脉冲强迫振荡测定值在睡眠呼吸暂停综合征中的变化及其临床意义

目的：观察脉冲强迫振荡（IOS）测定值在阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）患者中的变化，并探讨其临床意义。方法：用ISO技术检测36例OSAS患者、14例慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者和12名正常人呼吸阻抗，同时进行睡眠监测。结果：OSAS患者R20明显高于COPD组和对照组，差异有非常显著性（P＜0．01），R5－R20虽低于COPD组，但仍高于对照组，差异亦有非常显著性（P＜0．01）。将OSAD患者睡眠监测指标与IOS测定指标相关性进行研究，发现呼吸暂停低通气指数（AHI）与R5和R20呈正相关，相关系数（r)分别为0．66和0．86（P＜0．01）；最低SO2与R5、R5－R20呈负相关，r分别为－0．66和－0．79（P＜0．01）；平均SO2与R5、R5－R20呈负相关，r分别为－0．81和－0．69（P＜0．01）。结论：IOS技术可作为用于检测OSAS患者上气道阻力的 方法，并且有助于其病理机制的探讨。     

香烟提取物经级联反应促进支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖

吸烟是影响支气管哮喘(简称哮喘)发生、发展的重要危险因素[1].香烟烟雾能增加卵清白蛋白(OVA)致敏豚鼠气道急性变应性炎症[2].我们既往的研究结果证实蛋白激酶C(PKC)信号通路在香烟提取物(CSE)促哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)的增殖过程中起重要作用[3].     

优喘平在慢性阻塞性肺疾病中的作用

采用单盲、随机、安慰剂对照的方法，观察优喘平对慢性阻塞性肺疾病缓解期患者的预防和治疗作用。实验分3组，分别给予优喘平200、400mg及安慰剂，每d1次口服，连续治疗6月。检测治疗前后症状、体征、肺功能、细胞因子等指标的变化。结果发现给予优喘平200、400mg组症状、体征、肺功能、细胞因子等变化较对照组有明显改善，差异有显著性意义（P＜0．05～0．01）。口服200mg／d与口服400mg／d的治疗效果相似。提示小量优喘平对慢性阻塞性肺疾病有一定治疗作用。     

支气管哮喘大鼠γδT细胞分布和凋亡的变化

探讨γδT细胞在支气管哮喘外周血和支气管肺泡灌洗液 (BALF)中的分布和凋亡状态。应用鸡卵清蛋白(OVA)致敏和刺激Wistar大鼠 (每组 10只 ) ,制作致敏大鼠哮喘模型 ,收集外周血单个核细胞 (PBMC)和BALF ,采用流式细胞术检测γδTCR+ T细胞百分率和CD2 8 γδTCR平均荧光密度比 ,并用免疫荧光法结合HE染色以及免疫组化法检测γδT细胞占淋巴细胞的百分率 ,用TENUL法检测淋巴细胞凋亡。哮喘组PBMC中γδT细胞占总T细胞或总淋巴细胞比例明显低于正常组 (P <0 0 5 ) ,CD2 8 γδTCR平均荧光密度比则无明显差别 ;BALF中γδT细胞占总T细胞或总淋巴细胞比例明显高于正常组 (P <0 0 1) ,CD2 8 γδTCR平均荧光密度比也有显著增加 (P <0 0 1) ;哮喘组PBMC和BALF中淋巴细胞凋亡指数明显低于正常对照组 (P <0 0 1)。提示γδT细胞亚群参与了哮喘的发病过程。     

血管内皮生长因子及其受体2与被动致敏的人气道平滑肌细胞增殖相关性研究

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体2（KDR）在被动致敏的人气道平滑肌细胞（ASNC）中表达变化及其对ASMC增殖的影响。方法培养人ASMC，用支气管哮喘病人血清被动致敏ASMC。用免疫组织化学技术检测ASMC增殖细胞核抗原（POJA）的表达，MTT法检测细胞代谢活性及流式细胞仪分析细胞周期；用RT-PCR及Western blot方法分别检测VEGF和KDR mRNA及蛋白质在不同组人ASMC的表达程度。结果（1）被动致敏组ASMC较对照组和干预组增殖显著增加（P〈0．05）。（2）被动致敏组ASMC的VEGF121、VEGF165和VEGF189的mRNA表达分别较对照组和干预组显著增加（P〈0．05或P〈0．01）。（3）被动致敏组ASMCVEGF及KDR蛋白质的表达较对照组和干预组显著增加（P〈0．05）。直线相关性分析显示，ASMC中PCNA表达与ASMC中VEGF121、165、189及KDRmRNA表达水平呈正相关（r分别为0．73、0．82、0．77、0．70，P〈0．05）；ASMC中PCNA表达与ASMC中VEGF及KDR蛋白质表达水平也呈正相关（r分别为0．69、0．67,P〈0．05）。结论被动致敏的ASMC中VEGF及其受体KDR表达上调。并与ASMC增殖密切相关。该结果提示VEGF及其受体2可能参与了哮喘气道重建中ASMC增殖的过程。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞的原代培养及生物学特性比较研究

目的：建立大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ) 的改良体外原代培养法，并对其生物学特性进行比较研究。方法：AECⅡ用胰蛋白酶和胶原酶消化法分离后，接种于大鼠免疫球蛋白G （IgG）包被的培养瓶黏附纯化。将获得的AECⅡ用碱性磷酸酶(AKP) 、电镜和肺表面活性物质相关蛋白A(SPA) 免疫细胞化学方法进行鉴定，并对它的SPA表达和转染特性与AECⅡ来源A549细胞进行比较研究。结果：胰蛋白酶和胶原酶消化加IgG黏附纯化后所得的AEC Ⅱ,产量为2×107-3×107，纯度为75%-84%，细胞活力93％以上，AKP 染色快捷简便。AECⅡ 同A549细胞 相比具有某些不同的特性。结论：采用IgG黏附纯化能提高AECⅡ纯度，AKP 染色简便实用。对于AECⅡ 细胞的某些特性研究发现其并不能完全用A549细胞系来代替。     

哮喘大鼠外周血T淋巴细胞TH1/TH2细胞因子和PKCα的表达及银杏叶制剂对其影响

目的探讨银杏叶制剂对在哮喘免疫学发病机制中起关键作用的T淋巴细胞部分生物学功能的影响.方法 14只SD大鼠随机分成哮喘和正常两组,每组7只.从每只大鼠外周血分离出T淋巴细胞进行分组培养,72 h后用RT-PCR检测各组IL-2、IL-4、IL-5 mRNA的表达量,Westernblot检测各组细胞膜与细胞浆蛋白激酶Cα(protein kinase C α,PKCα)的表达比率.结果 IL-2、IL-4、IL-5mRNA表达量在哮喘组分别为0.58±0.086、1.03±0.12、0.48±0.08,正常组分别为0.45±0.03、0.35±0.08、0.15±0.05,各因子两组间比较差异有统计学意义(P＜0.01);哮喘组T淋巴细胞给予BN-52021干预后IL-2、IL-4、IL-5 mRNA的表达量明显下降(分别为0.49±0.05、0.55±0.09、0.27±0.05,P＜0.05);正常组IL-2/IL-4 mRNA的比值为1.27±0.20,哮喘组为0.60±0.18,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01),其中哮喘组给予BN-52021干预后比值有所增大0.92±0.15,与未干预组比较有明显变化(P＜0.01).哮喘PMA+BN-52021干预组IL-2、IL-4、IL-5 mRNA表达量分别为1.52±0.25、1.99±0.36、0.68±0.21,明显低于哮喘PMA干预组(P＜0.05),而PMA+Ro31-8220组与PMA+Ro31-8220+BN-52021干预组比较差异无统计学意义(P＞0.05).哮喘空白组PKCα在T淋巴细胞胞膜与胞浆的表达量比率为0.629±0.093,显著高于正常对照组(0.056±0.012,P＜0.01),BN-52021干预后哮喘组比率较未干预组明显下降0.395±0.098(P＜0.05),PMA+BN-52021干预组PKCα比率为0.719±0.163,较PMA干预组(1.28±0.28)低(P＜0.05);哮喘各组T淋巴细胞胞膜与胞浆PKCα表达量的比率与IL-4 mRNA表达量的相关性分析(n=42,r=0.845,P＜0.01)显示呈明显正相关.结论银杏叶制剂对体外培养的哮喘大鼠T淋巴细胞因子IL-2、IL-4、IL-5的分泌均具有抑制作用,而对IL-2分泌的抑制作用相对较弱;银杏叶制剂对哮喘大鼠T淋巴细胞胞膜与胞浆PKCα的表达量比率具有明显的下调作用.     

ERK在慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的：观察细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)在慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞的表达，以探讨ERK信号通路在气道平滑肌增殖中的作用。方法：病理图像分析慢性哮喘大鼠气道重塑，免疫组化法检测ERK和PCNA在肺内表达，激光共聚焦显微镜分析ERK1/2、磷酸化ERK1/2和PCNA在气道平滑肌的共表达，免疫印迹和原位杂交检测气道平滑肌中ERK和PCNA蛋白以及mRNA的表达。结果：慢性哮喘大鼠有气道平滑肌层增厚，出现结构重塑。ERK和PCNA在肺内表达增强，同时在气道平滑肌上有ERK和PCNA蛋白与mRNA表达增加。结论：ERK可能是介导慢性哮喘气道重建中平滑肌增殖的重要信号通路之一。     

周期蛋白D1在蛋白激酶C调控哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的：观察蛋白激酶C(PKC)激活后哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)周期蛋白D1(cyclin D1)的表达变化及两者表达相关性，探讨cyclin D1在PKC调控哮喘大鼠ASMCs增殖中所起的作用。方法:卵清蛋白（OVA）吸入制备SD大鼠2周哮喘模型，原代培养ASMCs。采用正常大鼠（N组）和模型大鼠（A组）第3-6代细胞，分别应用PKC特异性激活剂12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯（PMA）及抑制剂Ro-31-8220干预ASMCs, 根据不同处理分为4组：（1）空白组；（2）10 nmol/L PMA组；(3)10 nmol/L PMA+5 μmol/L Ro-31-8220组； (4)5 μmol/L Ro-31-8220组。采用流式细胞术，四甲基偶氮唑盐（MTT）法，增殖细胞核抗原（PCNA）染色等方法观察药物对ASMCs增殖的影响。RT-PCR方法检测PKC-α和cyclin D1 mRNA表达水平，Western blotting方法检测PKC-α和cyclin D1蛋白表达水平。线性相关分析评价PKC-α和cyclin D1表达水平的关系。结果:（1）在哮喘组，与空白对照比较，PMA组、Ro-31-8220组S+G2/M期比例、吸光度A值、PCNA阳性表达率，差异显著（P<0.01）。在正常组，与空白对照相比，PMA组、Ro-31-8220组S+G2/M期比例、吸光度A值、PCNA阳性表达率差异均显著（P<0.01）。（2）哮喘组内PMA组、Ro-31-8220组PKC-α以及cyclin D1 mRNA 和蛋白表达水平与空白对照比较，差异显著（P<0.01）。正常组和哮喘组变化趋势一致。(3)在mRNA水平，大鼠ASMCs PKC-α和cyclin D1的表达呈明显正相关(r=0.476，P<0.05)，在蛋白水平两者的表达亦呈明显正相关(r=0.899, P<0.01)。结论:PKC-α能促进正常大鼠和哮喘大鼠ASMCs增殖，其在基因和蛋白的表达水平与cyclin D1的表达呈正相关，提示PKC-α可能通过调节cyclin D1而影响ASMCs的增殖。     

核因子κB在蛋白激酶C诱导哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的： 探讨核因子κB（NF-κB）在蛋白激酶C（PKC）致哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖中的作用。方法： 16只Wistar大鼠随机分为哮喘组（8只）和对照组（8只）。应用PKC激动剂PMA和NF-κB抑制剂PDTC干预哮喘组和对照组大鼠ASMCs。采用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原（PCNA）免疫荧光技术等方法检测ASMCs增殖；免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NF-κB活性。 结果： PMA干预哮喘组ASMCs 后S期细胞比例、A值、PCNA表达率、NF-κBp65阳性率及结合带的灰度值均显著高于未干预的哮喘组ASMCs (均P<0.05)，PDTC预处理后再给予PMA上述指标均低于仅用PMA干预及未干预者(均P<0.05)。仅用PDTC处理的哮喘组ASMCs上述指标均低于未干预的ASMCs (均P<0.05)。结论： NF-κB参与哮喘大鼠ASMCs增殖，在其增殖中存在着PKC－NF-κB信号途径。