以PD20—PEF和PD20—FEV1作为气道反应性判定批标的比较分析

为探讨以PD20－PEF替代PD20－FEV1作为气道反应判定指标的可行性，对64例有呼吸系统症状者和62例无症状者进行乙酰甲胆碱支气管激发试验，同步记录PEF和FEV1，计算PD20－PEF和PD20－FEV1，虽然PD20－PEF和PD20－FEV1之间有强的直线相关关系（P＜0．001），但两者之间有显著差异（P＜0．005），若以PD20－FEV1作为金标准，在有症状组中以PD20－PEDF作为气道反应性判定指标的敏感性（72．7％），特异性（73．8％），阳性符合率（59．3％），阳性符合率（83．8％），均不甚高，在无症状组中敏感性（66．7％）和阳性符合率（40．0％）仍低，而特异性（89．2％）和阳性符合率（96．2％）较高，认为PD20－PEF作为无症状群体的流行病学筛选指标以除外气道反应性正常者可能具有一定价值，但替代PD20－FEV1作为气道反应指用于临床工作则欠妥当。     

丹参注射液对哮喘大鼠气道炎症及CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的 观察丹参注射液对支气管哮喘(哮喘)大鼠气道炎症和CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 Tr)的影响,探讨丹参注射液治疗哮喘的新机制.方法 30只Wistar大鼠随机分成正常对照组、哮喘组、丹参治疗组.计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数并分类,应用苏木精一伊红染色行肺组织病理学检查,流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4 CD25 Tr的比例.结果 丹参治疗组BALF细胞总数及淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞(Eos)百分率较哮喘组均明显减少(P<0.05,P<0.01),与正常对照组比较差异无显著性意义(均P>0.05).病理组织学显示:丹参治疗组较哮喘组肺组织炎性细胞浸润明显减少.哮喘组PBMCs中CD4 CD25 Tr的比例较正常对照组明显减少(P<0.05),丹参治疗组CD4 CD25 Tr的比例较哮喘组明显增加(P<0.05).结论 丹参注射液可减轻哮喘大鼠气道炎症反应,其机制可能与促进CD4 CD25 Tr的产生有关.     

转染IkBα基因抑制NF-KB活性对A549细胞侵袭行为的影响

背景与目的:近年来的研究显示核因子-KB(nuclear factor-kB, NF-kB)的活化能够调节肿瘤细胞的侵袭和转移.本研究探讨抑制NF-kB的活性对A549细胞侵袭能力的影响及其可能的机制.方法:构建表达NF-kB抑制物a同分异构体(inhibitor of NF-kB, α isoform, IkBα)的真核表达重组质粒pcDNA3.1( )/IkBα.体外培养A549细胞,分为未转染组(不转染质粒)、转染pcDNA3.1( )组、转染pcDNA3.1( )/IkBα组,分别转染相应的质粒.应用RT-PCR、Western blot检测各组细胞IkBα的表达情况,应用凝胶电泳迁移率改变实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)检测各组细胞NF-kB的活性,应用Transwell侵袭小室检测各组细胞的侵袭能力,应用RT-PCR方法检测各组细胞MMP-2、MMP-9的mRNA水平,应用明胶酶谱法检测各组细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的活性.结果:酶切鉴定结果显示pcDNA3.1( )/IkBα质粒构建成功.RT-PCR和Western blot检测结果表明构建的pcDNA3.1( )/IkBα质粒能够在A549细胞中表达IkBα.转染pcDNA3.1( )/IkBα组A549细胞NF-kB活性、侵袭细胞数目、MMP-2活性及MMP-9活性均低于未转染组和转染pcDNA3.1( )组(P值均<0.05),而转染pcDNA3.1( )组与未转染组之间的差异均无统计学意义(P值均>0.05).结论:转染IkBα基因能够抑制A549细胞中NF-KB的活性.NF-kB的活性下降能够抑制A549细胞的侵袭能力,其机制可能与MMP-2、MMP-9表达下调有关.     

共刺激信号与支气管哮喘大鼠γδT细胞活化关系的研究

我们以前的研究表明[1,2 ] ,γδＴ细胞在支气管哮喘 (简称哮喘 )患者支气管肺泡灌洗液 (ＢＡＬＦ)中明显活化 ;γδＴ细胞可能存在Ｔｈ1/Ｔｈ2模式 ,并表现为Ｔｈ2优势应答。为进一步阐明γδＴ细胞活化的细胞和分子机制 ,我们探讨了单核 /巨噬细胞 (Ｍｏｎ/Ｍ)与γδＴ细胞间共刺激分子Ｂ7∶ＣＤ2 8/ＣＴＬＡ 4的改变。材料与方法　 2～ 3月龄雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 2 0只 ,体重(2 0 0± 5 0 )ｇ。随机分为正常组和哮喘组 ,每组各 10只。哮喘模型的建立、鉴定及标本的收集和处理按文献 [1]方法。用补体攻击结合洗淘法进行γδＴ细胞选择…     

吸烟患或未患慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中巨噬细胞移动抑制因子表达

 目的 通过检测吸烟患或未患慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者肺组织中巨噬细胞移动抑制因子（MIF）表达水平,为进一步了解COPD易患机制提供基础研究资料。方法 肺组织来源于因肺癌行肺叶切除术的41例患者,分吸烟患COPD组（16例）、吸烟未患COPD组（13例）、无吸烟对照组（12例）3组。所有受试者均于术前1周做肺功能检查［第1秒用力呼气容积（FEV₁）,用力肺活量（FVC）］,采用实时定量PCR和免疫组化检测肺组织中MIF mRNA和蛋白表达水平,并行相关分析。结果 (1）实时定量PCR检测肺组织内MIF mRNA表达水平,吸烟患COPD组（4.87±1.79）高于吸烟未患COPD组（2.16±0.72）,而吸烟未患COPD组又高于无吸烟对照组（1.09±0.48;P<0.01）。（2）免疫组化显示,肺组织内MIF蛋白表达吸光度值吸烟患COPD组（0.277±0.025）高于吸烟未患COPD组（0.199±0.034）,而吸烟未患COPD组高于无吸烟对照组（0.130±0.021;P<0.01）。（3）相关性分析：肺组织内MIF mRNA表达与FEV₁占预计值百分比、FEV₁／FVC呈负相关(r分别为-0.578、-0.607,P值均<0.01)。结论 吸烟患COPD者肺组织中MIF表达明显增加,且与气流受限程度呈正相关,提示MIF可能在吸烟致COPD发病机制中起重要作用。     

Effect of Nitric Oxide on Potassium Channels of Rat Airway Smooth Muscle Cells

Summary: The effect of nitric oxide donor sodium nitroprusside (SNP) on resting membrane potential (Em) and potassium currents of the bronchial smooth muscle cells from rats was investigated. All experiments were conducted in conventional whole-cell configuration. The changes of Em and potassium currents after addition of 0. 1 mmol/L SNP were measured under the current-clamp mode and the voltage-clamp mode respectively. Results showed that (1) SNP could decrease the Em from --33. 8±7.4 mV to -43. 7±6. 7mV (n=10, P＜0. 01); (2) SNP could increase the Ca2+-activated K+ channel peak currents under ramp protocol from 466.9±180. 1 pA to 597. 7±237. 6 pA (n= 7, P＜0. 01), and the currents under pulse protocol at +50 mV were increased from 544.2±145.4 pA to 678.1±206. 2 pA (n=6, P＜0.05); (3) SNP also could increase voltage-gated K+ channel peak currents under ramp protocol from 389. 6±84. 1 pA to 526. 7±98. 7 pA (n=7, P＜0. 01), the currents under pulse protocol at +50 mV were increased from 275.7±85.2 pA to 444.3±128.5 pA(n=6,P＜0. 01). It was concluded that SNP increases the activities of Ca2+-activated K+ channels and voltage-gated K+ channels and leads to K+ efflux and hyperpolarization of the cell membrane, resulting in a decrease of the cell excitement.     

香烟烟雾增加支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞的增殖表达

吸烟是影响支气管哮喘（简称哮喘）发生、发展的重要危险因素，它可以增加哮喘发生频率和症状的严重程度；香烟烟雾（CS）可使多种细胞蛋白激酶C（PKC）活化，但机制尚未明确。我们的实验通过CS及PKC激动剂：12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯（PMA）、抑制剂：马来酰亚胺甲磺酸盐（Ro-31-8220）干预哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs），     

Effect of Nitric Oxide on Potassium Channels of Rats A irway Smooth Muscle Cells

Nitric Oxide( NO) ,the major endothelium-derived relaxing factor( EDRF) ,can relax thesmooth muscle of airway,vascular and gastroin-testinal.NO can also suppress the airway hyperre-sponsiveness of the asthmatic patients.But the ac-curate mechanism involved in these effects have notbeen clearly understood.There are several types ofpotassium channels in the membrane of smoothmuscle cells,including large- conductance Ca2 +- ac-tivated K+( BKCa) channels,voltage- gated K+( Kv) channels and A…     

体外转染JWA核酶反转录病毒载体对人肺动脉平滑肌细胞表型及迁移的影响

目的:探讨JWA核酶基因转染对肺动脉平滑肌细胞表型及迁移的影响。方法:实验于2004-08/2005-04在华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸病研究室完成。质粒pLXSN为第三军医大学附属新桥医院呼吸研究所惠赠。人肺动脉平滑肌细胞(C-12521)及平滑肌细胞生长培养基2(C-22162)购自德国PromoCell公司。设计合成JWA核酶基因并构建于反转录病毒载体pLXSN上,转染体外培养的人肺动脉平滑肌细胞,经鉴定证实转染成功后,应用半定量反转录聚合酶链反应法测定细胞内JWAmRNA的表达,改良Boyden小室法测定细胞迁移情况,半定量反转录聚合酶链反应法及免疫细胞化学法检测α-SMactin表达量反映细胞表型变化。结果:转染JWA核酶基因的细胞(P-JWARZ)JWAmRNA表达量较空载体转染细胞(P-pLXSN)及未转染细胞(肺动脉平滑肌细胞)显著降低,细胞迁移率显著增加,α-SMactin表达量显著减少(JWAmRNA:0.5812±0.0455,0.7823±0.0292,0.8169±0.0289;细胞迁移:29.6±4.72,7.2±1.44,6.6±1.92;α-SMactinmRNA:0.4418±0.0202,0.4767±0.0209,0.2661±0.0119;α-SMactin蛋白:0.2211±0.0093,0.3251±0.0085,0.3200±0.0095,P<0.01)。结论:JWA核酶基因转染可抑制人肺动脉平滑肌细胞内JWA基因的表达,使细胞分化为合成表型,促进细胞迁移。