蛋白激酶C-核因子κB信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞增殖和血管内皮生长因子表达的影响

目的　探讨蛋白激酶C(PKC) 核因子κB(NF κB)信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞 (HPASMCs)增殖和血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。方法　体外培养HPASMCs ,用工具药PKC激活剂 12 肉豆蔻酰 13 乙酸佛波酯 (PMA)和NF κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷 (PDTC) ,将HPASMCs分为对照组、PMA组和PMA PDTC组在常氧和缺氧条件下培养。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测VEGFmRNA表达 ,Westernblot法检测VEGF和NF κB的抑制蛋白IκBα蛋白表达 ,免疫细胞化学法检测NF κBp6 5的表达和定位 ,流式细胞术检测细胞周期时相分布。结果　( 1)NF κBp6 5胞核染色阳性率、IκBα蛋白相对表达量及细胞周期G2 /M % :常氧或缺氧PMA组与相应对照组、PMA PDTC组比较差异均有显著性 (P均 <0 0 5 ) ;缺氧PMA组与常氧PMA组比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。 ( 2 )VEGFmRNA和蛋白表达 :常氧对照组、PMA组、PMA PDTC组组间差异均无显著性 (P均 >0 0 5 ) ;缺氧PMA组均高于缺氧对照组、缺氧PMA PDTC组、常氧PMA组 ,差异均有显著性 (P均 <0 0 5 )。 ( 3)缺氧PMA组NF κB胞核染色阳性率、VEGF蛋白相对表达量、G2 /M %之间均呈正相关 (r =0 5 87～ 0 710 ,P均 <0 0 5 )。结论　常氧培养HPASMCs存在PKC NF κB信号转导通道 ;     

支气管哮喘患者血浆热应激蛋白60、70抗体表达及与发病的关系

当机体接触高温或其他应激因素如感染、缺氧、生理紧张等时可大量合成热应激蛋白（Hsps），而其中的一些应激因素常见于支气管哮喘（简称哮喘）的发生中。哮喘的发生与外界环境刺激和遗传因素有关，外界环境的刺激可诱导支气管上皮细胞Hsps（主要是Hsp60和Hsp70）的表达，而当机体由于病毒或支原体等感染导致免疫异常时，机体可产生针对Hsps的抗体。但Hsps抗体在哮喘患中是否存在，以及它们与哮喘发病的关系，目前国内、外尚少见报道。我们的研究拟探讨Hsp60、70抗体在哮喘发病中的作用。     

白细胞介素-13在慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中的表达

IL-13是一种具有多种生物学活性的Th2型细胞因子，在调节炎症和免疫反应中发挥重要作用。目前研究发现，IL-13转基因大鼠肺组织可出现慢性阻塞性肺疾病（COPD）样病理改变”由此说明，IL-13可能参与了COPD的发生、发展。本研究旨在探讨COPD患者肺组织中IL-13表达及其与COPD的关系。     

Effect of Nuclear Factor-κB on Airway Remodeling in Asthmatic Rats

Airwayremodeling ,anotherimportantfeatureofasthmaapartfromchronicinflammationintheairwaywall,isasignificantpathologicalbasisofirreversibleairwayobstructionandpersistentairwayhyperrespon siveness.Thestudyonthemechanismofairwayre modelingisofgreatsignifican…     

全反式维甲酸对人肺动脉平滑肌细胞表型和迁移的影响及可能机制

目的探讨全反式维甲酸(atRA)对培养的人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)表型和迁移的影响及可能机制。方法培养的人PASMC株随机分成8组:对照组(A组)、溶媒组(B组)、10%胎牛血清干预组(C组)、atRA干预组分别加入浓度为0.001μmol/L(D组)、0.01μmol/L(E组)、0.1μmol/L(F组)、1μmol/L(G组)、10μmol/L(H)组的atRA,干预24 h后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞JWA基因mRNA表达,用改良Boyden小室法检测各组迁移细胞数,用RT-PCR法及免疫细胞化学法检测各组细胞内平滑肌细胞α肌动蛋白(SM-α-actin)mRNA及蛋白表达。结果人PASMC内JWA mRNA表达量A、B、C组分别为0.125±0.014、0.164±0.018、0.164±0.006,3组间比较差异无统计学意义(P均>0.05);而D组(0.326±0.018)、E组(0.440±0.033)、F组(0.460±0.040)、G组(0.589±0.024)、H组(0.821±0.050)分别与A、B、C组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);迁移细胞数C组为(30.4±7.4)个/高倍视野(HP),与A组[(7.2±1.9)个/HP]、B组(6.8±2.3)个/HP]比较差异有统计学意义(P均<0.01);而D组[(21.8±2.9)个/HP]、E组[(17.2±2.3)个/HP]、F组[(14.4±3.5)个/HP]、G组[(12.6±3.4)个/HP]、H组[(8.8±2.4)个/HP]与C组比较差异有统计学意义(P均<0.01);但G、H组与A、B组比较差异无统计学意义(P均>0.05);细胞内SM-α-actin蛋白表达量C组为0.219±0.018,与A组(0.319±0.011)、B组(0.325±0.005)比较差异均有统计学意义(P均<0.01);E组(0.328±0.016)、F组(0.386±0.025)、G组(0.442±0.017)、H组(0.501±0.018)与C组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);而F、G、H组与A、B组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);细胞内SM--αactin mRNA表达量C组为0.144±0.009,与A组(0.299±0.023)、B组(0.296±0.041)比较差异有统计学意义(P均<0.01);而D组(0.487±0.014)、E组(0.501±0.020)、F组(0.611±0.018)、G组(0.774±0.013)、H组(0.851±0.026)与A、B、C组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论atRA能诱导人PASMCs内JWA基因表达增加,使细胞表现为收缩表型,细胞迁移受到抑制。     

选择性扩增外周血和支气管肺泡灌洗液中γδT细胞的研究

目的 :探讨选择性扩增外周血和支气管肺泡灌洗液 (BALF)中γδT细胞的方法 ,以获得高纯度的γδT细胞亚群。方法 :应用梯度离心法分离大鼠 (n =10 )外周血和BALF中的单个核细胞 ,经贴壁除去单核 /巨噬细胞后 ,用补体攻击αβT细胞 ,再用抗TCRγδ单克隆抗体 (mAb)通过固相法加IL 2刺激选择性培养扩增γδT细胞 (简称“攻击洗淘法”) ;通过细胞生长曲线观察细胞增殖变化 ,采用免疫组化法和流式细胞仪检测鉴定γδT细胞纯度。结果 :PBMC和BALF中的γδT细胞在抗TCRγδmAb和IL 2存在下 ,无须再用抗原刺激 ,能维持较长时间增殖 ;经“攻击洗淘法”纯化后扩增的γδT细胞纯度达到 81%～99%。结论 :“攻击洗淘法”能高度纯化扩增外周血和BALF中的γδT细胞     

磷酸二酯酶抑制剂对慢性阻塞性肺疾病患者PBMC中IL-8mRNA表达的影响

目的:探讨磷酸二酯酶(PDE)抑制剂对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)IL-8mRNA表达的影响及机制。方法:采集20例急性发作期COPD患者(A组)和15例正常人(B组)的PBMC。A组的每份PBMC分4组培养:A1组为空白对照,A2组和A3组分别加入100μmol/L及1mmol/L的非选择性PDE抑制剂茶碱,A4组加入选择性PDEⅣ抑制剂Rolipram。应用RT-PCR检测IL-8mRNA的表达,以免疫组化法检测NF-κB阳性细胞的百分率,用Westernblot检测I-κB蛋白的含量。结果:(1)A1组PB-MC中IL-8mRNA的表达及NF-κB阳性细胞的百分率,均显著高于B组;IκB的水平显著低于B组(P<0.01)。(2)与A1组比较,A2组和A3组的PB-MC中IL-8mRNA的表达无显著差异(P>0.05);A4组IL-8mRNA的表达明显下降(P<0.01)。(3)与A1组比较,A2组NFκB阳性细胞的百分率及IκB的水平无显著差异(P>0.05);而A3组的PBMC中NFκB阳性细胞的百分率下降(P<0.05),IκB蛋白的水平无显著变化(P>0.05)。A4组PB-MC中,NF-κB阳性细胞的百分率较A1组明显下降,I-κB蛋白的水平明显增加(P<0.01)。结论:COPD患者PBMC中IL-8mRNA的表达较正常增高,提示IL-8参与了COPD的发病过程;选择性PDEⅣ抑制剂Roli-pram可抑制IL-8基因的表达,其作用机制可能与NF-κB阳性细胞百分率的下降有关。非选择性PDE抑     

COPD患者PBMC中IL-8 mRNA表达及内源性NO的作用和机制

【目的】探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)白细胞介素8(IL8)mRNA表达的变化以及内源性一氧化氮(NO)对其影响及机制。【方法】采集20例COPD急性发作期患者(A组)和15例正常对照者(B组)的静脉血分离PBMC,并各分组培养:A1组和B1组为空白对照,A2组和B2组加入左旋精氨酸(LArg),A3组和B3组加入N6(1亚氨乙基)赖氨酸(LNIL),A4组和B4组加入LArg+核因子κB(NFκB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC),应用原位杂交法检测IL8mRNA,用免疫组织化学方法检测NFκB的表达。【结果】①A1组的PBMC中IL8mRNA阳性细胞率及NFκB活化细胞百分率分别为22.58±2.86%和15.87±2.55%,均显著高于B1组(P<0.01)。②A2组的PBMC中IL8mRNA阳性细胞率升高,与A1组比较差异有显著性(P<0.05);A3组的PBMC中IL8mRNA阳性细胞率及NFκB活化细胞百分率下降,与A1组比较差异也有显著性(P<0.01)。A4组的PBMC中IL8mRNA阳性细胞率及NFκB活化细胞百分率下降,与A1组比较差异有显著性(P<0.01)。③COPD患者PBMCIL8mRNA表达阳性率、NFκB活化细胞百分率与FEV1/FVC%呈显著负相关(P<0.01)。COPD患者PBMCIL8mRNA表达阳性率与NFκB活化细胞百分率呈显著正相关(P<0.01)。【结论】COPD患者PBMC中IL8mRNA表达较正常增高,提示IL8可能参与了COPD的发病过程;内源性NO可调控IL8mRNA的表达,可能是通过NFκB来传导。     

核因子KB在被动致敏的人气道平滑肌细胞增殖中的信号转导作用

目的　探讨核因子κB(NF κB)是否参与被动致敏的人气道平滑肌细胞 (HASMC)增殖及是否是蛋白激酶C(PKC)激活后的下游途径。方法　用 10 %哮喘患者血清被动致敏HASMC ,以10 %非哮喘者血清为对照 ,并用吡咯烷二硫氨基甲酸 (PDTC)及 12 肉豆蔻酰 13 乙酸佛波酯 (PMA)干预HASMC ,用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原 (PCNA)免疫荧光技术检测HASMC增殖 ;NF κBp6 5 免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析 (EMSA)检测NF κB活性。结果　 (1)哮喘血清处理的HASMC ,S期细胞比例、吸光度值 (A值 )、PCNA表达阳性率、NF κBp6 5阳性率及EMSA灰度值均较对照血清组增加 (均P <0 0 5 ) ,PDTC预处理后上述指标均下降 (均P <0 0 5 )。 (2 )PMA 哮喘血清处理HASMC后 ,S期细胞比例、A值、PCNA表达阳性率、NF κBp6 5阳性率及EMSA灰度值分别为 (2 5 5 2± 3 38) %、0 5 72± 0 0 5 4、(81 2± 10 2 ) %、(2 6 5± 5 0 ) %和 716 5 4± 12 2 93,PDTC预处理后上述指标均下降 (均P <0 0 5 )。结论　NF κB参与了哮喘血清被动致敏的HASMC增殖 ,在其增殖中存在着PKC/NF κB信号途径。     

慢性支气管哮喘模型大鼠气道中细胞外信号调节激酶1/2表达及活性变化的研究

细胞外信号调节激酶（ERK）属于有丝分裂原激活蛋白激酶（MAPK）家族，它是细胞内重要的信号传递分子，并有多种亚型，在平滑肌中主要有ERK1、ERK2（ERK1/2）两种，该通道在支气管哮喘（简称哮喘）病理生理发生和发展过程中的作用得到越来越多的关注。