英夫利西联合硫唑嘌呤治疗克罗恩病的临床及内镜随访

目的 观察英夫利西联合硫唑嘌呤治疗克罗恩病(CD)的疗效及黏膜愈合情况与预后的关系.方法 研究对象为广州中山大学附属第一医院接受英夫利西联合硫唑嘌呤治疗的20例活动性CD患者.根据CD活动指数分别评价治疗10周、30周、54周及2年时的临床疗效.根据内镜下黏膜应答情况分别评价治疗10周、30周、54周时的内镜下疗效.两组间比较采用方差分析或Fisher精确概率法.黏膜愈合影响因素采用Logistic回归分析.结果 治疗10周、30周、54周和2年时的无糖皮质激素临床缓解率分别为12/20、16/20、15/20和15/20,10周、30周和54周时的黏膜愈合率分别为8/20、12/20和10/20.Logistic多因素回归分析显示,年轻是影响治疗30周时黏膜愈合的惟一因素((OR=0.774,95％CI:0.630～0.950).30周时黏膜应答者与内镜下无效者在30周及2年时的无糖皮质激素临床缓解率(30周时为14/14比2/6,2年时为14/14比1/6)均差异有统计学意义(Fisher精确概率法,P均＜0.01).30周时获无糖皮质激素临床缓解的16例患者在54周时有4例停用英夫利西,其余12例继续英夫利西治疗,停用和续用英夫利西者的无糖皮质激素临床缓解率(4/4比11/12)和黏膜愈合率(2/4比7/12)均差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 英夫利西联合硫唑嘌呤治疗可有效促进和维持CD黏膜愈合,黏膜应答者能维持较长期的无糖皮质激素临床缓解.     

Survivin-短发夹RNA抑制结肠癌SW480细胞生长的研究

目的 探讨靶向survivin的短发夹RNA(shRNA)对人结肠癌SW480细胞的基因下调效应和细胞生长的抑制作用.方法 构建靶向survivin的shRNA质粒载体,然后转染入结肠癌SW480细胞.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western Blot)检测survivin的mRNA和蛋白的表达情况,MTT实验评价转染后各组细胞的增殖情况.结果 靶向survivin的shRNA能够明显下调survivin mRNA和蛋白质表达(P＜0.05),其抑制率分别是41.49%和40.82%.MTT实验提示转染了特异性靶向survivin shRNA的SW480细胞在转染48 h后开始呈现随着时间延长而进行性生长抑制的现象.在转染后72 h该细胞存活率仅为43.6%,与空白对照组相比有显著性的降低(P＜0.05).结论 靶向survivin的特异性shRNA对结肠癌SW480细胞能够明显地下调survivin基因表达,并且显著抑制细胞的增殖. Abstract： Objective To observe the inhibitory effect of survivin gene expression and cell proliferation of the human colon cancer cell line SW480 caused by surviving-shRNA. Methods The survivin-shRNA was constructed and transfected into SW480 cells with LipofectamineTM2000. The down-regulations of survivin expressions were detected by RT-PCR and western blot analysis. The cell proliferation inhibitions were determined by MTT assay. Results The survivin-shRNA successfully and efficiently suppressed the expression of survivin mRNA and protein(P＜0.05).The expression inhibition rates were 41.49% and 40.82% at the mRNA and protein level respectively. The MTT assay indicated that the specific shRNA resulted in significant inhibition of cell growth on the culture plates on a time-dependent manner since 48 hours post-transfection. The cell viability of SUR group was 47.8% at 72 h,which was of statistical significance compared with that of blank control group (P＜0.05).Conclusions The specific survivin-shRNA could down-regulate the expression of survivin gene and inhibit the growth of SW480 cells.     

核增殖抗原和生存素蛋白在胃肠道间质瘤中的表达与意义

目的 探讨核增殖抗原(Ki-67)和生存素(survivin)蛋白在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达及临床意义.方法 应用免疫组化SP法和病理图像分析系统检测85例胃肠道间质瘤(GIST)患者中Ki-67和survivin的表达情况,结合临床病理学资料分组比较并进行统计学分析.结果 85例GIST中Ki-67和survivin表达的平均灰度值在良性组、潜在恶性组、恶性组中依次递减, 即它们的阳性表达水平逐渐增高.三组两两比较,各组的平均表达水平差异有统计学意义(P<0.05).而且在41个恶性病例中,有浸润或转移的亚组的Ki-67和survivin表达水平显著高于无浸润转移亚组的表达水平(P<0.05).同时统计分析表明GIST中Ki-67和survivin表达有显著的正相关性(P<0.01).结论 Ki-67和survivin高表达导致肿瘤细胞的增殖旺盛和凋亡抑制是GIST发生恶变以及向外侵袭转移的重要机制之一,两者可能用以协助判断GIST的良恶性以及预测肿瘤转移及预后. Abstract： Objective To investigate the expression of Ki-67 and survivin in gastrointestinal stomal tumors (GIST) and their clinical pathologic significance. Methods The expression of Ki-67 and survivin were detected in 85 cases of GIST by immunohistochemical technique. Futhermore,multi-function precise color-image measure system was used for quantitative analysis.The relationship between expression and clinical pathologic data was analyzed.Results Among 85 GISTs, the expression of Ki-67 and survivin in benign,potentially malignance and malignance group were increased gradually.There was a significant difference among the groups of each gene's expression(P<0.05). There was also significant difference in the expression of Ki-67 and survivin between the metastasis subgroup and the non-metastasis subgroup. There was significant positive correlation between Ki-67 and survivin expression(P<0.05). Conclusions The unbalance of the cell proliferation and apoptosis resulted by the increased expression of Ki-67 and survivin is one of the important mechanism in carcinogenesis process and invasion and metastasis of GIST. The expression of Ki-67 and survivin maybe can serve as an important predicting maker for malignancy degree and metastasis and prognosis of GIST.     

胎儿脐血管穿刺产前诊断100例临床分析

目的分析脐血管穿刺的安全性及脐血管穿刺产前诊断的临床意义。方法对开展的100例脐血管穿刺产前诊断进行回顾性研究。结果脐血管穿刺孕周21~36周,孕妇年龄21~39岁,穿刺成功率100%,诊断异常13例,符合率100%,胎盘穿刺点出血49例,脐带穿刺点出血15例,胎心过缓6例,胎儿宫内死亡1例。结论B超引导下脐血管穿刺是产前诊断的重要内容,合理选择适应证,规范操作,可降低母儿并发症发生率,具有重要的产前诊断意义。     

宫颈癌患者外周血和宫颈组织中髓源性抑制细胞的检测及意义

［摘要］目的: 检测髓源性抑制细胞(myeloid derived suppressor cells,MDSC)在宫颈癌患者外周血和癌组织中的比例及亚群分布,初步探讨其临床意义。方法: 采用流式细胞术分别检测17例宫颈癌患者治疗前和20例健康者外周血、17例宫颈癌组织和15例正常宫颈组织细胞悬液中MDSC比例及其亚群分布,并分析其与鳞状细胞癌抗原的相关性。结果： 与健康者相比,宫颈癌患者外周血中MDSC比例明显增高(P＜0.01),以CD15+粒细胞样亚群为主。与正常宫颈组织细胞悬液相比,癌组织细胞悬液CD45+细胞的比例明显增加(P＜0.05),但细胞中未见CD33+表面标志的表达。宫颈癌患者外周血MDSC比例与鳞状细胞癌抗原值呈正相关(r=0.715 4,P＜0.05)。结论： 外周血中粒细胞样的MDSC可能与宫颈癌的发生发展密切相关。     

特异性靶向Bcl-XL ShRNA抑制Lovo细胞移植瘤生长的实验研究

目的 探讨靶向Bcl-XL shRNA对人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用.方法 构建两个靶向Bcl-XL的shRNA质粒载体XL1、XL2和阴性对照质粒Neg,并将其转入人结肠癌Lovo细胞,分组种植建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型.随后观察各组裸鼠的肿瘤生长情况.第8周裸鼠处死,HE染色观察肿瘤细胞的形态,免疫组化方法检测Bcl-XL蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 第8周XL1、XL2实验组裸鼠移植瘤的体积和质量与空白对照组相比均有显著缩小(P<0.05),抑制率约50%.与空白对照组相比,XL1、XL2组移植瘤的Bcl-XL表达均有显著下调,肿瘤细胞凋亡指数均有显著升高(P<0.05).阴性对照组的上述指标与空白对照组相比差异均无统计学意义.结论 靶向Bcl-XL shRNA能够抑制人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤的生长,可能机制为促进肿瘤细胞凋亡.     

不同亚群肝脏巨噬细胞在猪血清诱导大鼠免疫性肝损伤中作用

目的:我们前期研究发现在正常大鼠肝脏中存在2个巨噬细胞亚群,本实验将探讨猪血清诱导免疫性肝损伤大鼠肝脏巨噬细胞的构成及作用。方法:(1)制作大鼠免疫性肝损伤模型。(2)肝脏病理组织学及免疫荧光研究。(3)流式细胞技术研究并分离肝脏巨噬细胞。(4)实时定量PCR检测肝脏巨噬细胞、炎症及纤维化相关细胞因子及Ki67(细胞增殖抗原,MKI67)的表达。结果:(1)猪血清腹腔注射组(IPS组)大鼠肝内大量纤维间隔形成,α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性的肌成纤维细胞增生,ED2(CD163,表面抗原分化簇163)阳性细胞增多。(2)免疫荧光及印度墨注射后显示IPS组肝脏中巨噬细胞大小不一,自身荧光强弱不等,在肝内分布不同;GdCl3仅可清除体积大、自身荧光强的细胞。(3)自大鼠肝脏分离出2个巨噬细胞亚群,即ED2染色强阳性、自身荧光强的细胞(ED2high/AFhigh)和ED2染色弱阳性、自身荧光弱的细胞(ED2dim/AFdim),与对照组相比IPS组2个亚群细胞数量均显著增多。(4)ED2high/AFhigh细胞中主要表达与炎症相关的细胞因子,ED2dim/AFdim细胞则主要表达与纤维化相关的细胞因子。(5)ED2dim/AFdim细胞Ki67表达显著高于ED2high/AFhigh细胞,IPS组巨噬细胞Ki67表达显著高于对照组。结论:猪血清诱导免疫性肝脏损伤大鼠肝脏中亦存在2个巨噬细胞亚群,它们在肝脏损伤发病中发挥不同的作用,ED2dim/AFdim细胞增殖活跃,主要表达与纤维化相关的基因,可能在猪血清诱导的肝纤维化形成中起着重要作用。     

食管钡餐造影对食管型颈椎病的诊断价值

目的 探讨颈椎病引发食道吞咽困难的钡餐造影检查诊断价值.方法 收集食管型颈椎病30例,男14例,女16例.年龄44～71岁,平均59.8岁.全部进行食管钡餐检查.结果 颈椎体前缘有不同程度的骨质增生,增生骨赘压迫食管,致食管弧形压迹,单个弧形压迹6例,位于颈5～6,双弧形压迹11例,位于颈5～6至颈6～7,多个弧形压迹3例,位于颈4～5至颈6～7,钡剂滞留5例.结论 食管钡餐造影检查对颈椎病引发咽喉部异物感或吞咽困难的早期诊断、早期治疗及鉴别诊断有一定价值.     

基于化学特征与核心功效分析经典名方桃红四物汤复方合煎与单煎差异研究

目的通过分析桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,TSD)合煎和单煎混合冻干粉之间化学成分、核心药效的差异性,探讨TSD经典名方制剂与单味药配方颗粒临床灵活应用的合理性。方法采用UPLC-Q-Exactive Orbitrap/MS对TSD基准样品合煎与单煎混合样品进行定性鉴定分析,同时测定合煎与单煎混合样品中9种指标成分的含量,比较单煎与合煎样品中成分的差异;并从调经止痛的核心药效建立大鼠急性痛经模型,对比评价二者药效差异。结果通过UPLC-Q-Exactive Orbitrap/MS技术分析初步鉴定并归属TSD合煎和单煎冻干粉中共有31种化学成分,在成分种类上无明显差异;进一步测定其中9种成分的含量,结果表明,单煎混合样品比较于合煎样品,芍药苷、芍药内酯苷、羟基红花黄色素A含量相对降低,而没食子酸、绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯I、5-羟甲基糠醛、毛蕊花糖苷含量相对升高,且对9种成分含量进行统计学分析表明二者之间含量未有明显差异(P0.05),说明这些成分不受合煎与单煎体系的影响;干膏得率结果表明,单煎混合样品的平均干膏得率与合煎样品差异不大。调经止痛核心药效实验结果表明,与模型组相比,合煎与单煎混合样品组均能延长大鼠扭体潜伏期、降低扭体次数,显著降低血清中前列腺素F2α(prostaglandin F2α,PGF2α)、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与子宫组织中Ca2+、内皮素-1(endothelin 1,ET-1)、NO水平(P0.05),改善子宫上皮细胞炎症、水肿等病理变化,具有一定的缓解痛经作用,合煎和单煎混合样品在功效上未见显著差异。结论 TSD复方合煎与单煎基准样品在化学成分种类、含量及核心药效上均未见明显差异,为其复方制剂与单味药配方颗粒制剂的临床合理应用与评价提供参考依据,也进一步为实现在古代经典名方基础上随证加减单味药配方颗粒的临床个性化用药方式提供研究基础。     

基于代谢组学技术分析四物汤治疗原发性痛经证的作用机制

目的:从内源性代谢物的角度研究四物汤治疗原发性痛经证的作用机制。方法:构建苯甲酸雌二醇-缩宫素联用致大鼠痛经模型;采用UPLC-Q-TOF-MS技术分析痛经大鼠血浆中代谢物的指纹图谱,电喷雾正离子模式(ESI+)和负离子模式(ESI-)对样品进行检测,m/z 50~1 000,结合质谱信息和公共数据库检索对检测到的代谢物进行鉴定;运用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)筛选正常组、痛经模型组和四物汤组之间的差异代谢物;对差异代谢物进行KEGG(京都基因与基因组百科全书)代谢通路分析。结果:痛经模型大鼠中检测鉴定23种内源性代谢产物;其中痛经模型组与正常组相比,黄体酮,11-脱氧皮甾醇,牛磺熊去氧胆酸和溶血磷脂酸为差异代谢物[变量重要性投影值(VIP)1,P0.05]。四物汤组与痛经模型组相比,L-苯丙氨酸,L-酪氨酸,N-苯甲酰甘氨酸,L-蛋氨酸,11-脱氧皮甾醇和硬脂酸甘氨酰胺为差异代谢产物(VIP1,P0.05)。结论:四物汤对原发性痛经证大鼠体内差异代谢物有一定的回调作用,其作用机制主要与影响类固醇激合成、溶血磷脂酸代谢、氨基酸代谢相关。