泌尿外科留学生示教体会及思考

对泌尿外科留学生见习教学经验进行总结并进一步对教学方法进行探讨。教学成功的经验包括：充分的课前准备;互动式教学;让学生成为课堂的主体;重视泌尿外科教具应用。并对如何进一步提高教学效果进行探讨。     

E2F-3,pRb蛋白在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨细胞周期调控因子E2F-3和pRb蛋白在前列腺癌发病机制中的作用及其临床意义。方法应用免疫组化E liV isionTMp lus二步法检测49例前列腺癌(prostate cancer,PCa)标本,20例良性前列腺增生(ben ign prostatichyperp lasia,BPH)及10例正常前列腺组织(norm al prostate,NP)中E2F-3与pRb蛋白的表达。结果E2F-3在PCa、BPH与NP中的阳性表达率为63.27%(31/49),20%(4/20)和10%(1/10),PCa中E2F-3的水平明显高于BPH(P<0.05)及NP(P<0.05),且与PCa病理分级临床分期呈正相关(rs分别为0.487、0.517,P<0.05)。pRb中在PCa,BPH与NP中的阳性表达率为44.90%(22/49),80%(16/20),90%(9/10),PCa中pRb的水平明显低于BPH及NP(P<0.05),且与PCa病理分级、临床分期呈负相关(rs分别为-0.401、-0.468,P<0.05)。E2F-3表达与pRb表达呈负相关(rs=-0.617,P<0.01)。结论E2F-3对PCa的发生发展发挥有重要的作用,且其表达与pRb蛋白的异常表达密切相关。     

维迪西妥单抗联合替雷利珠单抗在膀胱癌新辅助治疗中的疗效和安全性分析

目的评估维迪西妥单抗联合替雷利珠单抗在膀胱癌新辅助治疗中的疗效和安全性。方法回顾性分析2022年4月至2023年1月于重庆医科大学附属第一医院接受维迪西妥单抗联合替雷利珠单抗行新辅助治疗的16例膀胱癌患者的临床资料。男15例, 女1例;年龄(66.12±14.37)岁。新辅助治疗前影像学评估肿瘤分期T2N0M0期5例, T3N0M0期11例;活检病理为低级别尿路上皮癌3例, 高级别尿路上皮癌13例;活检病理免疫组化染色示HER-2(0)、(+)、(++)、(+++)分别为1、6、6、3例。新辅助治疗方案:维迪西妥单抗120 mg, 每2周为1个周期, 共4个周期;替雷利珠单抗200 mg, 每3周为1个周期, 共3个周期。新辅助治疗后行影像学检查评估靶病灶变化情况。分析新辅助治疗的疗效及不良反应。结果 16例均完成新辅助治疗。16例中5例完全缓解, 7例部分缓解, 3例疾病稳定, 1例疾病进展。12例(75.0%)客观缓解, 15例(93.8%)疾病控制, 14例(87.5%)目标病灶较基线缩小。在9例HER-2阳性(++/+++)和7例HER-2阴性(0/+)患者中分别有2例(22....     

FK506对大鼠缺血再灌注肾TNF-α,p38MAPK蛋白表达的影响

【目的】探讨FK506对肾缺血再灌注不同时间TNF-α,P^38MAPK蛋白表达的影响。【方法】SD大鼠90只,随机分为三组：假手术（sham）组,缺血再灌注（IR）组,FK506＋缺血再灌注（FK506A-IR）组。FK506＋IR组于缺血前6h经尾静脉注射FK506（0．3mg／kg,用生理盐水稀释至0．1ml）;IR组于缺血前6h经尾静脉注射等量生理盐水;sham组仅开腹、分离肾动脉,不阻断血流。采用HE染色分析肾组织病理损伤程度,免疫组化二步法检测TNF-α,P^38MAPK蛋白表达的变化。【结果】TNF-α蛋白以在近端小管上皮细胞表达为著,缺血45min,再灌注2h有少量表达,再灌注6h,12h及24h呈阳性表达,12h达高峰,FK506A-IR组肾组织TNF-α蛋白水平显著低于IR组（P〈0．05）。P^38MAPK蛋白主要在远端小管上皮细胞表达,缺血45min,再灌注2h有少量表达,再灌注6h,12h及24h呈阳性表达,6h达高峰,FK506A-IR组肾组织p^38MAPK蛋白水平显著低于IR组（P〈0．01）。HE染色可见IR组肾小管上皮细胞有不同程度的片状坏死灶和炎性细胞浸润,FK506A-IR组肾组织损伤明显减轻。【结论】FK506可能通过下调TNF-α,P^38MAPK蛋白表达水平,减轻肾缺血再灌注损伤。     

吉西他滨诱导膀胱癌T24细胞自噬的实验研究

目的 观察吉西他滨(gemcitabine,GEM)处理膀胱癌T24细胞后引起凋亡的同时是否诱导T24细胞自噬的产生,并初步探究其自噬产生的机制,以及自噬与凋亡之间的关系.方法 体外培养T24细胞,应用CCK-8法测定细胞抑制率;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP的活化,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ、底物蛋白P62和自噬潮,以及JNK通路相关蛋白Jnk1、P-Jnk、Bcl-2的表达情况;并通过透射电镜观察细胞超微结构自噬体的变化;Annexin V-PI双流式细胞术检测抑制自噬后细胞凋亡率的变化情况.结果 CCK-8检测结果显示吉西他滨能有效抑制膀胱癌T24细胞增殖;1.0 μg/mL吉西他滨处理T24细胞4h即可发生明显的自噬,透射电镜观察可见自噬体小体的形成;Western blot检测结果显示吉西他滨作用T24细胞后cleaved-Caspase-3、PARP和LC3-Ⅱ表达增高,P62表达降低;P-Jnk出现活化,Bcl-2发生降解;而抑制自噬后能显著增强吉西他滨诱导的膀胱癌T24细胞的凋亡.结论 吉西他滨介导膀胱癌T24细胞凋亡的同时又诱导保护性自噬,JNK信号通路参与调控其自噬的发生,抑制自噬可以明显增强膀胱癌T24细胞对吉西他滨的化疗敏感性.     

E2F3蛋白在前列腺癌中的表达及意义

目的:探讨E2F3蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义.方法:应用免疫组化EliVisionTM plus二步法,检测49例前列腺癌(PCa),20例良性前列腺增生(BPH)及10例肾移植正常前列腺(NP)组织中E2F3蛋白的表达,分析E2F3蛋白在前列腺癌组织中的表达及血清PSA和预后的关系.结果:PCa中E2F3的水平明显高于BPH(P＜0.05)及NP(P＜0.05),且与PCa病理分级临床分期和血清PSA及预后有密切的联系.结论:E2F3可作为前列腺癌新的标志物.检测E2F3有助于判定前列腺癌恶性程度及预后.     

凋亡抑制基因survivin在膀胱移行细胞癌中表达的初步研究

目的:探讨新的凋亡抑制基因 survivin在膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell cancer,BTCC)中的表达,及其与p53、bcl-2和ki67基因表达的相关性.方法:应用免疫组织化学链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP法),检测survivin、bcl-2、p53和ki67在58例BTCC中的表达,另选10例癌旁正常组织作对照.结果:survivin基因在癌旁正常组织中无表达,而在BTCC中呈高表达,survivin的表达与BTCC的临床分期和病理分级密切相关.58例BTCC中,41例表达阳性,占70.7%.同时发现survivin的表达与p53、bcl-2、ki67的表达也密切相关.结论:survivin基因的过度表达单独或和p53、bcl2、ki67协同在BTCC的发生发展中起重要作用,其过度表达提示BTCC预后不良.survivin可能会成为膀胱移行细胞癌一个新的诊断指标和治疗的靶点.     

经阴道无张力尿道悬吊带治疗女性压力性尿失禁(附37例报告)

目的 探讨经阴道无张力尿道悬吊带(Tension-free vaginal tape，TVT)方法治疗女性压力性尿失禁的临床疗效。方法 采用TVT术式治疗女性压力性尿失禁患者37例。利用弧形Trocar穿刺针将TVT从阴道前壁切口放置于尿道中段下方，术后24h拔除导尿管自行排尿。结果 2例患者拔除导尿管后出现急性尿潴留，经扩张尿道，保留导尿后恢复正常排尿。37例随访3-16个月，平均13个月，无尿失禁复发。结论 TVT治疗女性压力性尿失禁疗效满意，手术简单，安全可靠，无严重并发症。     

C_(57)BL小鼠survivin基因miRNA表达载体的构建

背景:Survivin在多种肿瘤组织中的高表达,具有调节细胞增殖分裂和强大的抗凋亡功能.目的:利用RNA干扰技术,构建具有特异性阻断C_(57)BL小鼠survivin基因的微小RNA(micro RNA,miRNA)表达载体.设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-06/11在重庆医科大学附属第一医院神经内科实验中心完成.材料:环形pcDNA~(TM)6.2-GW/EmGFPmiR和BLOCK-iT~(TM) Pol II miR RNA干扰 Expression Vector Kit with EmGFP为Invitrogen公司产品;DH5a大肠杆菌为实验室保存;xho I和BamH I酶、壮观霉素均为上海生工生物工程有限公司产品.方法:应用设计软件在C_(57)BL小鼠survivin基因的mRNA上寻找特异性的短核苷酸序列,并设计合成4对寡核苷酸序列,经退火后形成双链DNA片段,采用基因克隆技术,将其克隆到pcDNA~(TM)6.2-GW/EmGFPmiR的载体中,转化DH5a大肠杆菌,挑单菌落种于含有壮观霉素LB液体培养基中,提取质粒.主要观察指标:应用测序法和琼脂糖电泳检测对重组体进行鉴定.结果:测序结果显示插入片段与线性载体连接正确,无碱基突变、缺失、插入等异常.双酶切处理pcDNA~(TM)6.2-GW/EmGFP-miR重组质粒结果显示片段大小与预期相符.结论:实验结果表明成功构建了C_(57)BL小鼠survivin基因的微小RNA表达载体.     

siRNA干扰HMGB1表达对膀胱癌T24株细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制

目的:探讨高迁移率族蛋白1(high-mobility group box 1,HMGB1)对膀胱癌T24株细胞的增殖、凋亡及恶性生物学行为的影响及其潜在作用机制.方法:收集2014年12月至2016年1月期间重庆医科大学附属第一医院泌尿外科病区手术切除的20例膀胱癌以及相应癌旁组织,免疫组化方法检测膀胱癌和癌旁组织HMGB1表达差异;应用RNAi处理T24细胞并分为空白对照组(Blank)、阴性对照组(NC)和干扰组(siHMGB1);CCK-8、流式细胞术、划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测HMGB1敲低后对T24细胞增殖、凋亡、周期、迁移以及侵袭能力的影响;Western blotting检测不同膀胱癌细胞株BIU-87和T24细胞的HMGB1表达水平以及敲低HMGB1对T24细胞恶性生物学行为相关蛋白的影响.结果:与癌旁组织相比,HMGB1在膀胱癌组织处于高表达状态[(67.33±4.91)vs (12.00±3.79),P＜0.05].与NC组和Blank组相比,siHMGB1组细胞增殖受抑制(P＜0.05);流式细胞术提示敲低HMGB1后细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G0/G1期;划痕实验及Tran-swell侵袭实验显示,敲低HMGB1后细胞迁移(P＜0.05)以及侵袭[穿膜细胞数:(16.33±1.45)vs(35.00±1.53)、(34.00±2.08)个,均P＜0.05]能力减弱;Western blotting结果显示敲低后E-钙黏着蛋白表达上调(P＜0.05),N-钙黏着蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶(metrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、细胞周期蛋白D1、c-Myc、β-联蛋白表达下调(均P＜0.05).结论:HMGB1可通过促进膀胱癌细胞EMT进而增强其恶性生物学行为,其机制可能是通过β-联蛋白信号通路介导.