茶多酚对人羊膜上皮细胞FL形成B（a）P－DNA加成物的影响

应用３２Ｐ后标记法检测人羊膜上皮细胞（ＦＬ）经不同浓度茶多酚（２５μｇ／ｍｌ，５０μｇ／ｍｌ和１００μｇ／ｍｌ，终浓度，下同）和β－萘黄酮（２×ｌ０－５ｍｏｌ／Ｌ）所形成的Ｂ（ａ）Ｐ－ＤＮＡ加成物，观察茶多酚化学预防作用。结果表明，茶多酚不仅可以抑制β－萘黄酮对ＦＬ细胞细胞色素Ｐ４５０同功酶的活性的诱导，减少Ｂ（ａ）Ｐ－ＤＮＡ加成物的形成；也可抑制经β－萘黄酮诱导后的ＦＬ细胞形成Ｂ（ａ）Ｐ－ＤＮＡ加成物，而且该抑制效应与茶多酚剂量一致。茶多酚的化学预防作用可能与其影响细胞色素Ｐ４５０同功酶的表达调节以及抑制其活性有关。     

反义阻断REV3基因表达对细胞自发突变和MNNG诱导突变的影响

目的 :通过反义核酸技术研究REV3基因对次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因HPRT的自发突变频率及烷化剂甲基硝基亚硝基胍 (methy1-nitro -nitrosoguanidine ,MNNG)的诱发突变频率的影响。方法 :用REV3基因反义核酸表达质粒pMAM -REV3-转染人羊膜上皮细胞 (FL) ,建立了由地塞米松诱导下的REV3基因表达可被反义阻断的细胞系 (FL-REV3-) ,并应用经典的筛选HPRT基因位点的突变子的实验进行REV3基因对HPRT基因位点的自发与诱发突变影响的检测研究。结果 :在自发突变率的检测中 ,FL细胞系的自发突变率比它的诱发突变率低 3 0 1倍 (P <0 0 5 ) ,而在FL -REV3-细胞系中始终未能筛选到自发突变子 ;用 0 .4 μmol/LMNNG分别处理FL -REV3-和FL细胞系 ,前者诱发突变率比后者低 6 0 2倍 (P <0 0 5 )。结论 :REV3基因不仅参与细胞自发突变 ,而且参与细胞的诱发突变 ,与DNA的跨损伤修复有关     

有机磷杀菌、杀螨剂双-[0、0-二乙硫代磷酰]—二硫物诱发人培养细胞系的程序外DNA合成

真核细胞在细胞周期S期以外的DNA合成称为程序外DNA合成(UDS)。DNA损伤后的修复过程中发生的修复合成即属之。根据化学物质能否诱发UDS以推断它是否具有引起DNA损伤的能力来预测该物质的诱变性/致癌性,是一个很有价值的体外短期试验法。在国外,用于此目的的UDS检测法有两种:(1)放射自显影显示法。比较半保留复制被阻断的细胞中银粒数/核的变化来反映UDS过程中~3H-TdR的掺入量。我们曾经     

质谱技术在蛋白质组学中的应用

质谱技术是通过测定样品离子的不同质荷比（m/z）及其分布来进行结构和成分分析的一种分析方法.自从20世纪中期商品化的离子仪出现以后,由于其电离技术和分析技术的不断发展与完善,质谱在环境化学、有机化学、地质化学及制药等多个领域都有着较为广泛的应用.     

大蒜提取液对细胞生长,细胞周期进展及蛋白激酶C活性的影响

实验证明大蒜提取液对人羊膜FL细胞株的细胞增殖有抑制作用,其作用环节在细胞周期的G_2/M期;适当浓度的大蒜提取液对促癌剂12-0-十四酰基-佛波醇-13-乙酸酯(TPA)诱发的蛋白激酶-C(PK-C)活性变化有拮抗作用,但大蒜提取液在较高浓度时本身能引起类似于TPA诱发的PK-C活性变化。     

MNNG对哺乳类细胞JNK/SAPK及p38MAPK作用及其信号源研究

目的:研究低浓度烷化剂N-甲基-N' -硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对JNK/SAPK及p38 MAPK通路的作用及其信号源。方法: 分别测定完整Vero细胞和脱核Vero细胞的JNK/SAPK及p38 MAPK酶活性,并比较其结果。 结果:低浓度MNNG在完整Vero细胞和脱核Vero细胞中均抑制JNK/SAPK酶活性;在p38 MAPK通路中,完整Vero细胞表现酶活性升高,而脱核Vero细胞该激活作用消失。 结论: 低浓度MNNG抑制JNK/SAPK的作用不依赖于核内信号,而对p38 MAPK的激活作用依赖与于核内信号。     

低浓度MNNG引起vero细胞PKA途径激活及CREB磷酸化

紫外线、离子辐射及烷化剂等理化因子不但能直接攻击ＤＮＡ ,还可能通过激活细胞内信号系统引起一系列后继的基因外事件 ,包括基因表达的改变。已经证明 0 2 μｍｏｌ/ＬＭＮＮＧ能在ｖｅｒｏ细胞中引起ＤＮＡ聚合酶 β转录增加 ,而其启动子中能为转录因子ＣＲＥＢ二聚体结合的ＣＲＥ基序则被认为是转录激活所必需的。ＰＫＡ等蛋白激酶能催化ＣＲＥＢ丝氨酸 - 1 33的磷酸化并激活其转录活性。目的 :验证我们所用的低浓度ＭＮＮＧ是否能在ｖｅｒｏ细胞中激活ｃＡＭＰ -ＰＫＡ信号途径并引起转录因子ＣＲＥＢ丝氨酸 - 1 33的磷酸化增加。方法…     

POLH基因反义阻断细胞系的建立及POLH在MNNG引起的非定标性突变中的作用

目的 :通过建立 POLΗ反义阻断细胞系 FL - POLΗ-,研究 POLΗ的功能。方法 :将 POLΗ基因的 14 73～ 2 131片段反向克隆到哺乳动物细胞表达载体 p MAMneo- amp-中 ,将重组表达质粒转染 FL细胞 ,G4 18筛选 ,获得 POLΗ基因被表达阻断的哺乳动物细胞系 FL - POLΗ-。采用穿梭质粒 p Z189介导的突变实验 ,观察在 POLΗ基因表达被阻断细胞系中进行复制时的自发突变频率和 MNNG引起的诱发突变频率。结果 :成功建立细胞系 FL -POLΗ-。穿梭质粒 p Z189在 FL- POLΗ-细胞中复制后 ,其 Sup F t RNA基因的自发突变频率为 13.5× 10 -4,而对照细胞 FL和 FL- M分别为 4 .9× 10 -4和 3.7× 10 -4。同时 ,质粒在接触过 MNNG的 FL- POLΗ-细胞中复制 ,其 Sup Ft RNA基因的非定标性突变频率不发生。结论 :POLΗ在维持哺乳类细胞的遗传稳定性中起重要作用 ,且参与哺乳动物细胞中 MNNG引起的非定标性突变。