儿童社区获得性肺炎死亡病例中b型流感嗜血杆菌的检测

目的明确b型流感嗜血杆菌（Hib）在儿童社区获得性肺炎死亡病例中的地位；探讨直接原位聚合酶链反应（ISPCR）在小儿肺炎病原检测中的使用价值。方法用普通PCR、Southern杂交和直接ISPCR三种方法检测100例死于肺炎的儿童尸检石蜡包埋肺组织标本中的Hib，分析其致病、致死及在肺组织中的分布情况，并对这些方法对比分析。结果不同年代Hib的检出率无明显差异。直接ISPCR对Hib的检出率高于其他方法；Southern杂交阳性率为8％（8／100），其中20世纪50—60年代阳性率为7．1％（4／56），80年代至2002年阳性率为9．1％（4／44），x^2=0．084，P〉0．05；直接ISPCR阳性率为17％（17／100），20世纪5060年代阳性率为14．3％（8／56），80年代至2002年阳性率20．5％（9／44），x^2=0．665，P〉0．05；Southern杂交和直接ISPCR均为阳性的占7％。结论Hib是儿童社区获得性肺炎的主要致病细菌之一，与患儿死亡有关系。直接ISPCR用于检测小儿肺炎病原，灵敏、特异、可定位。     

新生儿血培养中凝固酶阴性葡萄球菌细胞间粘附基因A和D的检测及临床意义

目的 探讨细胞间粘附基因(ica)A和icaD在新生儿凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)败血症中的诊断意义。方法 收集北京儿童医院新生儿病房2001年11月至2003年3月间血培养为CNS的患儿为研究入选病例。通过应用聚合酶链反应(PCR)方法检测icaA及icaD的存在。结果 在80例入选患儿中，血培养均分离出CNS。根据新生儿败血症的诊断标准，临床诊断败血症27例(33.8%)，其中早产儿7例，足月小样儿2例。在菌种的分布上，表皮葡萄球菌18例(66.7%)，溶血葡萄球菌7例(25.9%)，人葡萄球菌2例(7.4%)。对90株CNS菌株应用PCR方法检测icaA及icaD，共有8株阳性，均为表皮葡萄球菌，并且icaA和icaD同时阳性。在经PCR扩增后所产生的图谱中，icaA在814bp，icaD在282bp。在ica阳性的8例病例中，临床诊断为败血症7例，一致率为87.5%，在临床排除败血症的53例患儿中，仅有1例ica阳性(1.8%)。ica的阳性预测值为259%，阴性预测值为981%。结论 ica基因PCR检测是临床诊断CNS败血症或导管相关感染的一种潜在的实验室方法。 Abstract Objective The purpose of this study was to assess whether the person making the clinical decision may benefit from the detection of icaA and icaD genes encoding putative virulent factors.Methods From Nov.2001 to Mar.2003,we detected the icaA and icaD genes in 80 neonates with a collection of clinical isolates from blood cultures by using a simple,rapid,and reliable PCR method.Results An overall total of 80 neonates with CNS strains from blood cultures were identified.There were 27 cases(33.8%)diagnosed neonatal sepsis clinically according to the standard,of which 7 were premature,2 were small for gestational age of full term infants.The distribution of species among the clinical CNS strains,18(66.7%)cases were Staphylococcus epidermidis,which was the leading cause,and then S.hemolyticus (n=7),S.hominis (n=2).There was a statistical difference in them.Of the 90 strains,eight were positive to icaA and icaD genes,with PCR products being obtained for the icaA and icaD genes in all of these strains,a 814 bp band for the icaA gene and a 282 bp band for the icaD gene.All of them were Staphylococcus epidermidis.Among 8 cases with positive ica genes,7 were diagnosed as sepsis clinically.The coincidence rate was 87.5%.Positive predictive value of the ica genes were 25.9%，and negative predictive value were 98.1%.Conclusion Ica genes may potentiate the clinical criteria used for the diagnosis of neonatal sepsis,and may discriminate between contamination and infections. Key words Coagulase negative staphylococcus;PCR;Newborn     

北京地区上呼吸道感染儿童青霉素不敏感肺炎链球菌的血清型分布研究

目的 了解青霉素不敏感肺炎链球菌（PNSP）的耐药性和血清型分布。方法 以2000～2004年门诊上呼吸道感染的0～5岁患儿鼻咽部分离的肺炎链球菌为研究菌株,采用E-test法检测青霉素最低抑菌浓度,简易棋盘式分型系统进行血清分型。结果 检出PNSP菌株129株,其中中介102株,耐药27株;2000～2004年各年耐药株占PNSP比率分别为19．0％、8．0％、17．6％、30．0％和26．1％;常见血清型共有124株（96．1％）,为19群、23群、不能分型、6群和14型;7价结合疫苗覆盖率从2000年到2004年分别为57．1％、76．0％、88．2％、75．0％和82．6％。结论 北京儿童中分离的PNSP的青霉素耐药性有所增强;7价结合疫苗覆盖率升高,有利于应用疫苗来预防PNSP的携带、感染及耐药性的进一步播散。     

儿童A族β溶血性链球菌分离株抗生素耐药模式的研究

目的了解我国儿科临床分离A族β溶血性链球菌对抗生素的耐药特点。方法选取2005—2008年5所不同地区儿童医院临床分离的A族β溶血性链球菌371株,对上述菌株进行药物敏感试验,采用PCR方法检测大环内酯类抗生素及四环素耐药基因。结果药敏试验结果显示,对大环内酯类药物耐药率高达94.0%以上,MIC50与MIC90均大于512mg/L;克林霉素、四环素和氯霉素耐药率分别为96.9%、90.6%和3.5%;对青霉素、左氧氟沙星和头孢他啶的敏感率则为100%。在371株分离菌中观察到6种耐药谱,其中以对大环内酯类抗生素、克林霉素、四环素联合耐药为主,占85.7%(316/378),其次为对大环内酯类抗生素和克林霉素耐药,占6.5%(24/371)。2007—2008年191株红霉素耐药株中,ermB阳性菌株占分离株总数的95.8%(183/191),ermTR4.2%(8/191),无mefA阳性株。tetM阳性株占91.1%(174/191),tetO阳性占0.5%(1/191)。结论我国儿科临床分离的A族β溶血性链球菌以耐大环内酯类抗生素、克林霉素和四环素为主,ermB和tetM耐药基因常同时存在。     

126株流感嗜血杆菌抗生素敏感性检测

流感嗜血杆菌 (Ｈｉ)是一种重要的病原菌 ,因此了解其耐药情况对有效控制Ｈｉ感染非常重要。 1999年我们与美国疾病控制中心 (ＣＤＣ)合作 ,对儿童鼻咽部携带Ｈｉ的情况进行了调查 ,现将这次调查中分离的 12 6株Ｈｉ菌株抗生素敏感性检测结果报告如下。一、材料和方法1 1999年 1～ 4月 ,从北京儿童医院门诊就诊的肺炎病人鼻咽部采取拭子 ,直接接种于加ＩｓｏＶｉｔｅｘ(美国ＢＢＬ)添加剂及 30 0 μｇ/ｍｌ杆菌肽的巧克力培养基中 ,35℃ ,5 %ＣＯ2 条件下培养 ,共分离出 12 6株流感嗜血杆菌。2 标准菌株 :ＡＴＣＣ 10 2 11、ＡＴＣＣ 492 4…     

我国儿科流感嗜血杆菌耐药分析

<正>流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,Hi)最初由Pfeiffer在1892年描述,40年后,Pittman确定了6种荚膜分型,a～f型[1]和无荚膜型,可作为呼吸道正常菌群也可作为呼吸道和侵袭性感染致病菌。国外报告Hib型(Hib)菌株     

上呼吸道感染儿童鼻咽部携带肺炎链球菌状况及血清型和耐药性研究

目的 了解上呼吸道感染儿童鼻咽部携带肺炎链球菌状况,以及分离株的耐药性和血清型分布。方法 2013 年3 月至2014 年2 月采集在北京儿童医院门诊就诊的上呼吸道感染儿童鼻咽拭子进行细菌培养和鉴定,采用Etest 方法检测抗生素敏感性,荚膜肿胀试验检测血清型。结果 共采集到2 941 例1 月龄至16 岁患儿的鼻咽拭子,分离出肺炎链球菌699 株,携带率为23.8%。随机选取100 株菌检测了抗生素敏感性和血清型。分离株对静脉青霉素敏感率达98.0%,口服青霉素敏感率仅为33.0%,头孢克洛耐药率为54.0%,头孢曲松和亚胺培南中介率也分别达到18.0% 和38.0%。红霉素和阿奇霉素不敏感率均为97.0%。多重耐药率为86.0%。常见血清型为6A（12.0%）、19F（12.0%）、6B（10.0%）、23F（9.0%）和14 型（8.0%）,7、10 和13 价结合疫苗覆盖率分别为41.0%、42.0% 和59.0%。结论 门诊上呼吸道感染儿童中,鼻咽部肺炎链球菌携带率约为25%,抗生素耐药分离株常见,13 价结合疫苗覆盖率接近60.0%。     

PCR在粪肠球菌特异转录调控基因检测中的应用

目的 探讨粪肠球菌特异的转录调控基因（Ef 0027）在快速准确鉴定粪肠球菌的重要价值。方法 经Phoenix 100全自动细菌鉴定系统和API鉴定系统鉴定为粪肠球菌、屎肠球菌、坚韧肠球菌、海氏肠球菌、鸟肠球菌、棉子糖肠球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌、金黄色葡萄球菌等110株革兰阳性球菌及大肠埃希菌、绿脓假单胞菌、肺炎克雷伯菌等30株革兰阴性细菌，采用PCR技术分别检测粪肠球菌特异转录调控基因（Ef0027）。结果 39株粪肠球菌特异转录调控基因（Ef0027）为阳性，而其他肠球菌属及其他细菌特异转录调控基因（Ef0027）全部为阴性。结论 聚合酶链反应检测粪肠球菌转录调控基因（Ef0027）为临床快速准确鉴定粪肠球菌提供了一种有效的手段。     

2004年肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌耐药监测

目的监测2004年呼吸道常见致病菌肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌对抗生素的耐药性。方法抗生素药敏试验采用E_test法和K_B法。结果肺炎链球菌对青霉素不敏感率为32.9%,对头孢克洛、头孢呋辛和头孢曲松分别为25.0%、26.4%和5.7%,对红霉素、阿齐霉素和克林霉素不敏感率>90%;流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌对氨苄青霉素耐药率分别为14.3%和56.6%,但前者β_内酰胺酶阳性率为14.3%,而后者为90.8%,两者对其他β_内酰胺酶类耐药率较低。结论呼吸道致病菌对抗生素的耐药性正在增加,连续监测抗生素的耐药性对经验治疗呼吸道感染非常必要。     

A群β溶血性链球菌药敏试验及大环内酯抗生素耐药基因检测

目的 研究我国儿科A群β溶血性链球菌(GAS)临床分离株抗菌药物敏感性情况.方法 收集5所儿童医院2005-2006年222株GAS感染的临床菌株,采用琼脂稀释法测定11种抗菌药物的MIC值;诱导试验分析大环内酯类抗生素耐药表型;PCR检测大环内酯类抗生素耐药基因ermB、ermTR和mefA.结果 分离株对大环内酯类抗生素和克林霉素耐药率在93.69%～98.65%,MIC90＞512 rag/L;对四环素的耐药率为94.14%;对青霉素、头孢他啶的敏感率高达100%.分离株大环内酯类抗生索耐药以耐大环内酯类、林可酰胺类和链阳性菌素B表型(cMLS)为主,占99.04%.iMLS表型仅2株,未检测到M型;ermB、ermTR和mef似阳性率分别为94.71%、2.89%和0.结论 所测儿科GAS感染流行菌株对大环内酯类抗生素和克林霉素耐药率高.主要耐药机制为ermB编码的23SrRNA甲基化酶导致靶位改变,青霉素类和头孢菌素类抗生素是治疗我国GAS感染首选药物.