DNA修复合成的放射自显影显示法与致癌性化合物的检测

面对引入人类社会的化学物质越来越多这一现实,人们急需建立一系列有关的毒性(包括致癌性)检测系统来确定各种化学物质的生产和使用范围,以保护人类免受其害。在致癌性检查方面,虽实验动物诱癌试验仍不失为一个较为可信的方法,但由于它耗时长、费用大,很难满足大量化学物质的检测需要,因而非常必要找寻一些体外快速     

N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍诱发的vero细胞蛋白酪氨酸磷酸化改变

为了研究细胞信号转导通路在致突变物N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)致非定标性突变作用中的地位,猴肾vero细胞在MNNG处理后0,6,12 h制备全细胞抽提液,用Western印迹法观察细胞蛋白质酪氨酸磷酸化的变化.结果发现0.2 μmol·L^-1 MNNG处理2.5 h后再经0 h和12 h,45 ku蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强,经6 h时还有62 ku蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强,1 mg·L^-1蛋白合成抑制剂环己米特(CHM)处理vero细胞12 h也可引起45 ku蛋白质酪氨酸磷酸化程度增强.提示MNNG处理可能诱发应激相关信号转导通路的激活.     

药物的II相代谢与酶系及其进展

目的为了解药物II相代谢中各酶系的最新研究进展及其临床意义。方法按药物II相代谢的类型分别总结了各酶系的功能、基因超家族和底物等的最新研究进展及临床意义。结果与结论在人体内有多种类型的结合反应和大量的结合反应酶。葡醛酸结合反应是含羟基等官能团的化合物在葡醛酸转移酶（UGT）催化下生成水溶性的b-D-葡萄糖醛酸甙,分泌到尿或胆汁中。目前已至少鉴定了18种人类UGT的同工酶。N-葡醛酸结合反应及其临床意义正受到广泛重视。硫酸化反应是一种重要的结合反应,转磺酶(ST)是一个基因超家族,包括酚转磺酶、雌激素转磺酶、羟基类固醇转磺酶以及脱水表雄甾酮转磺酶等。ST酶在人类中具有功能上显著的基因多态性。N-乙酰化反应在人类由具多态性的NAT1和NAT2催化,能修饰许多蛋白质,调节许多生理功能,NAT的多态性与个体的癌症尤其相关。谷胱甘肽结合反应具有解毒作用,催化谷胱甘肽结合反应的酶为谷胱甘肽-S-转移酶,包括a,m,p,q等亚族,通过测定同工酶表达的类型和底物专属性可以研究GSTs在耐药性上的复杂作用。此外还有甲基化反应、氨基酸结合反应、脂肪酸结合反应、缩合反应等,在II相代谢中发挥着各种作用。     

化合物致突变／致癌活性自动检测的研究

本文阐述如何利用电子计算机对生物学试验所提供的信息进行构效分析,预测化合物的致突变/致癌活性。介绍采用分子结构片段为结构参数的方法所建立的(化学)结构—(生物学)活性相关分析的 SARA 系统,找出化合物生物活性与其内部结构关系规律,实现在生物学检测基础上的计算机预测,从而使 SARA 系统预溯化合物致突变/致癌活性的辅助手段。     

c－k－ras反义寡核苷酸抑制HCe8693细胞生长及p21~（ras）表达的序列特异性

本文采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），并结合ＰＣＲ产物直接测序法，证明人大肠癌细胞系ＨＲ８３４８和ＨＣｅ８６９３的ｋ－ｒａｓｃＤＮＡ片段（第３～８３密码子）中存在第１２密码子ＧＧＴ→ＧＡＴ突变，未发现其它突变或ＲＮＡ剪接异常．用分别与野生型和上述突变型ｋ－ｒａｓ第９～１５密码子互补的１８聚硫代磷酸型寡核苷酸（两者仅存在一个碱基差别）及随机设计的对照寡核苷酸（终浓度为６μｍｏｌ·Ｌ－１），发现与突变型ｋ－ｒａｓ互补的寡核苷酸能抑制ＨＣｅ８６９３细胞生长并有ｐ２１ｒａｓ蛋白表达量的抑制；而与野生型ｋ－ｒａｓ互补的寡核苷酸及随机合成的对照寡核苷酸对之无明显抑制作用，说明ｃ－ｋ－ｒａｓ反义寡核苷酸对ＨＣｅ８６９３细胞生长和ｐ２１ｒａｓ蛋白合成的抑制作用存在明显的核苷酸序列特异性．     

c-k-ras反义寡核苷酸抑制HCe8693细胞生长及p21ras表达的序列特异性

本文采用逆转录-聚合酶链式反应(RT- PCR)，并结合PCR产物直接测序法，证明人大肠癌细胞系HR8348和HCe8693的k-ras cDNA片段（第3～83密码子）中存在第12密码子GGT→GAT突变，未发现其它突变或RNA剪接异常. 用分别与野生型和上述突变型k-ras第9～15密码子互补的18聚硫代磷酸型寡核苷酸（两者仅存在一个碱基差别）及随机设计的对照寡核苷酸（终浓度为6 μmol·L^-1），发现与突变型k-ras互补的寡核苷酸能抑制HCe8693细胞生长并有p21^ras蛋白表达量的抑制；而与野生型k-ras互补的寡核苷酸及随机合成的对照寡核苷酸对之无明显抑制作用，说明c-k-ras反义寡核苷酸对HCe8693细胞生长和p21^ras蛋白合成的抑制作用存在明显的核苷酸序列特异性.     

人细胞色素P450 2B6在哺乳类细胞中的稳定表达

在诱变试验中广泛应用人羊膜FL细胞, 中国仓鼠CHL和V79细胞, 但由于它们不能表达内源性细胞色素P450(CYP)活化前致突变物, 而严重限制了它们的使用. 本工作构建了携有编码CYP2B6单胺氧化酶的cDNA重组表达体并分别导入上述三种细胞中表达, 经G418抗性筛选, 建立了FL-2B6, CHL-2B6和V79-2B6三种转基因细胞系, 用Northern印迹杂交证明它们都有CYP2B6的表达. 在CHL-2B6细胞中还测得较高水平的7-乙氧基-4-三氟甲基香豆素去乙基酶活性, 它对前致突变物甲基亚硝胺吡啶酮的致微核形成作用有很高敏感性, 并呈剂量效应关系, 但其母系细胞皆为阴性.     

化学致癌物和抗致癌物检测技术的基础和应用研究

该课题已发表论文33篇,内容有6项: 一、非程序性DNA合成试验的改进。本改进法以~(14)C-胸苷预标记的同步化培养细胞为测试细胞,从而在测量非程序性DNA合成的~3H-胸苷掺入的比放射活性时可省略繁复的DNA定量测定,而以~3H/~(14)C放射活性比代替,大大缩短了测试周期和材料消耗。二、创建一个以ADP-核糖基转移酶介导的细胞NAD含量降低为DNA损伤检测终点的试验法。研究证明该酶活性和它的唯一底物(细胞NAD)含量由于在DNA复制过程中出现的小片段DNA的刺激而呈细胞周     

肿瘤的病因学和发病学

要消灭肿瘤的发生,关键问题是查明它的原因及其发生机理,虽然在医学及生物科学领域中多年来对这个问题作了广泛的研究。但很多方面还有待解决。