携带人bcl-2基因的慢病毒表达载体的构建及其在人原代卵巢颗粒细胞中的表达

目的 构建及鉴定bcl-2基因慢病毒表达载体,并观察在体外人卵巢原代颗粒细胞中的表达.方法 采用PCR技术从含有人bcl-2基因的质粒克隆模板pCMV-SPORT6钓取bcl-2基因,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU(含EGFP基因)中,构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-bcl-2,通过酶切、测序验证bcl-2基因后,将pGC-FU-bcl-2质粒和包装质粒pHelper1.0、pHelp-er2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞.获得携带bcl-2基因和EGFP基因的重组慢病毒GC-FU-bcl-2,并转染靶细胞人卵巢原代颗粒细胞.通过检测标志蛋白增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和目的 蛋白bcl-2进一步验证pGC-FU-bcl-2在靶细胞中的表达.结果 (1)pGC-FU-bcl-2中携有正确的bcl-2基因,并能在人类细胞中表达;pGC-FU-bcl-2共转染包装细胞293T能产生重组病毒GC-FU-bcl-2;(2)目的 基因bcl-2能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞人卵巢原代颗粒细胞,并达到稳定的表达,荧光显微镜下能直接观察到GFP,Western blotting能检测到bcl-2蛋白在靶细胞中的表达.结论 成功构建了携带bcl-2基因的重组慢病毒载体,转染人卵巢原代颗粒细胞后能够稳定表达bcl-2基因,为进一步研究bcl-2的功能和细胞凋亡相关疾病的治疗奠定基础.     

复发性外阴阴道念珠菌病白色念珠菌基因型与临床症状的相关性

目的 研究复发性外阴阴道念珠菌(recurrent vulvovaginal candidasis,RVVC)白色念珠菌基因型与临床症状严重程度的相关性.方法 从临床确诊为RVVC患者的阴道分泌物中分离念珠菌,并对患者进行VVC评分,采用ITS1区单链构型多态性(SSCP)分析和大亚基rRNA基因D1/D2区序列分析相结合的方法进行菌种鉴定,应用微卫星CAI位点的SSCP和GeneScan分析相结合的方法进行白色念珠菌(Candida albicans)的基因型测定.结果 RVVC分泌物中白色念珠菌45株,其CAI区共有12种基因型,优势基因型为32-46和30-45,与其余10种非优势基因型对应的RVVC患者临床VVC评分相比,差异无统计学意义.结论 基因型为CAI30-45和CAI32-46的白色念珠菌菌株在引起RVVC的病例中占有明显优势,但是优势基因型与RVVC患者临床症状严重程度无相关性.     

二恶英与子宫内膜异位症的关系研究进展

二恶英是一类严重影响人类健康的环境污染物 ,具有致癌、致畸、免疫毒、生殖毒及内分泌毒性等 ,是近年西方国家的研究热点。自从 1999年在比利时、荷兰、德国、法国发生二恶英污染食品事件后 ,它更是倍受关注。子宫内膜异位症 (简称 :内异症 )是指有功能的子宫内膜出现于子宫内壁以外的部位 ,引起痛经、性交疼痛和不孕等的一组疾病 ,发病率高达 15 %～2 0 % ,严重影响妇女身心健康。该病发病机制尚不明确 ,亦为近年妇产科领域的研究热点。目前研究资料表明二恶英与内异症的发生、发展有较密切关系 ,现就两者的相关性研究作一介绍。1　二恶英…     

克隆高鸟嘌呤与胞嘧啶含量大鼠bcl-2基因的编码序列*☆

背景：卵巢颗粒细胞的过度凋亡是诱发卵巢早衰的根本途径，bcl-2基因具有抗细胞凋亡的特性。但实验表明，大鼠bcl-2基因序列中鸟嘌呤与胞嘧啶含量高达60.6%，应用常规聚合酶链反应方法，无法扩增出此基因。 目的：拟克隆大鼠基因组中高鸟嘌呤与胞嘧啶含量的bcl-2基因编码序列。 设计、时间及地点：开放性实验，于2007-05/12在中山大学生命科学院医药分子生物学实验室完成。 材料：Wistar大鼠购自中山大学实验动物中心生产供应部，大肠杆菌DH5α由中山大学分子医药生物学实验室保种，载体pMD18-T 购自TakaRa大连宝生物技术公司。 方法：采用改进的反转录-聚合酶链反应方法从大鼠脾脏组织中扩增出鸟嘌呤与胞嘧啶含量为60.6%的bcl-2 cDNA编码序列，将扩增产物克隆至pMD18-T载体中，用单菌活聚合酶链反应扩增快速鉴定DNA片段后进行序列分析。 主要观察指标：①大鼠bcl-2基因cDNA克隆与纯化。②bcl-2基因cDNA与pMD18-T载体的连接、转化、鉴定阳性克隆及测序结果。 结果：在筛选的阳性克隆中扩增到大鼠bcl-2基因，DNA序列分析结果与Genebank中序列相比，同源性为99%。 结论：高鸟嘌呤与胞嘧啶含量基因的扩增属于困难聚合酶链反应，实验采用改进技术成功克隆了大鼠bcl-2基因，此技术也适用于其他富含鸟嘌呤与胞嘧啶的基因快速扩增。     

子宫内膜异位裸鼠模型的建立及血管生成的观察

目的建立子宫内膜异位(EMs)裸鼠模型,观察异位病灶血管生成情况。方法建立EMs裸鼠皮下种植和腹腔注射模型,观察异位病灶的形态特点,用免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)及微血管密度。结果皮下种植组10只,成模9只,腹腔注射组10只,成模8只。异位病灶呈现增生期子宫内膜特点,VEGF表达阳性,并有微血管形成。结论成功建立EMs裸鼠皮下种植及腹腔注射模型,异位病灶新生血管较多,该模型可用于人EMs血管生成及抗血管生成治疗的研究。     

顺铂所致大鼠卵巢损伤动物模型的建立

目的：建立稳定可靠的卵巢早衰（premature ovarian failure,POF）动物模型,以供基础实验研究。方法：以Wistar雌性大鼠为研究对象,以不同剂量（3 、4.5 、6.0mg/kg）顺铂腹腔注射,观察大鼠一般情况、动情周期、性激素（雌二醇和卵泡刺激素）水平、卵巢形态学、各级卵泡数的变化。结果：顺铂可致大鼠体重下降,动情周期紊乱,雌激素下降,卵泡刺激素升高,各级卵泡计数减少,甚至在高剂量给药时能损害生育能力。结论：分别于第1、8天腹腔注射6mg/kg顺铂能引起大鼠卵巢功能明显衰退,生殖能力受损。该建立卵巢早衰动物模型的方案成功率高,造模周期较短,结果可靠,可以作为基础研究的动物造模。     

异位子宫内膜细胞凋亡的研究进展

子宫内膜异位是指正常的子宫内膜腺体和间质存在于子宫内膜以外的部位 ,当异位于子宫肌层时 ,称为子宫腺肌病(ａｄｅｎｏｍｙｏｓｉｓ) ,异位于其他部位的则称为子宫内膜异位症 (简称内异症 ) (ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ,ＥＭＴ) ,异位内膜增殖力强 ,具有粘附性强及侵蚀性生长的特点[1 ] ,表现出类似肿瘤的生长特性 ,常引起不孕、盆腔疼痛及性交困难等。迄今为止关于两病的发病机制尚未明确 ,临床上亦缺乏有效的治疗方法。当前 ,关于子宫内膜异位症的发病机制有多种假说 ,如经血倒流种植、血行 淋巴散播、医源性散播、免疫发病等。近年来…     

垂体后叶素在腹腔镜下困难子宫切除中的应用价值

目的:探讨垂体后叶素在腹腔镜下困难子宫切除术中的应用价值。方法:51例需行子宫切除同时伴有盆腔粘连的患者作为研究对象,随机分为2组,治疗组26例,术中宫体注射5U垂体后叶素加0.9%氯化钠液10ml,对照组25例,术中宫体注射0.9%氯化钠液10ml。记录术中出血量、手术时间,统计中转开腹的例数。结果:治疗组与对照组的术中平均出血量、平均手术时间的比较,差异均有显著性,对照组中转开腹2例,两组术后均无盆腔感染。结论:腹腔镜下困难子宫切除术中宫体注射垂体后叶素可减少术中出血量,缩短手术时间,减少中转开腹率,值得推广应用。     

子宫内膜异位症Access数据库的建立及其应用价值探讨

目的:建立Access子宫内膜异位症(内异症)数据库,并探讨其应用价值。方法:复习1994.08-2004.08我院内异症患者病案资料,并随访,利用Access建立内异症患者临床资料数据库。结果:在该软件平台上成功建立了605例内异症患者临床资料数据库,该库储存方便,信息量大,统计分析快捷,实现了数据网络共享。结论:Access内异症临床资料数据库功能强大,有利于医学信息的快速储存和传播,值得推广应用.     

细胞色素P450 1A1基因mRNA在子宫异位内膜及在位内膜中的表达

细胞色素P450 1A1(CYP 1A1)是参与外源性化合物在体内代谢的重要的I相代谢酶，同时参与内源性雌激素的代谢，广泛分布于肺、胎盘及子宫等肝外组织。本研究采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术，检测子宫内膜异位症(内异症)患者异位、在位子宫内膜及非内异症患者子宫内膜中CYP 1A1 mRNA的表达情况，探讨CYP 1A1与内异症发病的关系。