTT)法、增殖细胞核抗原 (PCNA)染色等方法观察每组ASMC增殖 ;(2 )用PKC激活剂 12 肉蔻酰 13 乙酸佛波酯 (PMA)及抑制剂Ro 31 82 2 0分别干预A1、B1组ASMC ,观察ASMC增殖的变化 ;(3)用逆转录 聚合酶链测定 (RT PCR)和免疫细胞化学法检测A1、A2 、A3 组和B1组ASMCPKC α的表达。结果　 (1)A组ASMCS期比例、吸光度 (A)值、PCNA表达增高 ,与B组比较差异有显著性 (P <0 0 1)。 (2 )A1组ASMCS期比例、A值、PCNA阳性表达率在干预前分别为 (19± 3) %、0 4 5 9± 0 0 36、(80± 10 ) % ;10nmol/LPMA处理后分别为 (2 7± 4 ) %、0 5 99± 0 0 78、(95± 9) % ;5 0nmol/LPMA处理后为 (14± 3) %、0 346± 0 0 38、(5 3± 8) % ;Ro 31 82 2 0处理后为 (14± 3) %、0 343± 0 0 4 8、(4 9± 8) %。各干预剂处理后与处理前比较差异均有显著性 (P <0 0 1) ;5 0nmol/LPMA处     

蛋白激酶Cα-胞外调节蛋白激酶1/2与人气道平滑肌细胞中周期蛋白D1及P21cip1 表达的关系

目的 探究蛋白激酶C(PKC)α-胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2级联对支气管哮喘(简称哮喘)患者血清被动致敏的人气道平滑肌细胞(HASMC)周期蛋白D1(cyclinD1)、周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂P21 cipl的调节作用及细胞增殖的影响.方法 用含10%哮喘患者血清的DMEM培养基被动致敏HASMC后,按随机数字表法分为对照组、12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)处理组、PMA+PKCα错配寡核苷酸组、PMA+PKCα反义寡核苷酸组以及PMA+U0126组,每组4个样本.用Western blot方法检测各组细胞磷酸化PKCα(p-PKCα)、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、cyclinD1和P21 cipl的蛋白表达水平,用流式细胞术和四甲基偶氮唑盐(MT)法检测HASMC增殖.结果 PMA处理组p-PKCα水平、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白水平高于对照组,cyclinD1、P21 cipl表达明显强于对照组(相对于各对照组的A值分别为2.10±0.29、1.67±0.19、2.20±0.27、1.99±0.22和3.11±0.29,均P＜0.05),HASMC的增殖[S期细胞比例为(30.3±2.4)%,A490值为0.80±0.06]高于对照组[S期细胞比例为(13.9±2.6)%,A490值为0.41±0.04],均P＜0.05;PMA+PKCα反义寡核苷酸组中p-PKCα水平低于PMA处理组,ERK1/2和p-ERK1/2表达明显弱于PMA处理组,cyclinD1和P21 cipl 表达也明显低于PMA处理组(相对于各对照组的A值分别为1.23±0.19、1.34±0.18、1.52±0.20、1.45±0.18和1.49±0.18,均P＜0.05),HASMC的增殖显著下降[S期细胞比例为(21.2±2.8)%,A490值为0.51±0.04;q值分别为6.07,12.63;均P＜0.05];同样与PMA处理组相比,PMA+U0126组中p-PKCα水平无明显改变(A值为1.99±0.18,q=0.94,P＞0.05),但ERK1/2、P-ERK1/2的表达,cyclinD1和P21 cipl的表达明显低于PMA处理组A值分别为0.95±0.21、1.15±0.19、1.37±0.15和1.96±0.21,均P＜0.05),HASMC的增殖显著下降[S期细胞比例为(22.0±3.2)%,A 490值为0.49±0.03;q值分别为5.51、13.45,均P＜0.05].结论 ERK1/2是PKCα的下游信号分子,PKCα-ERK1/2级联参与了PMA所诱导的哮喘患者血清被动致敏的人气道平滑细胞cyclinD1、P21 cipl的表达上调及细胞增殖.     

非小细胞肺癌组织中核因子κB的活性及其与肿瘤细胞增殖的关系

目的研究非小细胞肺癌组织中核因子κB（nuclear Factor-κB，NF—κB）的活性及其与细胞增殖、自发性细胞凋亡的关系。方法2006年5至10月收集30例非小细胞肺癌组织标本及15例肺癌患者癌旁5cm肺组织标本。NF—κB活性通过凝胶电泳迁移率改变试验（EMSA）检测，用RT—PCR和Western blot方法检测CyclinD1含量，免疫组织化学染色法检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白含量，TUNEL法检测细胞凋亡。结果癌旁肺组织、鳞癌组织、腺癌组织中NF—κB活性（吸光度，A值）分别为24826±3724、28028±4204、35425±5317，三组比较差异有统计学意义（F=78．96，P〈0．01）。鳞癌组织、腺癌组织中NF—κB活性高于癌旁肺组织中NF—κB活性，腺癌组织中NF—κB活性高于鳞癌组织中NF—κB活性。健康肺组织、鳞癌组织、腺癌组织中CyclinD1 mRNA表达量分别为2．04±0．24、2．91±0．37、4．13±0．36，三组比较差异有统计学意义（F=62．43，P〈0．01）。癌旁肺组织、鳞癌组织、腺癌组织中Cyclin D1蛋白表达量分别为0．31±0．06、0．43±0．07、0．58±0．08，三组比较差异有统计学意义（F=89．24，P〈0．01）。癌旁肺组织、鳞癌组织、腺癌组织中PCNA蛋白表达量分别为0．32±0．09、0．42±0．10、0．54±0．16，三组比较差异明显。癌旁肺组织、鳞癌组织、腺癌组织中凋亡指数分别为（2．58±0．39）％、（2．27±0．34）％、（2．92±0．59）％，三组比较无明显差异。鳞癌组织中NF—κB活性与CyclinD1 mRNA、CyclinD1蛋白、PCNA蛋白均呈正相关（r值分别为0．51、0．54和0．60，P均〈0．05）；腺癌组织中NF—κB活性与CyclinD1mRNA、CyclinD1蛋白、PCNA蛋白均呈正相关（r值分别为0．60、0．64和0．68，P均〈0．05）；鳞癌、腺癌组织中NF—κB活性与细胞凋亡指数无相关关系。结论在非小细胞肺癌组织中NF—κB活性增高。非小细胞肺癌组织中NF—κB的异常活化可能与细胞增殖有关，但不影响自发性细胞凋亡。     

内皮素-1促进人肺血管平滑肌细胞黏着斑激酶的表达

目的 探讨内皮素-1（ET-1）与黏着斑激酶（FAK）在肺血管平滑肌细胞增生中的关系及其影响.方法 采用免疫印迹方法测定了不同组别中FAK的表达,并采用流式细胞仪分析了不同组别细胞周期的变化.结果 Western blot分析结果表明：对照组FAK蛋白质无表达,其余4组细胞的FAK均有表达,其中ET-1组表达最高;BQ123组、混合组与fibronection（EN）组之间比较没有明显差异;但都比ET-1组低（P〈0.01）.流式细胞仪测定结果示：与对照组比较：FN组、混合组、ET-1组、BQ123组均有明显差异（P〈0.01）,均表现为细胞中G1相的比例减少,而S相增高（P〈0.01）;与FN组比较,BQ123组、混合组无明显差异;但ET-1组有明显差异（P〈0.01）,BQ123、混合组与FN组.的G1相、S相变化基本相同（P〉0.05）.结论 ET-1促进人肺血管平滑肌细胞FAK的表达,在肺血管结构的重构方面可能有着重要的病理生理学意义.     

大鼠肺动脉平滑肌细胞膜钙激活氯通道与细胞质钙的关系及意义

目的观察大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）膜钙激活氯通道（ClCa）与细胞质钙的关系及意义。方法大鼠PASMCs获取采用急性酶分离法。荧光光度法检测细胞质内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）；全细胞膜片钳技术测定PASMCs钙激活氯电流（ICl（Ca））；等长张力测定法观察ClCa阻滞剂尼氟灭酸（NFA）和Indaryloxyacetic acid（IAA-94）对大鼠肺动脉张力的影响。结果环匹阿尼酸（CPA）和苯福林（PE）均可引起[Ca^2＋]i升高；升高的[Ca^2＋]i可以引出ICl（Ca）；NFA和IAA-94可以舒张CPA、PE引起的肺动脉环收缩。结论生理条件下大鼠PASMCs的ClCa是钙依赖性的；细胞外Ca^2＋内流及细胞质内Ca^2＋释放均可激活该通道，其参与了血管活性药诱导的肺动脉收缩。     

一种无创性检测哮喘大鼠气道高反应性的方法

目的应用呼吸曲线Penh值评估哮喘模型大鼠的气道高反应性，以探讨一种无创性检测哮喘大鼠气道高反应性的方法。方法采用卵清白蛋白腹腔内注射致敏和雾化吸入激发的方法制备大鼠哮喘模型，用整体容积描记箱（体描箱）无创性记录呼吸曲线，推算Penh值并观察乙酰甲胆碱（Mch）刺激后的变化，然后用传统有创性气管插管的方法测定气道反应性，行肺组织病理切片染色。结果哮喘模型大鼠表现出气道高反应性，Mch刺激后呼吸频率和Penh值明显增加，根据Penh值的变化计算出的Mch负对数浓度和传统方法测定的气道反应性的定量指标呈明显正相关。结论体描箱呼吸曲线能够反应哮喘大鼠气道反应性的变化，可成为一种无创性检测哮喘大鼠气道高反应性的方法。     

银杏叶制剂对哮喘大鼠T淋巴细胞体外增殖和凋亡的影响

目的探讨银杏叶制剂治疗哮喘的部分机理。方法将14只大鼠分成2组(健康对照组7只,哮喘组7只),分别采集外周血,并分离出T淋巴细胞体外分组培养(分空白组、银杏叶制剂BN-52021组、银杏叶制剂EGb761组),各组分别以不同浓度的BN-52021和EGb761干预不同时间。用MTT法分别测定各组细胞的增殖情况,用Annexin V/PI双染法流式细胞仪测定BN-52021不同浓度组的细胞凋亡情况。结果与空白组比较,EGb761在低浓度时促进T淋巴细胞增殖,而高浓度时则起抑制作用(均P＜0．05)；BN- 52021对体外培养的哮喘和健康大鼠T淋巴细胞的增殖均有抑制作用,其作用强度(在一定的范围内)随剂量的增加和时间的延长而加强(均P＜0．05)；但对哮喘大鼠的抑制作用明显强于健康大鼠(P＜0．05)；T淋巴细胞凋亡率随BN-52021浓度增加而增加(P＜0．01)。结论银杏叶制剂因其成分和干预浓度的不同而对体外培养的大鼠T淋巴细胞增殖活性的影响不同,对哮喘与健康大鼠T淋巴细胞的作用也有差异。银杏内酯B是抑制T淋巴细胞增殖的主要活性成分,其不仅可抑制T淋巴细胞的体外增殖,而且还可增加T淋巴细胞凋亡率。