p62Dok PTB结构域融合蛋白的表达和纯化

目的 :制备p6 2DokPTB结构域的GST融合蛋白。方法 :用PCR方法扩增编码p6 2DokPTB结构域的cD NA ,并将其克隆入表达载体pGEX 4T 3中 ,转化大肠杆菌BL 2 1,构建成表达GST PTB融合蛋白的菌株。经IPTG诱导表达后 ,经Glutathion Sepharose 4B亲和层析柱纯化 ,用SDS PAGE进行分析 ,该融合蛋白的表达量超过菌体总蛋白的 2 5 %。结果 :获得重组GST PTB融合蛋白 ,纯度在 95 %以上 ,产物得率约 75 %。结论 :成功制备高纯度p6 2DokPTB结构域的GST融合蛋白 ,为进一步研究p6 2DokPTB结构域的结构和生物学功能奠定了基础。     

局麻下疝环充填式无张力修补术在腹股沟疝手术中的应用体会

目的分析研究局麻下腹股沟疝疝环充填式无张力修补术的临床应用价值和前景。方法对2006年至2010年间实施腹股沟疝充填式无张力疝修补与传统疝修补的两组病例（两组病例均为90例）的手术时间、术后疼痛程度、感染、初次下地时间、住院天数、恢复劳动能力时间、术后复发率等各方面进行对照分析研究。结果腹股沟疝充填式无张力修补术较传统修补术具有手术时间短、术后疼痛轻、术后复发率低、术后感染无增加、无排异反应及异物感等优点。结论腹股沟疝充填式无张力修补术对腹股沟疝的解剖缺陷有针对性,符合生理,创伤小、修补快、并发症少、恢复快、复发率低、手术适应证宽,在基层医院具有广泛应用前景。     

5 Hz和20 Hz磁场对中脑神经干细胞分化的影响

目的：观察5Hz和20Hz磁场（EMF）对新生大鼠中脑神经干细胞神经元向分化的影响。方法：神经干细胞分别置于5Hz和20Hz正弦交变磁场（8mT）中诱导变化，每天上午、下午各1次，每次15min，分别作用于1d、5d或10d，同时设立相应的对照组。利用神经元特异性标记物MAP2抗体进行免疫荧光染色，计数MAP2阳性细胞的百分比。结果：5Hz和20Hz交变磁场干预1d，均出现对NSC分化方向的显著影响，即促进NSC神经元的分化；20Hz电磁场随干预时程的延长，NSC分化为神经元的比例逐渐增高，以10d组神经元比例最高；5Hz磁场干预5d时神经元比例最高，10d时有所下降，但仍高于对照组；20Hz磁场效应在10d时显著大于5Hz磁场。结论：5Hz和20Hz电磁场以不同的效应模式促进NSC神经元向的分化，电磁场可以成为NSC定向分化研究的重要手段之一。     

重组睫状神经营养因子对胶质瘤细胞形态和基因表达的影响

重组睫状神经营养因子对胶质瘤细胞形态和基因表达的影响张树辉詹洲陶霞田野苹何成作者单位：２２１００４解放军第九七医院病理科［张树辉（现在４０００３８第三军医大学病理学教研室）、陶霞］；第二军医大学病理学教研室（詹洲、田野苹、何成）研究表明，睫状神经...     

脊髓火器伤后GDNFmRNA表达的实验研究

目的观察脊髓火器伤后GDNFmRNA的表达变化并探讨其意义。方法利用民用射钉枪建立大鼠脊髓火器损伤模型,不同时间采用半定量RT-PCR方法,观察T12～L1段脊髓GDNFmRNA表达的变化。结果脊髓损伤前,GDNFmRNA在T12～L1段脊髓微量表达,脊髓损伤后表达逐渐减少,伤后1、4、7、10d分别减少25%、71%、82%、86%。结论脊髓GDNFmRNA表达减少,是由于失去靶组织转运GDNFmRNA所造成,这为外源性GDNF治疗脊髓火器伤提供了理论依据。     

幼龄和老龄大鼠液压脑损伤后NGF、Bcl-2、Bax蛋白的表达

目的:研究衰老因素对神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)表达的影响,探讨老年颅脑损伤恢复不良的分子生物学机制。方法:采用侧方液压打击颅脑损伤模型,应用免疫组化方法和计算机显微图像分析技术,比较幼龄(2～3个月)和老龄(15个月)大鼠脑损伤后12 h脑内NGF、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的差异。结果:液压打击伤后NGF、Bcl-2、Bax蛋白在损伤侧大脑皮质、海马表达明显增强,老龄组大鼠伤侧皮质NGF蛋白表达和Bcl-2/Bax蛋白表达比率显著低于幼龄组(P<0.05)。结论:老龄和幼龄大鼠液压脑损伤后NGF、Bcl-2和Bax蛋白表达的差异提示老龄哺乳动物受损神经元修复和生存能力下降,为认识创伤性脑损伤后年龄相关性神经功能缺失的病理生理学机制提供了帮助。     

周围神经损伤后外源性神经生长因子及睫状神经营养因子对神经元的保护作用

目的：研究周围神经损伤后神经生长因子（ＮＧＦ）、睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对神经元的保护作用。方法：以硅管套接大鼠坐骨神经，局部及皮下分别应用ＳＡＬ（生理盐水）、ＮＧＦ和ＣＮＴＦ。术后２周，应用酶组织化学方法显示相应节段脊髓前角运动神经元和脊神经节感觉神经元中胆碱脂酶（ＣＨＥ）、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）酶活性并结合计算机图像分析。结果：与正常侧相比，ＳＡＬ组两类神经元中ＣＨＥ活性显著减弱，ＡＣＰ活性显著增强；ＮＧＦ组感觉神经元两酶活性变化不显著，运动神经元两酶活性有显著变化；ＣＮＴＦ组的结果与ＮＧＦ组相反。结论：周围神经损伤后，外源性ＮＧＦ主要保护感觉神经元，ＣＮＴＦ主要保护运动神经元。     

重组睫状神经营养因子对受损周围神经施万细胞相关基因表达的作用

目的研究重组睫状神经营养因子(CNTF)对受损周围神经施万细胞基因表达的作用。方法用硅管套接切断的大鼠坐骨神经，在受损神经局部给予重组CNTF，术后用免疫组织化学ABC法结合计算机图像分析观测S100蛋白(S100)、生长相关蛋白-43(GAP-43)、磷酸化酪氨酸(PTyr)、信号转导子和转录激活子(STAT)3的免疫反应阳性物质在修复侧远段神经的分布和相对含量。结果CNTF组修复侧远段神经相应区域S100、GAP-43、PTyr、STAT3阳性物质的含量显著或非常显著高于生理盐水组。结论重组CNTF能上调受损神经施万细胞S100、GAP-43、PTyr和STAT3的表达，提示重组CNTF通过强化受损神经施万细胞JAK-STAT途径，E调其S100和GAP-43的基因表达。     

不同化学物质对新生大鼠中脑神经前体细胞神经元生成的影响

目的：观察新生大鼠中脑神经前体细胞对不同化学物质的反应性，以期找到体外有效增加其神经元生成的化学物质。方法：建立新生大鼠中脑神经前体细胞的培养体系，分别被各种化学物质诱导分化，利用神经元特异性标记物进行免疫细胞化学染色，检测不同化学物质诱导神经元生成的比例。结果：白介素-1α促新生大鼠中脑神经前体细胞的神经元生成，天麻素、胶质源性神经营养因子和睫状神经营养因子呈抑制效应，雌二醇、葛根素、牛蒡子苷、人参皂甙Rg1无明显作用。结论：新生大鼠中脑神经前体细胞的分化方向可被环境信号调控。白介素-1α是上述化学物质中唯一有望增加植入后神经元产量的细胞因子。