增强核酸疫苗免疫应答的策略及方法

核酸疫苗又称DNA疫苗,是指将编码某种目的抗原蛋白的外源基因插入真核细胞表达质粒,直接导入动物体细胞内,并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,从而达到预防和治疗疾病的目的.核酸疫苗不仅能刺激机体产生特异性的体液免疫,还能诱导产生特异性的具有细胞毒杀伤性功能的CTL效应（细胞免疫）,并可直接清除带有目的抗原的靶细胞,因此对病毒、细胞内寄生的细菌和寄生虫所引起的传染病具有广阔的治疗前景[1-6].     

2型糖尿病周围神经病变患者振动感觉阈值和骨质疏松的相关性研究?

目的：探讨2型糖尿病周围神经病变(DPN)患者振动感觉阈值(VPT)与骨质疏松(OP)之间的关系。方法选取2012年8月至2014年6月泸州医学院附属医院内分泌科确诊的2型糖尿病(T2DM)患者共230例,根据症状、体征和实验室检查,分为糖尿病周围神经病变组(DPN 组,n=56)和非神经病变组(NDPN 组, n=174),测定两组患者腰椎1-4(L1-4)、股骨颈、股骨大转子和 wards 三角骨矿密度(BMD),并比较分析 VPT 与L1-4、股骨颈、股骨大转子、wards 三角 BMD 以及血钙(Ca2+)﹑踝肱指数(ABI)等指标的相关性。同时,根据 BMD将所有研究对象分为单纯 T2DM 组(non-OP 组,n=142)和 T2DM 合并 OP 组(OP 组,n=88例),比较各组 DPN的患病率及 VPT 变化趋势。采用 logistic 回归法,分析 T2DM 患者发生 OP 的危险因素。结果DPN 组 VPT 明显高于 NDPN 组,L1 BMD、L2 BMD、L3 BMD、L4 BMD、L1-4 BMD、股骨颈 BMD、股骨大转子 BMD 和 wards 三角BMD 明显低于 NDPN 组(P <0.05或 P <0.01)。相关分析显示,DPN 组患者 VPT 与年龄、收缩压(SBP)和糖化血红蛋白(HbA1c)呈正相关(P <0.05或 P <0.01),与 Ca2+、L1 BMD、L2 BMD、L3 BMD、L4 BMD、L1-4 BMD、股骨颈 BMD、股骨大转子 BMD 和 wards 三角 BMD 呈负相关(P <0.05或 P <0.01)。多元逐步回归分析显示,年龄、HbA1c 和 Ca2+是影响 T2DM 患者 VPT 水平的独立相关因素。OP 组 DPN 的患病率和 VPT 水平明显高于non-OP组(P <0.01)。logistic 回归分析显示,年龄和 VPT 是预测 T2DM 患者 OP 发病的危险因素。结论DPN患者 VPT 水平与腰椎、髋部 BMD 密切相关,Ca2+代谢紊乱、增龄、高血糖、高血压可能是 DPN 和 OP 之间共同的发病机制和危险因素。早期测定 T2DM 患者 VPT 水平并采取措施干预,有利于早期防治或延缓 DPN 和 OP 的发生发展。     

16-(m-氯苯氧基)-17,18,19,20失四碳前列腺素F2α的全合成

A simplified synthetic method for compound (1) was described. Both α,β-unsaturated ketone and y-lactone of (4)b were reduced with Dibal simultaneously to corresponding allylic hydroxy group and γ-lactol in good yield. Without protecting the hydroxy group, the mixture (6) was transformed to the target compound (1) by the known method.     

HLA-G在乳腺癌中的表达及意义

目的 探讨乳腺癌患者组织中人类白细胞抗原G(Human leukocyte antigen,HLA-G)的表达及其在乳腺癌诊断和预后中的作用。方法 分离纯化HLA-G蛋白,筛选出分泌抗HLA-G单克隆抗体的杂交瘤细胞株,得到抗HLA-G单克隆抗体。用免疫组织化学方法检测235例乳腺癌患者组织中HLA-G的表达,分析HLA-G的表达与各项临床病理指标、宿主免疫反应及生存率之间的关系。结果 HLA-G在乳腺癌患者的表达率为66%(155/235),HLA-G表达与肿瘤大小、临床TNM分期以及淋巴结转移有关。HLA-G阴性病人的生存率明显高于HLA-G阳性病人。结论 乳腺癌组织中HLA-G有较高表达,HLA-G的表达与宿主免疫反应及乳腺癌的预后有关,HLA-G的表达可能是影响乳腺癌病人预后的独立因素。     

四种乙肝核酸疫苗质粒的构建及在真核细胞中的表达

目的:构建四种乙肝核酸疫苗质粒pCI/S、pCI/S2S、pCI/S1S2S、pCI/S2SS2,并检测其转染真核细胞后的蛋白表达。方法:从慢性乙肝患者的混合血清中制备HBV DNA模板,分别扩增和连接,得到四个基因片段S、S2S、S1S2S、S2SS2,与pCI载体进行连接,得到四个重组质粒pCI/S、pCI/S2S、pCI/S1S2S、pCI/S2SS2,将其分别转染SP2/0细胞,检测目的抗原蛋白的表达情况。结果:四种重组质粒转染细胞后,裂解液中均可检测出目的抗原蛋白的表达。结论:所构建的四种重组质粒均能在哺乳动物细胞内表达相应的目的抗原蛋白,可用于下一步动物实验。     

雌孕激素调节水通道蛋白9表达并通过细胞外调节蛋白激酶通路影响囊胚着床的研究

目的 探讨卵巢雌孕激素对囊胚滋养外胚层细胞水通道蛋白9(AQP9)表达的调节并通过细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2通路影响囊胚的粘附和着床.方法 将小鼠囊胚分别分为空白对照组(Ctrl组)、雌二醇组(E2组)、孕激素组(P4组)、E2+P4联合处理组处理,RT-PCR检测囊胚细胞中AQP9表达.在加入卵巢激素的培养囊胚中给予siRNA-AQP9(si-AQP9),蛋白质印迹技术检测囊胚磷酸化ERK1/2的表达.在体外培养囊胚加入卵巢激素后,将分别加入si-AQP9和ERK1/2的抑制剂U0126的囊胚与子宫内膜上皮Ishikawa细胞株联合培养,倒置显微镜观察囊胚粘附率.结果 1)E2+P4联合组AQP9在囊胚细胞中的表达升高(P<0.05);2)与正常对照组囊胚粘附率相比较,siRNA干扰组囊胚的粘附率下降(P<0.05);3)si-AQP9干扰组囊胚滋养外胚层细胞磷酸化ERK1/2的表达较Ctrl组降低(P<0.05),U0126组囊胚的粘附率较Ctrl组降低(P<0.05).结论 卵巢雌孕激素可上调早期胚胎细胞A Q P9表达,并通过ERK通路参与早期胚胎滋养外胚层细胞对子宫内膜细胞的粘附和侵袭,在胚胎着床中发挥了重要的作用.     

老年痴呆症药物石杉碱甲类似物研究Ⅳ（±）-8，15-二氢-去-11，15-二甲基-8-羟基石杉碱甲的合成

石杉碱甲（１）是从我国草药千层塔中分到的一个可逆性的强效乙酰胆碱酯酶抑制剂，将成为新一代治疗早老性和老年痴呆症的药物．基于乙酰胆碱酯酶的Ｘ－衍射晶体结构及石杉碱甲抑制乙酰胆碱酯酶的作用机制研究结果，设计合成了（±）－８，１５－二氢－去－１１，１５－二甲基－８－羟基石杉碱甲（９ａ，９ｂ）．生物活性试验表明这些类似物抑制酶活性远低于天然石杉碱甲     

p21~(wafl/cip1)基因在原发性肝细胞肝癌中的表达

目的 :研究原发性肝细胞肝癌 (HCC)中p2 1wafl/cipl (简称p2 1)基因的表达。方法 :利用组织芯片技术和免疫组织化学技术 (SP法 )检测 40例HCC及其癌旁、远癌正常组织中p2 1蛋白的表达情况。结果 :40例原发性HCC肿瘤组织中 11例有p2 1蛋白表达缺失 ,而癌旁组织中有 2例p2 1蛋白表达缺失 ,远癌正常组织仅 1例p2 1蛋白表达阴性 ,HCC肿瘤组织p2 1蛋白缺失率显著高于相应癌旁及远癌正常组织 (P <0 0 5 ) ,并与肿瘤的病理学分级有密切联系。结论 :p2 1蛋白的缺失与HCC的发生、发展有关     

老年痴呆症药物石杉碱甲类似物研究V.光学活性(-)-1-甲基石杉碱甲的合成

目的：光学活性（－）１甲基石杉碱甲的合成及其乙酰胆碱酯酶抑制活性的研究。方法：从光学纯的（５Ｓ,９Ｒ）５出发,经Ｗｉｔｉｇ反应和双键异构化得化合物６。用三甲基氯硅烷和碘化钠选择性脱保护得吡啶酮７后,用甲醇钠和碘甲烷选择性Ｎ甲基化得８,经酯水解、Ｃｕｒｔｉｕｓ重排和脱保护合成了光学活性１位氮上甲基取代的石杉碱甲类似物１１。结果：类似物１１的乙酰胆碱酯酶抑制活性低于石杉碱甲。结论：１甲基能影响类似物１１和蛋白活性之间形成氢键的作用,因此降低其抑制活性。