双波长高效液相色谱法测定人血清中维生素A、E的含量

目的:建立双波长高效液相色谱同时测定人血清中维生素A、E(VitA、VitE)浓度的方法。方法:移取血清,加入乙腈乙醇混合溶液及正己烷,旋涡混合、离心,分离正己烷层氮气吹干,残渣用流动相溶解后进样。流动相为甲醇-水(92∶8);流速1mL·min-1;柱温30℃,紫外检测器在325nm和292nm检测VitA和VitE。结果:VitA保留时间为2.63min,浓度线性范围50~800μg·L-1,r2=0.9995,平均回收率为97.3%(RSD<5%),最低检出量0.4ng(S/N>3);VitE保留时间为7.61min,浓度线性范围2~16mg·L-1,r2=0.9999,平均回收率为96.2%(RSD<6%),最低检出量2ng(S/N>3)。40例健康成人血清VitA平均值为(389.0±138.0)μg·L-1,VitE平均值为(10.2±2.5)mg·L-1。结论:双波长HPLC检测血清中VitA和VitE浓度的方法灵敏度高,回收率和重现性良好,操作快速、简便。     

肠泰合剂联合山莨菪碱治疗抗生素相关性腹泻的临床研究

目的：观察肠泰合剂联合山莨菪碱治疗抗生素相关性腹泻（AAD）的疗效。方法AAD患者73例随机分为Ⅰ组和Ⅱ组,Ⅰ组38例,Ⅱ组35例。两组均停用抗菌药物,给予补液、支持等常规治疗。Ⅰ组在常规治疗基础上给予肠泰合剂口服及山莨菪碱口服,疗程7~10 d；Ⅱ组给予肠泰合剂口服,观察并比较两组患者的疗效。结果Ⅰ组临床症状、大便凃片恢复正常时间明显短于Ⅱ组,差异有统计学意义（P〈0.05）；治疗有效率明显高于Ⅱ组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论肠泰合剂联合山莨菪碱治疗AAD有协同作用。     

快速鉴定卡氏肺孢子虫

本方法是一种检测卡氏肺孢子虫快速简便的方法,有利于卡氏肺孢子虫肺炎的诊断和治疗。采用过碘酸钠、GMS工作液染色,将经典的六亚甲基四胺银染色步骤简化为二步,染色时间缩短到几分钟,染色效果良好,卡氏肺孢子虫囊壁上的特征性括弧样结构很易察见。     

高能低糖肠内营养液改善机械通气COPD患者的临床疗效

目的观察高脂肪(50%)、低碳水化合物(32%)肠内营养液对机械通气慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的临床疗效。方法我院32例机械通气COPD患者,平均年龄(70.4±17.4)岁,体重为(45.4±6.6)kg,均明显低于正常值(P<0.01);并伴有明显的营养不良。随机分为高能低糖肠内营养组(n=18)和传统肠内营养组(n=14)。两组均采用鼻饲肠内营养支持,每天供给热能125kJ(30kcal)/kg,蛋白质0.8~1.0g/kg,热氮比值为627.6kJ比1g。分别于营养治疗前一天及治疗后第10天测定血常规、电解质、呼吸商(RQ)、每分钟通气量(VE)、二氧化碳生成量(VCO2)、氧耗量(VO2)、二氧化碳分压(PaCO2)、氧分压(PaO2)、pH值以及血清总蛋白、白蛋白、血红蛋白、淋巴细胞比例等指标。结果治疗前两组患者的各项指标测定值相近,治疗10天后高能低糖组患者的VE、VCO2、VO2、RQ均较传统营养组显著降低(P<0.05)。传统营养治疗前后VE、VCO2、VO2、RQ无明显变化。两组患者的血气分析均有不同改善,高能低糖肠内营养组的PaCO2较传统肠内营养组降低,PaO2增高,但两组的差异无显著性。两组血液生化和血常规结果均无显著差异。结论高能低糖营养制剂能降低VCO2和RQ,减少VE和VO2,对于失偿期COPD患者有明显的临床治疗效果。     

原代大鼠肝细胞分离方法与冻存条件的优化

目的 :优化原代大鼠肝细胞 (PRH)分离方法与冻存条件。方法 :建立低浓度胶原酶原位循环灌流法分离肝细胞 ;分别采用含 2 %与l0 %DMSO的冻存液于 - 70℃或液氮中冻存PRH ,并比较各组冻存后PRH活力。结果 :1.该分离方法肝细胞产量为 1.5 84± 0 .5 2 5× 10 8/10 0g大鼠体重 ,存活率达 95 .2± 2 .9% ,肝细胞纯度 >95 % ,胶原酶用量减少为 4 .5mg/10 0 g大鼠体重。 2 .含 2 %DMSO冻存液于 - 70℃组与液氮组PRH存活率均可达 90 %～ 95 % ;ALB冻存 14d - 70℃组PRH明显高于液氮组与新鲜分离组 ,LDH值于冻存 7d的 - 70℃组与液氮组明显低于新鲜分离组 ,其它各组间均无显著差异。结论 :低浓度胶原酶原位循环灌流法为高效的PRH分离技术 ;含 2 %DMSO冻存液于 - 70℃可作为原代肝细胞冻存的理想条件。     

白果内酯抗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的实验研究

目的　研究白果内酯治疗实验大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的疗效。方法　以地塞米松皮下注射大鼠 6周诱导建立肺孢子虫肺炎动物模型 ,用不同剂量白果内酯治疗实验大鼠 ,以免疫抑制为对照组 ,通过大鼠肺质量 /体质量的值 ,肺印片每视野的包囊均数为指标评价疗效。结果　白果内酯 2 0mg/kg、3 0mg/kg治疗组大鼠肺质量 /体质量的值分别为 0 0 0 97± 0 0 0 3 3、0 0 10 2± 0 0 0 2 1,明显低于免疫抑制组对照组 0 0 14 6± 0 0 0 3 4(P <0 0 5 )。白果内酯 2 0mg/kg、3 0mg/kg治疗组大鼠肺印片每视野的包囊均数分别为 2 3 1± 0 88、1 95± 0 5 7明显低于免疫抑制组对照组 7 3 9± 2 3 3 (P <0 0 1)。结论　白果内酯具有一定抗卡氏肺孢子虫肺炎作用     

青蒿素衍生物抗卡氏肺孢子虫体外作用的研究

目的 研究不同浓度青蒿素衍生物双氢青蒿素、青蒿琥酯对体外培养卡氏肺泡子虫的作用。方法 接种卡氏肺孢子虫（Pc）于人肝癌细胞系（HepG-2)。4h加入试验药物和对照试剂。双氢青蒿素药物浓度分别为：100、50、10、5、0．5μmol/L;青蒿琥酯药物浓度分别为：100、50、10、5μmol/L;对照药喷他脒：15μmol/L。以后每隔1d取培养液观察,分别作六亚甲基四胺银（GMS）和Diff-Quik(DQ)染色计数Pc包囊和滋养体数目。结果 Pc滋养体和包囊在体外培养细胞上的生长高峰出现于第5d,双氢青蒿素浓度为50μmol／L和100μmol／L时对Pc滋养 的抑制率分别为88．0％与90．1％,与喷他脒15μmol/L的抑制率90．0％相当;而青蒿琥酯浓度为100μmol/L时方可达到Pc滋养体抑制率83．4％。Pc包囊抑制率,双氢青蒿素和青蒿琥酯浓度为100μmol/L分别为67．5％和67．3％,与喷他脒的抑制率75．0％之间无统计学差异。结论 双氢青蒿素和青蒿琥酯在一定浓度时67．3％,对Pc的抑制作用与喷他脒相当;而双氢青蒿素的抑制作用略高于青蒿琥酯。两者对Pc滋养体的抑制率均高于对Pc包囊。     

卡氏肺孢子虫冻存复苏后增殖的实验研究

目的　研究卡氏肺孢子虫 (Pc)冻存复苏后在细胞培养的增殖情况。观察冻存Pc复苏后接种大鼠Pc感染发生率。方法　从免疫抑制大鼠肺中分离Pc,以不同浓度二甲亚砜和甘油作冻存液冻存Pc 3个月和 1年。解冻后 ,将其分别接种于HepG - 2细胞系和已免疫抑制 2周的大鼠。观察和比较冻存 3个月和 1年的Pc增殖情况及大鼠肺部Pc感染情况。 结果　以 15 %二甲亚砜冻存的Pc增殖幅度最大 ,第 4、5d可增长 7倍左右。冻存 1年与冻存 3个月的Pc增殖幅度无明显差异。接种冻存Pc后的大鼠 ,肺部Pc感染的发生率是对照组 4 .5倍。结论　 15 %二甲亚砜冻存的Pc复苏后增殖率最高。冻存 1年与冻存 3个月的Pc复苏情况显著性差异。用冻存Pc接种免疫抑制大鼠 ,可使诱发大鼠Pc感染模型时间明显缩短。     

卡氏肺孢子虫PCR方法敏感性研究

目的从3种PCR方法中选择出一种检测卡氏肺孢子虫(Pc)敏感性最高的PCR方法,供以后的实验中应用。方法Wistar大鼠30只,皮下注射地塞米松,每周二次,制备PCP动物模型,8周后全部剖杀作大鼠肺印片,六亚甲基四胺银染色。各鼠取肺组织02g,均浆后提取DNA,用三种PCR方法作PCR试验。选取六亚甲基四胺银染色和三种PCR检测均为阳性的大鼠DNA标本20份,对每份标本作对倍稀释1/2、1/4、1/8、1/16……至1/2048,同时用三种PCR方法做扩增试验直到某一稀释度时PCR试验阴性为止,选择出最为敏感的一组PCR方法,并做统计学分析。结果三种方法最低稀释度的均数DHFR-PCT为1/7879±174;TS-PCR为1/4371±207;MT-PCR为1/10975±136。结论三种检测Pc的PCR方法中以MT-PCR方法最为敏感。     

青蒿素衍生物体外抗卡氏肺孢子虫作用的扫描电镜观察

目的 观察体外培养的卡氏肺孢子虫(Pc)经双氢青蒿素、青蒿琥酯作用后不同时相虫体表面结构变化。方法 将Pc接种人含HepG-2细胞的培养皿内并分别加入双氢青蒿素50μmo1／L、青蒿琥酯100μmo1／L、喷他脒15μmo1／L、0．3％乙醇与空白对照。双氢青蒿素组于用药后1、2、4、8、12、16h作扫描电镜观察，后4组于用药后12h取样作扫描电镜观察。结果 双氢青蒿素作用2h后，Pc表面开始出现损伤，最初为表面绒毛脱落，残存绒毛肿胀呈球状，虫体体积增大。随着时间延长，虫体表面损伤明显，8h后表膜出现大小不等孔洞。青蒿琥酯组改变相同，但较轻微。结论 青蒿素衍生物可引起Pc虫体表膜损伤，通透性增加，功能障碍。