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目的 对铜绿假单胞茵外毒素A(PEA)全基因进行基因克隆,构建原核表达质粒并进行表达.方法 从铜绿假单胞茵中提取基因组DNA,设计PCR引物扩增出带信号肽的PEA目的 基因,经HindⅢ和EcoR Ⅰ消化后,与PET-32a裁体进行连接重组.用限制性内切酶消化、PCR及DNA测序等方法鉴定构建成功后.IPTG诱导目的 基因表达.结果 SDS-PAGE电泳结果显示,在分子量78 KD处有一条明显的新生蛋白带.表达的融合蛋白量约占细茵总蛋白的35%.结论 PET-32a-PEA原核表达质粒的成功构建及表达.为进一步研究有效的基因工程疫苗和免疫导向治疗的基因重组毒素奠定了基础. 相似文献
92.
93.
目的实现铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)全基因的原核载体构建及融合性表达。方法用基因重组技术构建PET-32a-PEA重组体,并在大肠杆菌BL21中进行表达。结果酶切鉴定及测序结果表明PET32a载体上成功地插入了PEA全基因。用IPTG诱导目的基因表达,沸水浴变性后进行SDS-PAGE电泳,在分子量78kD处有一条明显的新生蛋白带。表达的融合蛋白量约占细菌总蛋白的35%。结论成功地对PEA全基因进行了原核载体构建及表达,获得了稳定表达的工程菌,为进一步研出有效的基因工程疫苗和用于免疫导向治疗的重组毒素奠定了基础。 相似文献