POLK和POLH在N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍引起的非定标突变中的作用

目的　研究DNA聚合酶kappa(POLK)和DNA聚合酶eta(POLH)的功能。方法　采用穿梭质粒pZ189介导的突变试验,对建立的阻断细胞系FL POLK- 和FL POLH- 进行非定标突变研究。结果穿梭质粒pZ189在FL POLK- 和FL POLH- 细胞中复制后,其supFtRNA基因的自发突变频率分别为11.2×10 - 4和13 .5×10 - 4,而对照细胞FL和FL M分别为4 .9×10 - 4和3 .7×10 - 4。质粒在接触过N 甲基 N′硝基 N 亚硝基胍的FL POLK- 和FL POLH- 细胞中复制,其supFtRNA基因的非定标突变频率下降。结论　POLK和POLH在维持哺乳类细胞的基因组稳定性中起重要作用,同时它们还参与了哺乳动物细胞非定标突变的形成,如同其同源基因编码的PolⅣ和PolⅤ在E .coli的非定标突变形成中的作用     

一个新的人细胞色素P450 2B6 cDNA 序列

本实验室于 1 995年克隆了人细胞色素 P450 2 B6c DNA并建立了稳定表达 CYP2 B6的转基因细胞 (吴健敏 ,等 .中国药理学与毒理学杂志 ,1 996,1 0 ( 2 ) :1 31 - 1 35) .其表达产物具有 7-乙氧基 - 4-三氟甲基香豆素去乙基酶活性 ,建立的转基因细胞有代谢活化甲基亚硝胺吡啶酮 ,黄曲霉素 B1 ,环磷酰胺 ,二乙基亚硝胺和吗啉亚硝胺的能力 .限于当时条件 ,仅用 T7引物测得 CYP2 B63′端 1 90 bp序列 (吴健敏 ,等 .癌变·畸变·突变 ,1 995,7( 1 ) :1 - 6) ,与 Yamano等报道的序列相同 ( Yamano S,etal. Biochemistry,1 989;2 8:7340 - 73…     

普萘洛尔在人肝细胞色素P450转基因细胞中的立体选择性测定

目的：建立一种手性色谱法，用于普萘洛尔经人肝细胞色素P450特基因细胞S9代谢的立体选择性研究。方法：以S—( )—普罗帕酮为内标，用柱前GITC手性衍生化反相高效液相色谱法测定普萘洛尔对映体在S9孵育液中的浓度。结果：5—(-)—普萘洛尔、内标及R—( )—普萘洛尔获基线分离。在5—500μmol/L／L范围内线性良好。定量限5μmol/L／L(22＝5，RSD＜10％)。S—(-)—和R—( )—普萘洛尔的平均回收率分别为98．7％和98．1％。日内、日间精密度均小于10％。经时孵育试验表明，普萘洛尔经CYP2Cl8有S—(-)—体优先代谢的立体选择性，而经CYP2C9有R—( )—体优先代谢的立体选择性。结论：该法简便、准确、重现性好、专属性强，可以用于普萘洛尔体外代谢的立体选择性研究。     

人细胞色素P4502B6在哺乳类细胞中的稳定表达

〗在诱变试验中广泛应用人羊膜ＦＬ细胞，中国仓鼠ＣＨＬ和Ｖ７９细胞，但由于它们不能表达内源性细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ）活化前致突变物，而严重限制了它们的使用．本工作构建了携有编码ＣＹＰ２Ｂ６单胺氧化酶的ｃＤＮＡ重组表达体并分别导入上述三种细胞中表达，经Ｇ４１８抗性筛选，建立了ＦＬ－２Ｂ６，ＣＨＬ－２Ｂ６和Ｖ７９－２Ｂ６三种转基因细胞系，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交证明它们都有ＣＹＰ２Ｂ６的表达．在ＣＨＬ－２Ｂ６细胞中还测得较高水平的７－乙氧基－４－三氟甲基香豆素去乙基酶活性，它对前致突变物甲基亚硝胺吡啶酮的致微核形成作用有很高敏感性，并呈剂量效应关系，但其母系细胞皆为阴性．     

POLK和POLH在N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基胍引起的非定标突变中的作用

目的研究DNA聚合酶kappa(POLK) 和DNA聚合酶eta(POLH)的功能.方法采用穿梭质粒pZ189介导的突变试验,对建立的阻断细胞系FL-POLK-和FL-POLH-进行非定标突变研究.结果穿梭质粒pZ189在FL-POLK-和FL-POLH-细胞中复制后,其supF tRNA基因的自发突变频率分别为11.2×10-4和13.5×10-4,而对照细胞FL和FL-M分别为4.9×10-4和3.7×10-4.质粒在接触过N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍的FL-POLK-和FL-POLH-细胞中复制, 其supF tRNA基因的非定标突变频率下降.结论 POLK和POLH在维持哺乳类细胞的基因组稳定性中起重要作用,同时它们还参与了哺乳动物细胞非定标突变的形成,如同其同源基因编码的Pol Ⅳ和Pol Ⅴ在E.coli的非定标突变形成中的作用.     

生大蒜、鞣酸、肉桂醛的抗诱变作用

以E.coli wp2 trp~-和E.coli wp2 trp~-uvrA~-为靶细胞,4-硝基喹啉氧化物(4-NQO)为诱变因子,以回变菌落(Trp~ )下降为指标,观察生大蒜、鞣酸、肉桂醛抗诱变作用.实验显示上述三种化合物均能拮抗4-NQO的诱变作用,并进一步揭示大蒜拮抗4-NQO的作用可能是在细胞内,且在DNA损伤之前.实验排除了大蒜本身对试验菌的毒性、对Trp~ 的选择性毒性与生长、繁殖的影响.     

细菌波动试验在检测化学诱变剂中的应用

本文首先用波动试验对标准阳性诱变剂和氨化、非氨化焦糖的诱变性进行验证;在此基础上对Ames平板试验显阴性的胺菊酯、三氯杀虫酯和杀虫脒等的诱变性进行测试,以评价波动试验的灵敏度和这些化学物的遗传毒性.实验证明波动试验测出叠氮钠对TA100的最低诱变剂量为0.015μg/ml,比平板试验低16倍;测出氨化及非氨化焦糖对TA98的诱变剂量分别为5μl/ml及10μ1/ml,比平板试验低5～10倍;胺菊酯在不加S9时对TA97仅在波动试验中显示诱变性;三氯杀虫酯在加S9时对TA98也仅在波动试验中显示诱变性;波动试验还测出了杀虫脒加S9时对TA97有诱变性.     

BIOACTIVATION OF POLYCYCLIC ACROMATICHYDROCARBONS IN CHL-1A1 CELL LINE ESTABLISHED BYTRANSFECTION OF RECOMBINANT HUMAN CYT P45O 1A1cDNA EXPRESSION PLASMID

本研究应用我室建立的稳定表达ＣｙｔＰ４５０１Ａ１的转基因细胞株ＣＨＬ－１Ａ１对一组前致突变物／前致癌物进行双核细胞微核试验,同时以母细胞系ＣＨＬ为对照,结果表明,在不加Ｓ９的情况下,五种前致突变物,苯并(α)芘、３－甲基胆蒽、苯并蒽、二甲基苯蒽和蒽均能诱导ＣＨＬ－１Ａ１细胞的微核率显著增高,并具有剂量反应关系,证明ＣＨＬ－１Ａ１细胞具备代谢活化多环芳烃类化合物的能力。因此,转基因细胞株ＣＨＬ－１Ａ１在化学致癌物的遗传毒理学研究方面具有重要的应用价值。