缬沙坦对人肾近端小管上皮细胞TGF-β/Smad信号途径的影响

目的观察缬沙坦对TGF-β刺激人肾近端小管上皮细胞表达Smad的影响。方法以人肾小管上皮细胞(HKC)为对象,分为正常对照组;TGF-β1刺激组;缬沙坦组。Western blot检测p-Smad2/3、smad2/3、Smad7以及细胞上清ColⅠ蛋白含量;RT-PCR检测Smad2 mRNA和Smad7 mRNA水平。MTT法检测刺激组及缬沙坦组在不同时间、不同药物浓度对细胞增殖状态的影响。结果①Western blot显示,与TGF-β1刺激组相比,缬沙坦使Smad2/3、p-Smad2/3蛋白的表达下降,ColⅠ分泌显示相同趋势,而Smad7蛋白的表达没有变化。②半定量RT-PCR显示,与TGF-β1刺激组相比,缬沙坦组Smad2 mRNA降低,Smad7 mRNA无变化。③MTT法检测显示不同浓度缬沙坦对TGF-β1刺激所引起的细胞增殖受抑制现象均有改善,并且随药物浓度的增加该作用增强。结论提示缬沙坦的肾脏保护作用可能部分是通过抑制TGF-β/Smads信号途径实现的。     

苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质JAK/STAT信号蛋白磷酸化的影响

目的: 探讨血管紧张素Ⅱ转换酶抑制剂苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3信号蛋白表达的影响。方法: 雄性Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病组和苯那普利治疗组。腹腔注射STZ诱发糖尿病大鼠模型，治疗组每日灌胃给予苯那普利10 mg/kg，共2周。采用免疫沉淀和Western blotting检测JAK2磷酸化，Western blotting检测肾皮质p-STAT1、p-STAT3和TGF-β₁蛋白的表达，半定量RT-PCR检测肾皮质细胞TGF-β₁ mRNA的表达。结果: 糖尿病组肾皮质p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3及其TGF-β₁表达明显高于对照组，同时TGF-β₁ mRNA表达亦明显强于对照组；苯那普利治疗组p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达低于糖尿病组，同时TGF-β₁ 蛋白及其mRNA 表达亦低于糖尿病组。结论: JAK/STAT信号途径可能参与糖尿病早期肾脏变化的过程，苯那普利的肾脏保护作用可能部分是通过影响JAK/STAT信号途径的激活而实现。     

细胞因子信号传导抑制蛋白1对糖基化终末产物诱导的肾小管细胞转分化的影响

目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾小管上皮细胞(HKC)转分化及JAK/STAT信号通路的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆。分别采用白蛋白和AGEs进行刺激。采用Western印迹检测SOCS-1、α-SMA、E-钙黏着糖蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原(collagenI,ColI)、信号转导和转录活化因子1、3(STAT1、STAT3)及其磷酸化蛋白(p-STAT1、p-STAT3)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和E-cadherin mRNA的表达。结果与对照组相比,AGEs组肾小管细胞α-SMA和ColI蛋白表达明显上调,细胞培养上清中TGF-β1含量增加,α-SMA mRNA的表达增加,而E-cadherin蛋白和mRNA表达下调。SOCS-1过表达能够抑制AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA和ColI的表达及STAT1和STAT3的磷酸化,减少TGF-β1的含量,下调AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA mRNA的表达,同时能够逆转AGEs刺激引起的HKC细胞E-cadherin蛋白和mR-NA的下调表达。结论SOCS-1过表达抑制AGEs诱导的肾小管上皮细胞转分化可能是通过抑制JAK/STAT信号通路活化实现的。     

固醇调节元件结合蛋白1对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转化生长因子β1和纤连蛋白表达的影响

肾小球硬化和肾小管间质纤维化是糖尿病肾病的重要病理特征[1].转化生长因子β(TGF-β1)可通过多种信号转导途径介导细胞外基质的沉积而引起纤维化[2,3].固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory element binding protein 1,SREBP-1)是一种核转录因子,对脂肪酸、三酰甘油合成有重要调控作用[4].     

结缔组织生长因子mRNA表达在肾间质纤维化的作用

肾间质纤维化是多种肾脏疾病走向肾功能衰竭的共同病理过程.其发病机制与细胞因子表达、细胞凋亡等多因素相关。结缔组织生长因子（CTGF）mRNA在大鼠肾间质纤维化中作用相关研究已成为一个研究热点。本研究旨在通过观察CTGFmRNA的分布与表达,为CTGF在肾间质纤维化发病机制中的关键作用提供一定的证据。     

骨桥蛋白在糖尿病大鼠肾组织中的表达及意义

目的 观察糖尿病大鼠肾组织中骨桥蛋白(OPN)的表达及其与巨噬细胞(CD68)、细胞增殖核抗原(PCNA)之间的关系,初步探讨其在糖尿病肾损害中的意义.方法 雄性Wistar大鼠被随机均分为对照组和糖尿病组,每组24只.腹腔单次注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病大鼠模型,采用免疫组化和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)分别检测OPN、CD68及PCNA在肾组织的表达,原位杂交检测肾组织中OPN mRNA的表达.结果 与对照组比较,糖尿病组大鼠在注射STZ后1、2、4和8周,血糖、尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白定量显著增高,肌酐清除率(CCr)显著降低;OPN表达呈进行性增加并明显高于对照组(P均＜0.05);1周和2周时PCNA表达高于对照组,4周和8周时CD68表达较对照组略有增高.结论 OPN在糖尿病肾损害过程的早期可能与肾小管上皮细胞增殖有关,后期可能趋化巨噬细胞浸润.     

TGF-β1激活smad信号通路影响人肾小管上皮细胞增殖与凋亡

目的 观察TGF-β1通过smad信号通路影响人肾小管上皮细胞凋亡与细胞增殖的变化.方法 以人肾小管上皮细胞为对象,应用TGF-β1刺激,通过Western blot及RT-PCR的方法来观察p-smad2/3蛋白和smad2/3蛋白及其mRNA的表达.同时通过流式细胞学观察细胞凋亡与周期的变化.MTT法检测细胞增殖水平.结果 人肾小管上皮细胞在TGF-β1刺激后,较对照组、p-smad2/3蛋白和smad2/3蛋白及其mRNA的表达有着显著的升高.细胞凋亡百分率同时明显升高,细胞周期G0/G1比例显著升高,S期、G2/M期比例显著降低.细胞增殖水平明显受到抑制.结论 人肾小管上皮细胞smad信号通路能够被TGF-β1特异性的激活,并且介导细胞的凋亡,抑制细胞增殖.