外周血中血脑屏障损伤新型标记物脑微血管内皮细胞检测方法的建立

目的建立检测人血脑屏障（BBB）损伤新型标记物外周循环血中脑微血管内皮细胞（cBMECs）的实验方法。方法选取
33名AIDS脑病病例与13名健康对照分组实验,应用免疫磁珠吸附AIDS脑病病例组及健康对照组外周血中内皮细胞后涂片,
免疫荧光三重染色法检测涂片中的cBMECs及相关内皮细胞（cECs和EPCs）,并观察其与BBB损伤的关系。结果免疫荧光三
重染色法成功检测到细胞型为CD146+/CD133-/S100B+的cBMECs 细胞,CD146+/CD133-/S100B-的cECs 细胞和CD133+/
CD146+/S100B-的EPCs细胞。结果显示,病例组三种细胞含量均高于对照组,差别有统计学意义（cBMECs、cECs、EPCs分别为
t=4.298,P<0.01;t=4.886,P<0.01;t=4.889,P<0.01)。此外,以cBMECs含量与HIV病毒载量做散点图,可见cBMECs含量随病
毒载量增加而增加,且具有统计学意义（r=0.928,P<0.01）。结论用临床病人标本成功建立了在外周血中检测BBB损伤新型标
记物cBMECs的实验方法。BBB损伤病人外周血中cBMECs含量显著高于健康人。新型标记物cBMECs在无创检测BBB损
伤方面具有重要临床价值。
     

Muc2基因沉默可降低益生菌抑制大肠杆菌黏附和侵袭的能力

目的建立抑制肠上皮细胞基因组中Muc2 基因表达的CRISPR/Cas9 系统并探索粘蛋白Muc2 在鼠李糖乳杆菌GG株 （LGG）抑制大肠杆菌K1（Escherichia coli, E.coli k1）株E44 黏附和侵袭肠上皮中的作用机制。方法设计2 个长20~25 bp 的 sgRNA分别靶向Muc2,合成sgRNA寡核苷酸序列并构建CRISPR表达载体,转染野生型人结肠癌Ht29细胞,蛋白免疫印迹法 检测抑制效率及通过MTT法检测其细胞活力及生长情况后,竞争性排斥分析验证粘蛋白Muc2在益生菌抑制E44黏附侵袭肠 上皮中的作用。结果目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的lenticrisprv2质粒载体中且序列正确;稳定抑制Muc2表达的 细胞株筛选成功;Muc2基因沉默后,与空白对照组相比,其表达水平明显降低,抑制率可达81%（P<0.01）;黏附侵袭实验中E44 相对黏附率为72.23%（P<0.01）,相对侵袭率为81.49%（P<0.01）,益生菌LGG的抑制E44 黏附和侵袭作用明显下调。结论 Muc2基因下调明显降低益生菌抑制E44黏附和侵袭肠上皮细胞的能力,提示益生菌刺激Muc2表达上调可能是其强化加固肠粘 膜屏障和拮抗致病菌功能的关键性机制之一,并可为肠道细菌性感染疾病的预防治疗提供了一个新手段。