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目的本研究旨在比较靶向bcl-2基因的反义mRNA和dsRNA对SP2/O细胞生长的抑制作用.方法采用MTT法,免疫荧光和免疫细胞化学技术,克隆形成试验及分光光度计测定细胞总蛋白含量等方法,分析比较了经体外转录获得的bcl-2反义mRNA利LdsRNA抑制SP2/O细胞生长、bcl-2特异性蛋白和总蛋白表达及其克隆原性的作用.结果检测结果证实bcl-2反义mRNA和dsRNA对上述指标均有抑制作用,两者比较dsRNA的抑制作用更强,持续时间也较长,作为对照的bcl-2正义RNA对上述指标无显著增强作用.提示LdsRNA对bcl-2高表达的肿瘤细胞有更强的抑制和杀伤作用,因此有可能用于这些肿瘤的临床治疗. 相似文献
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细胞间黏附分子 1(ICAM 1)又称CD5 4 ,是免疫球蛋白超家族中的单链跨膜球蛋白 ,其表达受多种因素 (如自身免疫病、创伤、白血病及细胞因子等 )的影响[1-4] 。ICAM 1与细胞迁移至炎性部位有关 ,也具有协同刺激T细胞功能的作用 ,在淋巴细胞活化及免疫应答过程中起重要作用[5] ,但 相似文献
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目的研究S1P5对食管鳞癌Eca109细胞黏附能力的影响。方法从人正常食管黏膜上皮克隆S1P5基因,构建表达载体S1P5-EGFP,转染Eca109细胞,经G418筛选,获得S1P5-EGFP/Eca109稳定细胞株。以对照载体Control-EGFP转染的Eca109细胞作为对照,荧光显微镜下观察细胞的形态,用黏附试验评价其黏附能力。结果成功构建S1P5-EGFP和Control-EGFP载体并转染Eca109细胞获得稳定细胞株。S1P5表达于细胞膜并使细胞略呈梭形改变。S1P5过表达致Eca109细胞黏附能力明显低于对照(P〈0.05),并且不受其配体1-磷酸鞘氨醇(S1P)的影响。结论 S1P5组成性抑制Eca109细胞的黏附能力,食管癌细胞可能通过下调S1P5的表达增强其黏附。 相似文献
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1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)是淋巴细胞表面的重要受体。为研究S1P1中ERY保守基序与FTY720诱导其内化的关系,以HA-S1P1-Myc-EGFP-N1为模板,应用重叠PCR的方法,将S1P1第142位的Arg(R)突变为Asn(N),连同N端HA标签一起,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体。同时PCR扩增野生型S1P1,克隆入pcDNA3.1(+)中。限制性酶切消化、PCR和测序鉴定后,经Polyfect转染入HEK293细胞。G418筛选出稳定细胞株。100 nmol/L FTY720处理12 h后,抗HA-PE抗体染色,用流式细胞仪检测S1P1在HEK293细胞上的表达情况。结果显示HA-S1P1(WT)-pcDNA3.1(+)和HA-S1P1(R142N)-pcDNA3.1(+)载体被成功构建,HA-S1P1(WT)和HA-S1P1(R142N)蛋白表达在HEK293稳定细胞株的表面。FTY720能诱导HA-S1P1(WT)内化,但不能诱导HA-S1P1(R142N)内化。提示FTY720诱导S1P1内化与ERY保守基序有关。 相似文献
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目的本研究旨在探索H2O2 诱导Hep-G2发生凋亡及其致凋亡发生的分子机制。方法采用免疫细胞化学技术与特异性抗体初步探索了经H2O2 处理的Hep-G2细胞Fas、bcl-2、P53、P21、Caspase3等与细胞凋亡和生长抑制基因的表达情况。结果检测结果表明H2O2 处理的Hep-G2细胞的Fas和Caspase3基因表达增加, bcl-2基因表达减少,而P53、P21基因的表达未见明显改变,提示Fas、Caspase3和bcl-2基因在H2O2 诱导的细胞凋亡中起重要作用;bcl-2通过抑制诱导凋亡所致的细胞永生化,可能在肿瘤的发生、发展中起重要作用。P53、P21、保持不变,可能反映了H2O2 诱导的细胞凋亡不依赖P53途径。 相似文献
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人P53基因位于17 号染色体短臂上(17p13.1) ,编码一个由393 个氨基酸组成的核磷酸蛋白,有调控细胞的生长,维持基因组的稳定,其突变、缺失在恶性肿瘤发生发展中起着非常重要的作用。为进一步探讨野生型P53 基因的抗肿瘤特性,我室采用分子克隆方法构建了重组野生型P53 真核表达载体(pxT1—P53) ,用磷酸钙—DNA 共沉淀法将其导入人肝癌HepG2 细胞内,通过标记基因NeOR 筛选带外源P53 基因的G418 抗药性克隆,对G418 抗药性克隆细胞的生长增殖和粘附能力进行观察。结果表明,导入野生型P53基因能使肝癌HepG2 细胞的生长增殖速度较对照细胞明显减慢,细胞粘附能力下降。提示野生型P53 基因能抑制肝癌细胞的生长。本研究为肝癌的P53 实验性基因治疗提供了一定的依据。 相似文献
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绿色荧光蛋白表达质粒的构建及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的构建能表达绿色荧光蛋白的载体———pCDNA3.1-GFP。方法使用基因重组方法从质粒pGreenlantern中获取绿色荧光蛋白基因片段,克隆入PCDNA3.1的多克隆区,构建成PCDNA3.1-GFP,通过限制性核酸内切酶NotI与BamHI对所建质粒进行分析后,转染HepG2细胞并观察绿色荧光蛋白表达。结果经限制性内切酶及转染HepG2细胞表达鉴定,证实成功构建了PCDNA3.1-GFP。结论成功构建成携有绿色荧光蛋白报告基因哺乳动物表达载体,该质粒可用于融合表达目的蛋白,并将目的蛋白表达定位。 相似文献