肺炎链球菌耐药基因ermB、mefA、tetM与转座子整合酶基因intTn的检测

目的 研究耐药基因ermB、mefA、tetM与转座子整合酶基因intTn在携带肺炎链球菌的北京儿童中分布特点。方法对185株呼吸道感染患儿鼻咽部分离的肺炎链球菌进行以下检测：E-test、琼脂稀释或纸片扩散法测定对大环内酯类、四环素、β-内酰胺类及头孢类等15种抗生素的药物敏感性。PCR检测大环内酯类耐药基因ermB和mef/A，四环素耐药基因tetM以及转座子Tn1545的整合酶基因intTn。结果185株肺炎链球菌的药敏结果显示，对红霉素、克林霉素、四环素和复方磺胺甲基异嗯唑的耐药率较高，分别为78．9％、76．2％、86．0％和78．7％，对阿莫西林，克拉维酸、头孢克洛、头孢曲松和头孢呋辛耐药率较低，分别为2．2％、15．5％、2．8％和14．1％。所有红霉素耐药株均检出ermB和／或mefA，其中79．5％为ermB阳性，17．8％为ermB和mefA同时阳性，2．7％为mefA阳性。tetM基因在分离株中的阳性率是87％，四环素耐药组的tetM基因携带率是96．9％，高于敏感组（26．9％）。四环素耐药株的红霉素耐药率（90．0％）亦高于敏感株组（11．5％）。87．6％的肺炎链球菌存在intTn基因，intTn基因阳性组的红霉素、四环素、氯霉素、复方磺胺甲基异嗯唑和环丙沙星的耐药率较intTn基因阴性组高。分离株最常见的基因组合是intTn＋terM＋ermB，占58．4％。结论北京地区呼吸道感染儿童鼻咽部肺炎链球菌耐大环内酯类抗生素的主要原因是ermB编码的23S rRNA甲基化酶致靶位改变。tetM基因编码蛋白质的核糖体保护作用，是肺炎链球菌四环素耐药的重要机制。接合性转座子Tn1545的存在与菌株的红霉素和四环素耐药关系密切，可能是肺炎链球菌多重耐药的重要机制之一。     

四地儿童肺炎链球菌、流感嗜血杆菌抗生素敏感性监测(2000～2001年)

目的 了解当前我国儿科呼吸道感染常见病原肺炎链球菌和流感嗜血杆菌对常用抗生素的敏感性，以便有效指导临床合理用药和预防。方法 连续两年对北京、上海、广州三家儿童医院和西安西京医院儿科（仅2001年）就诊的上呼吸道感染儿童鼻咽分泌物进行培养、分离肺炎链球菌和流感嗜血杆菌；采用纸片扩散法及E－test方法对分离株进行常用抗生素敏感性检测。结果 四地2年从呼吸道感染儿童鼻咽部分离肺炎链球菌共654株，流感嗜血杆菌669株。肺炎链球菌对青霉素不敏感（PRSP）率范围在14％－60％，2001年各地区发生率依次为上海55．0％、广州50．0％、西安45．0％、北京42．3％；与2000年相比，2001年部分地区如北京、上海青霉素中度敏感株明显增多。PRSP对β－内酰胺类、红霉素、复方磺胺甲基异恶唑耐药率明显高于青霉素敏感株（PSSP），且多重耐药率高达90％以上。北京、上海、西安地区分离株对阿莫西林／克拉维酸、头孢曲松仍具有很好的敏感性（96．6％－98．9％），而对头孢呋辛敏感性有不同程度下降，广州地区敏感率仅为59％，上海71％，而北京地区为92．3％，明显高于广州地区。2001年四地区分离株对头孢克洛总耐药率：广州地区耐药率最高（56％），上海、西安次之（15％、13％），北京最低（4．8％）。四地分离株对红霉素耐药率高达75％－96％，其中以高度耐药（≥256mg/L）为主，占80％－99％；2001年与北京地区分离株红霉素耐药率87．9％，高于上海（80％）、广州（78％）。肺炎链球菌四环素耐药情况与红霉素相近（60％－96％）；复方磺胺甲基异恶唑耐药也很突出（68％－88％）；而对氯霉素仍保持较低水平耐药（20％－30％）。各地区流感嗜血杆菌对氨苄青霉素、氯霉素耐药保持较低水平（5％－16％），多数地区对其他β－丙酰胺类抗生素有较好的敏感性（96％－100％），但2001年北京和广州对头孢克洛耐药已达12．7％和20％。对四环素、复方磺胺甲基异恶唑耐药率范围分别为11．3％－26．5％、37．5％－77．1％，各地区间耐药率略有差异。结论 四地区儿童上呼吸道感染肺炎链球菌和流感嗜血杆菌耐药形势严峻，PRSP已达中等水平，有逐年上升的趋势，并以红霉素、四环素、复方磺胺甲基异恶唑等多重耐药为主要特点。     

流感嗜血杆菌抗生素敏感性检测及方法比较

目的 :检测北京儿童医院流感嗜血杆菌的抗生素敏感性 ,比较纸片扩散与E -test两种检测方法的结果。材料和方法 :选择 2 0 0 0年 4至 6月间从北京儿童医院门诊就诊的 1月～ 5岁的上呼吸道感染儿童鼻咽部分离培养出的流感嗜血杆菌 10 5株。检测抗生素有 :氨苄青霉素、阿莫西林 /克拉维酸、头孢克洛、头孢呋辛及头孢曲松。同时使用纸片扩散法和E -test方法。结果 :有 5株 (4.8% )流感嗜血杆菌产 β -内酰胺酶 ,对氨苄青霉素耐药。头孢克洛敏感率 98.1% ;所有菌株对阿莫西林 /克拉维酸、头孢呋辛及头孢曲松敏感。两种方法检测结果一致率除头孢曲松为 91.4 %外 ,均大于 99%。结论 :北京儿童医院流感嗜血杆菌的抗生素耐药率处于相对较低的水平。在严格按照规程操作的情况下 ,纸片法与E—test方法的结果有很好的一致性。     

住院新生儿大肠杆菌分离株脉冲电场凝胶电泳分型

摘要： 目的 通过对新生儿临床分离的大肠杆菌菌株进行分型以示大肠杆菌菌株间的异质性和亲缘性,了解大肠杆菌感染的分子流行病学特征。方法 对2009年9月至2012年5月间北京儿童医院新生儿中心住院的102例患儿的110株大肠杆菌进行脉冲场凝胶电泳分型（PFGE）。结果 110株大肠杆菌临床分离株经PFGE共分65型,相似系数在47.3%～100%,条带在13～22条。优势基因型有13株,相似系数在80.4%～100%。有8对临床分离菌株分别来自于同一患儿,其中7对经PFGE分型方法证实它们属于同一型别（其中1对菌株来自于同一患儿的血液及脑脊液的标本,经PFGE分型证实属于同一基因型,相似系数为93.8%）;另1对显示不是同一型别,亲缘关系较远,故从同源性分析来看不除外不同菌株感染或污染的可能。5株菌株经PFGE证实菌株间亲缘关系较近,其中1株分离株来源的患儿曾与4株分离株来源的患儿同住一病房,考虑为院内获得性感染。结论 PFGE分型方法准确、可靠,可以协助临床明确和区分致病株与非致病株,追踪传染源,对于院内感染的防控起到重要的作用。     

住院肺炎患儿不同血清型肺炎链球菌对抗菌药物的耐药性分析

目的 了解当前从我国住院肺炎儿童分离的肺炎链球菌血清型分布和不同血清型菌株对抗菌药物的耐药状况,评估应用疫苗预防儿童肺炎链球菌感染和控制耐药菌传播的价值。方法 肺炎链球菌分离自4家儿童医院呼吸科年龄 ≤ 5岁的住院肺炎患儿,采用荚膜肿胀试验进行血清型分析,E试验法检测菌株对8种抗菌药物的敏感性。结果 279株肺炎链球菌中以19F型为最常见（占60.6%）,其次为19A（9.7%）。23F（9.3%）和6B（5.4%）,7价结合疫苗（PCV7）覆盖率为81.0%,PCV7在青霉素不敏感菌株和敏感菌株中的覆盖率分别为84.2%（202/240）和61.5%（24/39）。超过90%的19F和19A型菌株对青霉素不敏感,19F型以中介株为主（71.6%）,19A型以耐药株为主（55.6%）。结论 住院儿童肺炎病例分离的肺炎链球菌以19F。19A。23F和6B型常见;PCV7覆盖大多数肺炎链球菌和青霉素不敏感菌株,应用该疫苗可有效地预防国内儿童肺炎链球菌感染和阻止耐药菌株传播;非PCV7覆盖的19A型具有较强耐药性。     

北京上海广州深圳4家儿童医院肺炎住院患儿肺炎链球菌分离株的血清型分布

目的了解目前从中国住院治疗肺炎患儿分离到的肺炎链球菌的血清型分布，及几种蛋白多糖结合疫苗的覆盖率，评估应用蛋白多糖结合疫苗预防肺炎链球菌感染的价值。方法选择2006年2月16日至2007年2月16日在首都医科大学附属北京儿童医院、复旦大学附属儿科医院、广州市儿童医院和深圳市儿童医院呼吸科住院治疗的肺炎患儿为研究对象，采用一次性吸痰管收集全部病例的呼吸道分泌物标本分离肺炎链球菌，部分患儿进行脑脊液、血液和胸腔积液中肺炎链球菌的分离。采用荚膜肿胀实验进行血清型分析。对4家儿童医院肺炎链球菌分离率和血清型进行分析，率的比较采用χ2检验或Fisher精确概率法。结果 研究期间共纳入2 865例肺炎患儿，2 865例呼吸道吸取物标本中分离到肺炎链球菌279株，其中有2株不同血清型菌株分离自同一病例，分离阳性率为9.7％（278/2 865）。3/8例胸腔积液中分离到肺炎链球菌，其中2例同时从呼吸道分泌物分离到肺炎链球菌，取其一进行血清分型，另1株从胸腔积液中分离的肺炎链球菌复苏失败，未进行血清分型。脑脊液和血液标本中未分离到肺炎链球菌。共有279株肺炎链球菌进行了血清型分析，以19F型最常见（60.6％，169/279），其次为19A（9.7％，27/279）、23F（9.3％，26/279）和6B（5.4％，15/279），上述4种血清型占全部菌株的84.9％（237/279）。肺炎链球菌7价结合疫苗（PCV7）覆盖率为81.0％，但在北京仅为46.0％，明显低于上海（80.0%）、广州(98.4%)和深圳（94.4%）。9价、10价和11价疫苗的覆盖率与PCV7相比并没有明显增加。13价疫苗的覆盖率（92.8％）较PCV7明显升高。结论4家儿童医院肺炎住院患儿分离的肺炎链球菌以19F、19A、23F和6B型常见。PCV7覆盖率为87％     

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目的研究儿童肺炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离株的耐药性及基因分型,为临床诊疗提供参考。方法对2008年9月至2009年3月国内6家医院(中国医科大学附属盛京医院、温州医学院附属育英医院、重庆儿童医院、广东省妇幼保健院、复旦大学附属儿科医院、广州儿童医院)的47例肺炎患儿进行临床调查,采集下呼吸道的痰液标本作细菌培养,用头孢西丁纸片法鉴定MRSA,并用琼脂稀释法测定MRSA对12种抗生素的最低抑菌浓度(MIC);对MRSA进行多位点序列分型(MLST)检测,用多重PCR方法检测MRSA的葡萄球菌染色体盒mec(SCCmec)基因分型。结果从肺炎患儿中分离MRSA47株,MRSA感染肺炎多见于低龄儿童(15d至6岁),SCCmec基因分型中以Ⅲ型、Ⅳ型和Ⅴ型为主,Ⅴ型和Ⅳ型中MLST分型结果均以ST59型多见。所有MRSA的分离株都对青霉素和苯唑西林耐药,对万古霉素敏感,对其他抗菌药物的耐药率较高并且存在多重耐药。结论儿童肺炎MRSA分离株多见于学龄期之前的儿童,SCCmec基因分型以Ⅲ型、Ⅳ型和Ⅴ型常见,MLST分型以ST59为主;MRSA对多种抗菌药物具有较高的耐药性并且存在多重耐药。     

14株致儿童猩红热A族β溶血性链球菌多位点序列分型

目的 对A族β溶血性链球菌(beta-haemolytic group A streptococcus isolates,GAS)进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST).方法 应用多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)对来源于2007年北京和上海两地区分属于不同emm分型及其亚型、且对大环内酯类抗生素高水平耐药的14株致儿童猩红热GAS的 7对等位看家基因进行扩增,并将目的 基因产物测序,然后将所测得的每对等位看家基因的基因序列提交到MLST网站,获得相应的由7对等位看家基因组成的等位基因谱,最后将等位基因谱再次提交到MLST网站,确定GAS临床分离株MLST序列分型(sequence type,ST).结果 St5240、emm1.0型及其亚型GAS等位基因图谱为4-3-4-4-4-2-4,属于ST28型;emm4.0型GAS等位基因谱为5-7-8-5-15-2-1,属于ST38型;emm12.0型及其亚型GAS等位基因谱为5-2-2-6-6-2-2,属于ST36型;emm22.0型GAS等位基因谱为9-8-1-1-1-3-4,属于ST46型.结论 致2007年北京和上海两地区儿童发生猩红热的14株GAS分属于ST28、ST38、ST36及ST46四个不同的克隆系.     

儿童链球菌感染分离株emm分型及超抗原基因谱的变迁

目的通过对1993-1994年和2005-2006年359株儿童A族溶血性链球菌(GAS)分离株进行emm分型及8种超抗原基因检测,探讨不同时期儿童GAS感染分离株emm分型及超抗原基因的变化。方法采用PCR法对2个时期359株儿童GAS分离株进行emm分型及8种超抗原基因扩增。结果 emm1和emm12在不同时期均为主要流行型,其他型别不断变化。与1993-1994年比较,2005-2006年GAS菌株emm型较集中,emm1和emm12显著增多(Pa<0.01)。携带6种或6种以上超抗原基因的GAS分离株从46.53%(1993-1994年)增加到78.39%(2005-2006年),ssa,speH和speJ基因的携带率明显增加(P<0.05),而speA基因的携带率显著下降(P<0.05)。超抗原emm基因谱与emm分型之间有密切关系,相同的emm型在不同的时期携带不同的超抗原基因,emm型的分布和超抗原基因谱与GAS感染性疾病之间无显著性联系。结论儿童链球菌感染分离株emm分型及超抗原基因谱随年代变迁。此数据为制备符合我国GAS感染的疫苗提供依据。     

百日咳杆菌的分子流行病学研究

目的 明确百日咳杆菌分离株的分子分型,比较不同年代分离株的型别差异.方法 共25株百日咳菌株,其中18株为2000年至2007年北京儿童医院临床分离株,7株为20世纪70年代分离株,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)2种方法对菌株进行分型.结果 2000年以后菌株MIST分型均为ST2型,PFGE分型分为8种型;20世纪70年代菌株MLST分型均为ST1型,PFGE分为5种型.2000年后菌株与20世纪70年代菌株无相同的PFGE型和MLST型.结论 不同时期流行的百日咳杆菌具有不同的分子分型.