雌激素受体核酸适配体在乳腺癌免疫组织化学检测中的应用

  目的  筛选出能应用于乳腺癌免疫组织化学检测的雌激素受体（ER）核酸。  方法  制备ER蛋白,用指数富集的配体系统进化（SELEX）技术筛选出对ER具有高亲和力和特异性的核酸适配体。采用配体－受体相互反应实验来测定合成的ER适配体复合物的亲和力,用生物素化ER适配体和ER单克隆抗体分别作为一抗对105例乳腺癌组织进行免疫组化染色,以检测合成的ER适配体在癌组织中的特异性表达。用Kappa检验进行一致性检验。  结果  线性回归法计算获得生物素化适配体与ER复合物的解离常数Kd值为（0.34±0.05）nmol/L (n=3, r=0.989),最大结合力（B_max）为769.23 fmol/(mg prot·nmol-1·L-1)。实验结果表明,分别用生物素化ER适配体和ER单克隆抗体分别作为一抗进行免疫组化染色的结果具有高度一致性。其中ER阳性和阴性样本n=105,kappa值=0.943,95%可信区间=0.879~1.006,P<0.05;而ER弱阳性和中度/强表达样本n=75,kappa值=0.805,95%可信区间=0.642~0.967,P<0.05。进一步观察发现,ER适配体和ER抗体能使乳腺癌组织同一部位出现阳性表达,而阴性对照组均无表达。2例子宫内膜癌用生物素化ER适配体检测,癌细胞ER表达均为阳性。  结论  我们合成的ER适配体在体外能高度结合ER,ER适配体和ER抗体都能检测乳腺癌组织中ER的特异性表达。     

利用组织芯片研究Rb基因在原发性肝细胞肝癌中的表达

目的：研究原发性肝细胞肝癌（HCC）中Rb基因的表达，方法：利用组织芯片技术和免疫组织化学技术（SP法）检测40例HCC有其相应癌旁，远癌正常组织中Rb蛋白的表达情况。结果：40例原发性HCC患者标本中，肿瘤组织中Rb蛋白表达缺失者有17例，癌旁组织中有4例，在远癌 正常组织有1例，HCC肿瘤组织中Rb蛋白缺失率显著高于相应癌旁及远癌正常组织（P＜0．05），Rb蛋白表达的缺失与肿瘤的大小，病理学分级无统计学相关性（P＞0．05），结论：HCC的发生，发展与Rb蛋白的缺失可能有关，组织芯片是一种可高效进行肿瘤分子病理研究的技术平台。     

基础胰岛素联合口服降糖药治疗2型糖尿病的临床疗效观察

目的评估基础胰岛素联合口服降糖药(OADs)用于治疗以预混胰岛素联合或不联合OADs为降糖方案的血糖控制欠佳的2型糖尿病(T2DM)患者的有效性及安全性。方法 32例预混胰岛素联合或不联合OADs治疗血糖控制欠佳的T2DM患者,停止正在使用的预混胰岛素,改用甘精胰岛素联合OADs治疗16周,比较受试者治疗前后糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FBG)、餐后血糖(PBG)、体质量指数(BMI)和胰岛素剂量,并记录低血糖事件发生情况。结果 32例患者均完成研究,经甘精胰岛素治疗16周后,受试者HbA1c、FBG、BMI均较治疗前明显下降(P0.01)。甘精胰岛素使用剂量较入组时预混胰岛素剂量显著减少(P0.01)。治疗期间有2例(6.2%)受试者发生低血糖事件2次,均为一般性低血糖。结论每日1次基础胰岛素能有效改善预混胰岛素加或不加OADs治疗失败的T2DM患者的糖代谢,并且不增加体质量。     

乙肝核酸疫苗pCI/S2S接种小鼠后的免疫应答研究

目的 构建乙肝核酸疫苗pCI/S2S,研究其接种小鼠后,接种局部肌肉特异性抗原蛋白的表达以及所诱生的免疫应答反应.方法 从慢性乙肝患者的混合血清中制备HBV DNA模板,扩增出基因片段S2S,与pCI载体进行连接,得到重组质粒pCI/S2S.将其肌肉注射接种BALB/c小鼠,在不同的时间点检测血清中抗-HBs及抗-preS2;并于第12周时用细胞毒性检测试剂盒(LDH)检测体外细胞毒性T细胞(CTL)活性,同时以免疫组织化学法检测小鼠接种部位HBsAg的表达.结果 小鼠肌肉接种pCI/S2S完成后1周血清抗-HBs、抗-preS2开始阳转,阳转率于6周或8周达高峰,且能诱生特异性CTL应答.此外,免疫组织化学法能在小鼠的接种局部肌细胞中检测出目的抗原蛋白的表达.结论 乙肝核酸疫苗pCI/S2S接种小鼠后,能在小鼠体内诱生特异性的体液免疫和细胞免疫应答.     

子宫内膜基质细胞AQP7的表达以及卵巢激素对AQP7的调控作用

目的:探讨水通道蛋白7(Aquaporin 7,AQP7)在小鼠子宫内膜及在体外诱导蜕膜化模型中的表达,卵巢激素对AQP7的调控,以探讨AQP7在子宫蜕膜化中的作用.方法:分离孕4-8天小鼠子宫基质细胞(Uterine stromal cells,ESCs),实时定量PCR(RT-PCR)检测基质细胞AQP7表达.收集孕4～8天小鼠子宫,免疫组织化学染色检测子宫内膜组织AQP7的表达.分离原代小鼠基质细胞,建立体外诱导蜕膜化模型,RT-PCR检测AQP7在ESCs中的表达.在体外培养的孕5天小鼠子宫基质细胞中分别加入雌二醇(E2)、孕酮(P4)以及E2和P4联合处理.用雌激素受体(ER)的拮抗剂ICI 182,780和孕激素受体(PR)拮抗剂RU486预处理基质细胞,再用E2+P4处理.收集各组ESCs,RT-qPCR检测卵巢激素对基质细胞中AQP7的调控作用.结果:AQP7 mRNA在体外分离的孕4～8天的子宫基质细胞中的表达逐渐升高.从孕5～8天,随着蜕膜化进程,子宫基质细胞中AQP7表达也逐渐增加.在体外诱导蜕膜化模型中,小鼠基质细胞中AQP7 mRNA表达显著升高(P<0.01).在E2和P4单独作用下,基质细胞中AQP7表达无明显变化;而与对照组比较,E2和P4联合处理组在E2和P4联合作用24小时后基质细胞中AQP7表达显著升高(P<0.01);且在E2和P4联合作用后、基质细胞中AQP7的升高能够被雌激素受体的拮抗剂ICI 182,780和孕激素受体拮抗剂RU486阻断(P<0.01).结论:随着蜕膜化进程,子宫基质细胞中AQP7表达逐渐增加.卵巢雌、孕激素联合作用可上调基质细胞中AQP7表达.子宫基质细胞中AQP7在蜕膜化和胚胎着床中发挥着重要作用.     

老年痴呆症药物石杉碱甲类似物研究V.光学活性(-)-1-甲基石杉碱甲的合成

目的：光学活性（－）１甲基石杉碱甲的合成及其乙酰胆碱酯酶抑制活性的研究。方法：从光学纯的（５Ｓ,９Ｒ）５出发,经Ｗｉｔｉｇ反应和双键异构化得化合物６。用三甲基氯硅烷和碘化钠选择性脱保护得吡啶酮７后,用甲醇钠和碘甲烷选择性Ｎ甲基化得８,经酯水解、Ｃｕｒｔｉｕｓ重排和脱保护合成了光学活性１位氮上甲基取代的石杉碱甲类似物１１。结果：类似物１１的乙酰胆碱酯酶抑制活性低于石杉碱甲。结论：１甲基能影响类似物１１和蛋白活性之间形成氢键的作用,因此降低其抑制活性。     

在《物理诊断学》课程中应用虚拟仿真教学平台实施PBL的研究

目的　探讨在《物理诊断学》教学中应用虚拟仿真教学平台实施PBL的价值。方法　将临床医学学生分为实验组（162人）和对照组（168人）。实验组结合虚拟仿真教学平台实施PBL教学;对照组实施常规教学。通过问卷调查及答题考核评价教学效果,采用SPSS 16.0进行卡方检验及t检验。结果 实验组学生物理诊断学课程PBL案例分析考核成绩为（26.1±5.6）分,对照组学生成绩为（21.6±4.3）分,差异具有统计学意义（P<0.05）。课程满意度问卷显示,实验组学生中150人（92.6%）对新教学方式具有浓厚兴趣,137人（84.6%）认为能增加学习兴趣,148人（91.3%）认为能增强临床思维能力。结论 在《物理诊断学》教学中引入虚拟仿真教学系统,让学生真实面对PBL教学中的各种临床病例,可增加教学的直观性,提高学生学习的主动性,对培养医学生临床动手能力和临床综合思维等技能具有重要意义。     

乙肝DNA疫苗pCI/S的构建及诱导小鼠的免疫反应

目的:构建乙肝DNA疫苗pCI/S,观察其接种小鼠后所诱生的免疫应答效果.方法:构建重组质粒pCI/S,将其免疫BALB/c小鼠,在动态观察小鼠血清抗-HBs的诱生,并于第12周时检测体外CTL活性,同时以免疫组织化学法检测小鼠接种部位HBsAg的表达情况.结果:小鼠肌肉接种pCI/S后,1周时血清抗-HBs开始阳转,阳转率于6周、8周达高峰,且能诱生特异性CTL应答.此外,免疫组织化学法能在小鼠接种局部检测出HBsAg的表达.结论:乙肝DNA疫苗pCI/S能在小鼠体内诱生特异性的体液免疫和细胞免疫应答.     

不同体重指数对初发2型糖尿病并发症及治疗方案的影响

目的探讨不同体重指数（BMI）对初发2型糖尿病并发症的发生率及治疗方案的影响。方法选取重庆市南川区人民医院2010年1月~2013年6月诊治初发2型糖尿病患者310例,按BMI标准分为三组,A组（BMI〈25 kg/m2）118例、B组（BMI：25~28 kg/m2）117例、C组（BMI〉28 kg/m2）75例,随访时间1~3年。随访结束时比较分析三组患者肾功能、糖尿病视网膜病变、糖尿病足（手）、糖尿病周围神经病变、低血糖晕厥、高渗性昏迷、酮症酸中毒并发症。结果随访结束时,C组血肌酐[（142.6±44.3）μmol/L]、尿白蛋白[（142.0±36.7）mg/24 h]、尿钠[（579.4±163.8）mmol/24 h]水平均高于A组[（122.2±36.3）μmol/L、（113.2±23.2）mg/24 h、（422.3±125.9）mmol/24 h]及B组[（127.9±40.8）μmol/L、（120.3±32.6）mg/24 h、（467.8±155.4）mmol/24 h]水平,差异有高度统计学意义（P〈0.01）,而尿肌酐A组[（9.3±1.9）mmol/24 h]、B组[（9.1±2.1）mmol/24 h]、C组[（9.4±1.7）mmol/24 h]三组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。A、B和C组间糖尿病肾病的发病率差异无统计学意义（P〉0.05）。A、B、C三组糖尿病视网膜病变分期差异有统计学意义（P〈0.05）,BMI值越大,糖尿病视网膜病变越严重。A、B、C三组糖尿病足、低血糖晕厥、酮症酸中毒及高渗性昏迷发病率差异有统计学意义（P〈0.05）,而糖尿病周围神经病变发病率差异无统计学意义（P〉0.05）。三组间治疗方案有明显差异,且差异有统计学意义（P〈0.05）。BMI和胰岛素剂量呈正相关（r=0.56,P〈0.05）。结论 BMI越大,糖尿病患者并发症发生率越大,预后越差,对过度肥胖的糖尿病患者,及早联合应用胰岛素治疗,可能会减少糖尿病并发症的发生率。     

肝细胞性肝癌中库普弗细胞的分布及意义

往认为,库普弗细胞不存在于肝细胞性肝癌(HCC)组织中;现在认为,库 抗－CD68(鼠抗－CD68,D8kO公司)工普弗细胞也存在于高分化肝癌及早期肝 作浓度为二:50,用高压蒸气祛(121℃、癌[l]。本实验应用组织芯片技术(专利号:LZ大气压10＿)进行抗原修复,DABZL99241752、ZL99241767．8)研究了HCC 显色。