反义bcl—2寡脱氧核苷酸对U937细胞增殖和存活能力的影响

本实验观察了与人类ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ翻译起始部位相互补的硫代反义ｂｃｌ－２寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ｏＯＤＮ）对Ｕ９３７细胞增殖和存活能力的影响，结果表明：一定浓度的ＡＳ－ｓＯＤＮ可明显抑制细胞Ｂｃｌ－２蛋白的表达，但对细胞增殖和存活能力无明显影响。这一研究结果为在不同表达ｂｃｌ－２的肿瘤细胞中探讨ｂｃｌ－２反义核酸作用的普遍性和正确评价其作用地位积累了资料。     

甘氨酸/丝氨酸置换146位半胱氨酸对sBAFF功能的影响

目的探讨甘氨酸/丝氨酸置换146位半胱氨酸对sBAFF功能的影响,为深入探讨sBAFF的功能和机制奠定基础.方法采用一步反向PCR法,将编码sBAFF第146位半胱氨酸(Cys)的核苷酸序列置换为甘氨酸(G)和丝氨酸(S)的编码序列,测序正确后,亚克隆到高效原核表达载体pQE-80L;以IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测表达产物,Ni2 -NTA柱层析纯化目的蛋白;最后经MTT法检测其促B淋巴细胞增殖活性.结果经一步反向PCR扩增后均得到459 bp的DNA片段,经测序分析表明分别为sBAFF 第146位半胱氨酸残基点突变为甘氨酸和丝氨酸的序列,目的蛋白在大肠杆菌中得到高效表达.活性检测证实其能明显刺激B淋巴细胞系Raji细胞增殖,与正常sBAFF相比,置换为丝氨酸后活性升高,置换为甘氨酸后活性无明显改变.结论在原核表达时,通过置换146位半胱氨酸为丝氨酸可明显提高sBAFF的活性,为进一步探讨sBAFF的功能机制奠定了基础.     

重组人BAFF112-285的制备及活性分析

目的 制备具有功能活性的重组人TNF家族的B细胞激活因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)胞外区112—285氨基酸残基段(rhBAFF112—285)，为BAFF的深人研究奠定基础。方法 提取人HL-60细胞总RNA，经RT—PCR扩增编码人BAFF胞外区112—285氨基酸残基(BAFF112—285)的cDNA，行序列测定后，构建于原核表达载体pQE—80L并转化大肠杆菌DH5α，经IPTG诱导表达rhBAFF112—285，Ni^2 —NTA层析纯化，进而经^3H—TdR掺人实验检测其免疫学活性。结果 RT—PC双扩增得到了525bp的DNA片段，序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF112—285的cDNA序列一致，该胞外区片段在大肠杆菌中获得了高效表达，表达水平达细菌总蛋白的45．7％，经纯化后纯度可达98．4％，活性检测证实其能明显刺激外周血淋巴细胞活化。结论 利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF112—285，所获纯化产物具有生物学活性，所获结果为进一步研究创造了条件。     

miR-134通过下调叉头盒蛋白M1抑制肝细胞癌细胞增殖

目的 探讨miR-134下调叉头盒蛋白M1 (forkhead box M1,FOXM1)的机制及其影响肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的作用.方法 应用CCK-8法检测miR-134对HCC细胞增殖的作用;经Western blot和Real-time PCR检测人正常肝细胞L02和5种HCC细胞系中FOXM1和miR-134的表达;用miR-134模拟物(miR-134 mimic)或miR-134抑制剂(miR-134 inhibitor)转染HCC细胞后,经Western blot和Real-time PCR检测FOXM1及其下游靶基因CyclinD1的表达;应用生物信息学分析miR-134在人FOXM1 3'-UTR的可能结合位点,通过报告基因检测实验分析miR-134与FOXM1的3'-UTR的特异性结合;将miR-134 mimic和FOXM1表达质粒(无3'-UTR)共转染于HCC细胞后,经CCK-8法检测细胞的增殖情况.结果 miR-134可显著抑制HCC细胞增殖(P＜0.05);与人正常肝细胞L02相比,miR-134在HCC细胞中的表达明显降低(P＜0.05),而FOXM1蛋白表达明显增强,二者存在负相关(R2=0.705,P＜0.05);miR-134可显著下调FOXM1蛋白及其下游靶基因CyclinD1的表达(P＜0.05);报告基因检测实验证实miR-134可特异性结合于FOXM1 mRNA的3'-UTR(P ＜0.01);细胞增殖实验检测结果显示,过表达缺失3'-UTR的FOXM1可显著减弱miR-134对HCC细胞增殖的抑制效应(P＜0.05).结论 miR-134通过靶向结合于FOXM1的3'-UTR而下调FOXM1蛋白的表达,从而抑制HCC细胞的增殖.     

人源性胃癌抗体IgG1Fab噬菌体表面展示文库的构建

目的　利用噬菌体表面展示技术 ,构建人源性胃癌抗体 Ig G1Fab噬菌体表面展示文库 .方法　从胃癌手术患者胃一级站淋巴结中提取总 RNA,反转录成 c DNA后 ,用PCR扩增人 Ig G1Fd段及κ轻链 ,并克隆至噬菌粒载体p COMB3中 ,转化宿主菌株 XL 1- Blue,以辅助噬菌体M13K0 7超感染噬菌粒文库 ,构建成人源性胃癌抗体 Ig G1Fab噬菌体表面展示文库 .结果　得到一个含克隆数为 1.2× 10 6 ,实际滴度约为 2 .5 6× 10 1 5 pfu· L- 1的 Ig G1Fab片段的噬菌体表面展示文库 .结论　Ig G1Fab片段的噬菌体表面展示文库的成功构建 ,为下一步利用亲和富集筛选技术 ,获得具有胃癌表面抗原结合活性的融合抗体及可溶性抗体奠定了基础     

长程高脂饲料对雌雄大鼠胰岛功能损害差异的探讨

目的动态观察长程高脂饲料对雌雄大鼠糖耐量和胰岛素作用的影响，并探讨其可能的机制。方法取正常SD大鼠100只，抽签式随机分组，其中雄性和雌性大鼠普通饲料组各20只，雄性和雌性大鼠高脂饲料组各30只。每个月动态监测大鼠体质量及空腹血糖的变化，在第14个月时进行腹腔注射糖耐量试验（IPGTT），检测葡萄糖耐量减退（IGT）的情况，测定第14个月时的空腹胰岛素分泌量及大鼠胰腺组织匀浆液中线粒体和微粒体的丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）和过氧化氢酶（calalase，CAT）水平。结果第14个月时无论普食组或高脂组雄性大鼠腹腔注射糖耐量都受损，而雌性大鼠都未达到糖耐量受损，腹腔糖耐量测试表明雌雄大鼠在120min时血糖有显著性差异（P〈0．05）；14个月时高脂组雄性大鼠空腹胰岛素分泌量显著高于雌性大鼠（P〈0．05）；胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）显示高脂组雄性大鼠胰岛素抵抗程度较雌性大鼠显著升高（P〈0．05）；早相胰岛素分泌功能显示经过长程高脂喂养，雄性大鼠早相胰岛素分泌功能显著低于雌性大鼠（P〈0．05）；胰腺组织匀浆液中线粒体的MDA、细胞质的GSH和CAT的水平雌雄大鼠间虽然无显著性差异（P〉0．05），但总体趋势是无论是普食组还是高脂组，雄性大鼠氧化应激水平都高于雌性大鼠，抗氧化应激水平都低于雌性大鼠。结论雌性大鼠具有抵抗高脂诱导的糖耐量受损作用，其胰腺组织氧化应激水平较低可能是机制之一。     

ICE样蛋白酶与细胞凋亡

<正>细胞凋亡在维持多细胞有机体的正常发育、平衡机体内环境、抗御病毒入侵、预防细胞癌变等多方面都具有重要作用,ICE(IL-1βconverting enzyme)样蛋白酶因其与细胞凋亡的调控密切相关而越来越受到人们的广泛关注。本文仅就哺乳类ICE样蛋白酶与细胞凋亡的关系进行简要综述。     

适应“五改四”要求的生化教学新举措

“五改四”是一种新的课堂教学形式。为适应这一改变，切实搞好生化教学，本教研室在提高思想认识的基础上，从教学内容，教学手段，教学组织和管理，与相关学科协作，密切与学员的联系等诸多方面都采取了一些新的措施，旨在真正提高教学质量，培养高素质型人才。     

探索教学法在分子生物学教学中的实践研究

近年来，我校在临床医学、预防医学和检验医学等不同专业五年制本科的分子生物学教学中进行了“探索教学法”尝试。通过对300名学生进行问卷调查，结果表明：有90％的学生认为探索教学法能激发学生的学习兴趣，提高思维能力，并能引导同学们将分子生物学理论和临床实际相联系。进一步分析发现，上述结果在不同专业的五年制学生之间没有显差异。