几种促癌剂对NIH／3T3细胞经缝隙连结细胞间通信的影响

利用抓扒负荷法将荧光染料引入细胞内,观察细胞间荧光染料的扩散以判断经缝隙连结的细胞间通信。分析了促癌剂TPA、MZR和PB对细胞通信的影响。三者均能抑制细胞通信,在蛋白激酶C抑制剂PMC或STS存在下,TPA和MZR对细胞间通信的抑制作用被拈抗,而PB的作用不受影响。提示前两者对细胞间通信的抑制作用可能通过蛋白激酶C的中介,而PB可能通过其它途径起作用     

哺乳类细胞色素P450基因及其调控

细胞色素P450(P450)是广泛参与类固醇、脂肪酸、前列腺素、生物胺等多种内源性生物活性物质和药物、化学致癌剂/诱变剂、环境污染物等无数外源性异物代谢的一个酶体系,由P450基因超家族编码。近年对P450基因的分子生物学研究异军突起,进展颇快,不仅为进一步了解基因调控机理、分子进化及化学致癌过程奠定了基础,而且也将为许多临床疾病的诊治提供帮助。本文拟对哺乳类P450基因及其表达调控作一概述。     

工频磁场对细胞蛋白质酪氨酸磷酸化影响的研究

目的;研究５０Ｈｚ工频磁场绎细胞浆蛋白质酪氨酸磷酸化的以初步工频磁场生物效 有关细胞信息转导的机制。方法;对分别经两个不同强度的工频磁场作不同时间辐照处理后的细胞,提取其胞浆蛋白质,定量后,以Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法测定并比较细胞胞浆蛋白质酪氨酸磷酸化的程度。     

表达反义hREV3基因片段的真核细胞表达质粒的构建

目的：构建真核细胞表达重组体,为今后利用反义核酸阻断技术研究ｈＲＥＶ３基因功能４及其与细胞遗传不稳定性的关系提供物质材料。方法：用内切酶ＢａｍＨⅠ及Ｂａｍ ＨＩ＋ＨｉｎｄⅢ分别对ｐＢＳ－ｈＲＥＶ３进行单酶切和双酶切,从而得到含ｈＲＥＶ３ ｃＤＮＡ特异性保守序列的两种长度片段,分别将两者插入真核细胞载体;ｐＢＫ－ＲＳＶ和ｐＭＡＭｎｅｏ ａｍｐ＾－。     

反义阻断CROC-1基因表达导致细胞生长变慢

目的:建立CROC- 1 基因表达被阻断的FL-CROC- 1 ^-细胞系,研究CROC- 1 基因在细胞生长中的作用。方法: 运用反义技术将新近发现的人泛素缀合酶样蛋白基因CROC- 1 的适当长度cDNA片断克隆到本室改建的真核细胞表达载体pMAMneo-amp^-中,经限制性内切酶图谱分析筛选出反向插入的表达CROC- 1 反义RNA的重组质粒。将此反义表达重组质粒(pMAM-antiCROC- 1 )用改良的磷酸钙法转染人羊膜FL细胞并用含G418的培养基筛选,测定G418抗性的FL-CROC- 1 ^- 细胞系的生长速度。 结果:建立的FL-CROC- 1 ^- 细胞系在地塞米松诱导下CROC- 1 基因表达被反义抑制后,其生长速度较对照FL细胞及转染了载体pMAMneo-amp^- 的FL细胞(FL-MAMneo)的明显要慢(P＜0.05)。结论: 本研究成功地建立了CROC- 1 基因表达被阻断的FL-CROC- 1 ^- 细胞系,并提示CROC- 1 基因编码的泛素缀合酶样蛋白在细胞生长中起正调控作用。     

反义阻断hREV3基因表达抑制MNNG诱发的 非定标性突变的发生率

目的 :ＲＥＶ3基因是酵母中发现的具有跨损伤修复活性的ＤＮＡ聚合酶 ,参与真菌易误性复制后修复通路。本研究采用反义核酸技术建立ｈＲＥＶ3基因表达阻断的人胚肾细胞系 ,研究它与非定标突变形成的关系。方法 :1 ｈＲＥＶ3基因片段从ｐＢＳ -ｈＲＥＶ3反向重组入载体ｐＭＡＭｎｅｏ -ａｍｐ 构建真核反义诱导表达质粒。 2 重组质粒转染ＨＥＫ2 93细胞 ,Ｇ41 8全培养基筛选建立ｈＲＥＶ3基因表达阻断细胞系。 3 细胞系生长速率及ＭＮＮＧ敏感性检测 :以ｈＲＥＶ3基因表达反义阻断细胞系为实验组 ,转染有空载体的细胞系以及母本细胞系为对…     

N-甲基-D门冬氨酸受体复合物亚单位蛋白的组成及其在发育过程中表达的研究

本研究通过用重组DNA技术制备NMDA受体亚单位融合蛋白并免疫动物获得相应的特异性抗体,采用定量免疫印迹技术系统研究了大鼠、小鼠和人类不同脑区NMDA受体亚单位NR1、NR2A及NR2B在不同发育阶段的表达。并经免疫沉淀和定量免疫印迹分析,获得了有关天然NMDA受体亚单位组成的结果:成年大鼠皮层组织的主要受体亚型     

人细胞色素P450 1A1与谷胱甘肽S-转移酶的融合蛋白及其抗体的制备

采用融合蛋白技术原核表达CYP1A1（第241-381个氨基酸）与谷胱甘肽S-转移酶（GST）的融合蛋白作为抗原,用于制备CYP1A1多克隆抗体. 根据正反重组质粒pGEX/1A1表达的融合蛋白大小不同的原理,直接表达筛选得到正向重组质粒pGEX/1A1. 通过优化表达条件, 提高了目的蛋白的表达水平. 包涵体蛋白经制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分离, 获含纯化融合蛋白GST-1A1的PAGE凝胶. 直接用含GST-1A1的凝胶悬液免疫BALB/c小鼠,自腹水中获取CYP1A1多克隆抗体（1A1pAb）. 1A1pAb用切胶纯化的融合蛋白GST-2B6交叉吸收,蛋白A- Sepharose亲和层析柱来纯化. 用切胶纯化的融合蛋白GST-1A1及GST-2B6的免疫印迹反应初步鉴定1A1pAb的特异性. 纯化的1A1pAb对融合蛋白GST-1A1反应特异性较强,但仍对GST-2B6有弱交叉反应. 在实际应用中可根据反应强度来加以区分.     

人细胞色素P450 1A1与谷胱甘肽S-转移酶的融合蛋白及其抗体的制备

采用融合蛋白技术原核表达 CYP1 A1 (第 2 4 1- 381个氨基酸 )与谷胱甘肽 S-转移酶 (GST)的融合蛋白作为抗原 ,用于制备 CYP1 A1多克隆抗体 .根据正反重组质粒 p GEX/ 1 A1表达的融合蛋白大小不同的原理 ,直接表达筛选得到正向重组质粒p GEX/ 1 A1 .通过优化表达条件 ,提高了目的蛋白的表达水平 .包涵体蛋白经制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分离 ,获含纯化融合蛋白 GST- 1 A1的 PAGE凝胶 .直接用含 GST- 1 A1的凝胶悬液免疫 BALB/ c小鼠 ,自腹水中获取 CYP1 A1多克隆抗体 (1 A1 p Ab) . 1 A1 p Ab用切胶纯化的融合蛋白GST- 2 B6交叉吸收 ,蛋白 A- Sepharose亲和层析柱来纯化 .用切胶纯化的融合蛋白 GST- 1 A1及 GST-2 B6的免疫印迹反应初步鉴定 1 A1 p Ab的特异性 .纯化的 1 A1 p Ab对融合蛋白 GST- 1 A1反应特异性较强 ,但仍对 GST- 2 B6有弱交叉反应 .在实际应用中可根据反应强度来加以区分     

细胞DNA损伤应激反应中丝裂原活化蛋白激酶的信号通路

丝裂原活化蛋白激酶 (MAPKs)途径是细胞遗传毒性应激反应中主要的信号转导途径之一 ,它主要包括ERK ,JNK/SAPK ,p38等通路。各条通路都通过特异的MAPK信号级联放大反应使细胞形成应对DNA损伤的应激反应 ,从而保证细胞的正常生长和DNA复制的保真度。综述DNA损伤应激反应中的各条MAPK信号通路的激活机制